Toma de Muestras Sangre Perros Gatos

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    UNIVERSIDAD VERACRUZANA

    FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

    MANUAL PRCTICO DE TOMA Y MANEJO DEMUESTRAS EN PERROS Y GATOS

    TRABAJO RECEPCIONAL EN LA MODALIDAD DE:

    Trabajo Prctico Educativo

    COMO REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER EL TTULO DE

    MDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA

    PRESENTA:

    Erika Gordillo Cabrera

    ASESOR:

    MVZ. Nancy Prez Cisneros

    VERACRUZ, VER. JULIO 2010

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    DEDICATORIAS

    A Dios

    Por permitirme realizar esta meta, por darle salud a mis seres queridos y

    principalmente por cuidar a mi Pap que est en el cielo apoyndome y dndome

    sus bendiciones en todo momento.

    A mi mam Gloria M. Cabrera Zamudio

    Por haberme apoyado desde el inicio de mi carrera, dndome sus bendiciones,

    sus consejos, y por transmitirme su paz y tranquilidad en los momentos que msnecesitaba. Por desvelarse conmigo, en mis semanas de exmenes. Gracias

    A mis hermanos Armando, Delia y Gloria

    Por apoyarme desde siempre, por preocuparse siempre por m, por darme sus

    consejos.

    A mis Tos y primos

    Por su apoyo a lo largo de mi carrera, y por sus consejos.

    A mi novio Rogelio Caldern Olmos

    Por darme su apoyo, amor y comprensin, durante mis trabajos, exmenes etc.

    Por siempre decirme si puedes, por ayudarme a estudiar inmunologa, por

    cuidarme y valorarme.

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    AGRADECIMIENTOS

    A mi asesora Mvz. Nancy Prez Cisneros:

    Por ayudarme a realizar las tcnicas de cada toma de muestra, por preocuparse

    por m trabajo, por haber aceptado ser mi asesora, por estar ah con su cmara

    cuando yo no traa la ma, por dejarme realizar las tcnicas y poder aprender, por

    su paciencia, apoyo y comprensin. Y sobre todo a su perro roco por su

    disponibilidad en las tcnicas.

    A mis maestros que estuvieron a lo largo de mi carrera.

    Al mdico Canseco (Yopo) por apoyarme en la presentacin del trabajo, por

    aclarar mis dudas, por su apoyo, y sobre todo enorme paciencia.

    A Mvz. Jacqueline Pantoja O. (Jackita) por dejarme tomar fotos a sus pacientes, y

    por dejarme realizar las tcnicas necesarias para este manual, tambin por

    proporcionarme informacin sobre el tema.

    Al Qumico Francisco J. Lpez Vzquez (Pakito), por dejarme entrar a su

    laboratorio y tomar mis fotos. Tambin por ayudarme a conseguir el material

    adecuado para mis fotos.

    A Mvz. Genaro Cocom P. (Kokis), y a Ren por ayudarme a tomar las fotos,

    incluso por estar en ellas.

    A Rogelio Caldern por apoyarme en todo momento.

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    INDICE GENERAL

    Introduccin 1

    Justificacin 2

    Objetivo general 3

    Objetivos especficos 3

    1. Recoleccin, manejo y envo de muestras para hematologa en perros y gatos 4

    1.1. Material 4

    1.2. Tcnica vena yugular 8

    1.3. Toma de muestra vena ceflica 11

    1.4. Manejo 12

    1.5. Envo 12

    2. Toma, conservacin y envo de muestra de heces 14

    2.1 Material 14

    2.2 Tcnica con asa rectal 15

    2.3 Conservacin 16

    3. Toma de muestra de semen 17

    3.1. Material 17

    3.2. Tcnica

    3.3. Conservacin

    17

    19

    4. Toma, conservacin y envo de muestras en piel 20

    4.1. Raspados 20

    4.1.1. Raspado superficial de piel 20

    4.1.1.1. Material 20

    4.1.1.2. Tcnica 21

    4.1.2. Raspados profundos de piel 23

    4.1.2.1. Material

    4.1.2.2. Tcnica

    23

    23

    5. Toma de muestra de cultivo para dermatofitos 26

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    5.1. Material 26

    5.2. Tcnica

    5.3. Conservacin

    26

    28

    5.4. Tricograma

    5.4.1 Material

    5.4.2 Tcnica

    29

    29

    29

    6. Examen con lmpara de Word

    6.1 Material

    6.2 Tcnica

    30

    30

    30

    7. Cultivo bacteriano

    7.1 Material

    7.2 Tcnica8. Tcnicas de coleccin con hisopos de algodn

    8.1 Material

    8.2 Tcnica

    8.3 Envo

    9. Tcnica para muestras en cinta adhesiva

    9.1 Material

    9.2 Tcnica

    9.3 Tincin

    10. Obtencin de muestras para citologa

    10.1 Aspiracin con aguja fina

    10.1.1 Aspiracin de ndulos

    10.1.1.1 Material

    10.1.1.2 Tcnica

    10.2 Aguja fina simple sin aspiracin

    10.2.1 Material

    10.2.2 Tcnica

    10.3 Preparacin de los frotis

    10.3.1 Frotis en cruz

    10.3.2 Frotis estndar

    32

    32

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    10.3.3 Frotis lineales

    10.3.4 Impresiones

    11. Biopsia de piel (tcnica de sacabocados).

    11.1 Preparacin del sitio

    11.2 Biopsia excisional o incisional vs. Biopsia de perforacin

    11.3 Material

    11.4 Tcnica

    11.5 Envo

    12. Obtencin de muestras para biopsia

    12.1 Tcnica

    12.2 Tipos de biopsia

    12.3 Biopsias escisionales e incisionales12.4 Biopsia con aguja y con trocar

    12.4.1 Material

    12.5 Manipulacin de los tejidos y de las biopsias

    12.5.1 Muestras lquidas

    12.5.2 Muestras histolgicas

    12.5.3 Fijacin de la muestra

    13. Toma, conservacin y envo de muestras de orina

    13.1 Miccin espontnea

    13.1.1 Material

    13.1.2 Tcnica

    13.2 Cistocentsis

    13.2.1 Material

    13.2.2 Tcnica

    13.3 Cateterizacin

    13.3.1 Material

    13.3.2 Tcnica

    13.4 Conservacin

    14. Obtencin de muestras de cavidades corporales

    14.1 Toracocentsis

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    14.1.1 Material

    14.1.2 Tcnica

    14.2 Abdominocentsis

    14.2.1 Material

    14.2.2 Tcnica

    14.2.3 Conservacin

    14.2.4 Envo

    15. Bibliografas

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    NDICE DE FIGURAS Y CUADROS

    FIGURAS

    Figura 1. Agujas 4

    Figura 2. Tubos 4

    Figura 3. Sistema vacutainer 7

    Figura 4. Vena yugular 8

    Figura 5. Vena ceflica 8

    Figura 6. Vena safena 8

    Figura 7. Embrocado 9

    Figura 8. Presin dedo pulgar 1Figura 9. Puncin con sistema vacutainer 1

    Figura 10. Conservacin y envo de la muestra 1

    Figura 11. Material, recoleccin de heces 1

    Figura 12. Lubricante 1

    Figura 13. Toma de muestra 1

    Figura 14. Portaobjetos 1

    Figura 15.Cubreobjetos 1

    Figura 16. Extremo de vagina artificial bovina, adherida a un tubo estril. 1

    Figura 17. Estimulacin del pene 1

    Figura 18. Paciente en posicin para eyacular 1

    Figura 19. Material, raspado de piel 2

    Figura 20. Aceite para inmersin 2

    Figura 21. Raspado superficial en gato 2

    Figura 22. Portaobjetos 2

    Figura 23. Cubreobjetos 2

    Figura 24. Observacin al microscopio 2

    Figura 25. Presin de la piel 2

    Figura 26. Raspado profundo. 2

    Figura 27. Extendido de la muestra 2

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    Figura 28. Cubreobjetos 2

    Figura 29. Un cepillo dental estril puede ser empleado para recolectar pelos . 2

    Figura 30. La superficie del agar es tocada delicadamente con las cerdas del

    cepillo.

    2

    Figura 31. Inoculando el medio cultural 2

    Figura 32. Toma de muestra 2

    Figura 33. Toma de muestra 2

    Figura 34. muestra en portaobjetos 2

    Figura 35. Lmpara de Wood 3

    Figura 36. No se muestra fluorescencia en este paciente 3

    Figura 37. Material para hisopados 3

    Figura 38. Citologa vaginal 3

    Figura 39. Hisopado conjuntival 3

    Figura 40. Hisopado en mucosa oral 3

    Figura 41. Hisopado de odo 3

    Figura 42. Hisopado en ano 3

    Figura 43. Muestra de mucosa conjuntival 3

    Figura 44. Muestra de heces 3

    Figura 45. Muestra de citologa vaginal 3

    Figura 46. Embrocado 4

    Figura 47. Aspirado 4

    Figura 48. Liberacin de presin 4

    Figura 49. Aspirado para presin 4

    Figura 50. Portaobjetos 4

    Figura 51. Frotis en cruz 4

    Figura 52. Rasurado 4Figura 53. Embrocado 4

    Figura 54. Puncin de masa 4

    Figura 55. Puncin en varias direcciones 4

    Figura 56. Expulsin del contenido 4

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    Figura 57. Frotis en cruz 4

    Figura 58. Frotis estndar 4

    Figura 59. Frontis lineal 4

    Figura 60. Se traza un cuadrado alrededor de la muestra para biopsia 5

    Figura 61. El anestsico local se inyecta subcutneamente 5

    Figura 62. El instrumento de perforacin se coloca verticalmente sobre la

    superficie y se hace rotacin en una sola direccin.

    5

    Figura 63. La muestra es quitada sujetando su base con una pinza y cortndola. 5

    Figura 64. Si la muestra de la biopsia es delgada, sta se coloca sobre un cartn oabate.

    5

    Figura 65. Miccin espontnea 6

    Figura 66. Material para cistocentsis 6

    Figura 67. Se introduce la aguja 7

    Figura 68. Obtencin de la muestra 7

    Figura 69. Frasco estril de boca ancha 7

    Figura 70. Se retrae la piel y se introduce la sonda previamente lubricada 7

    Figura 71. Obtencin de muestra 7

    Figura 72. Obtencin de muestra 7

    Figura 73. Embrocado del paciente 7

    Figura 74. Puncin en perro 7Figura 75. Puncin en gato 7

    Figura 76. Toracocentsis en perro 7

    Figura 77. Toracocentsis en gato 7

    Figura 78. Obtencin de muestra 7

    Figura 79. Vlvula de tres vas 7

    Figura 80. Embrocado 7

    Figura 81. Puncin 8

    Figura 82. Obtencin de muestra 8

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    CUADROS

    Cuadro 1. Tubos para la obtencin de muestras 6

    Cuadro 2. Sistemas orgnicos y sus correspondientes tcnicas de biopsias 5

    Cuadro 3. Diferentes tipos de biopsias 6

    Cuadro 4. Tipos de agujas de biopsias 6

    Cuadro 5. Ventajas y desventajas de las tcnicas con aguja 6

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    INTRODUCCIN

    Diariamente durante la prctica mdica profesional tenemos la necesidad de

    establecer diagnsticos precisos que nos permitan seleccionar y administrar la

    terapia adecuada, de manera que est plenamente justificada en una situacin y

    una patologa particular. (Aguilaret al, 2005).

    En la actualidad para realizar stos diagnsticos contamos con la patologa clnica

    veterinaria, que constituye una disciplina que ha tenido una evolucin muy

    significativa en los ltimos treinta aos. (Aguilaret al, 2005).

    Con los resultados o diagnsticos que se obtienen a travs del anlisis de

    laboratorio, tambin se puede hacer un pronstico para tomar decisiones

    teraputicas. (Aguilaret al, 2005).

    La patologa clnica como especialidad incluye la formacin en hematologa

    clnica, bioqumica clnica y citologa clnica, los avances que se han tenido en

    stas reas, ahora nos permiten efectuar diagnsticos que, antes, eran muy

    difciles. Es importante la participacin de esta disciplina en gastroenterologa,

    dermatologa, endocrinologa, urologa, neurologa, oftalmologa, neumologa,

    neonatologa, infectologa, geriatra, etc. (Aguilaret al, 2005).

    La exactitud de las evaluaciones de laboratorio depende, en gran parte, de la

    calidad del procedimiento realizado durante la coleccin, la preparacin y el

    transporte de las muestras; por tanto, el xito del empleo del laboratorio esta

    relacionado con el cuidado que se procure desde la toma de las muestras, hasta la

    ejecucin de las tcnicas de anlisis y el informe de los resultados. (Aguilaret al,

    2005).

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    JUSTIFICACIN

    Como se mencion anteriormente, los exmenes laboratoriales son una

    herramienta indispensable para complementar un diagnstico, por lo que es

    necesario conocer las tcnicas adecuadas para la obtencin, preparacin y

    manejo de dichas muestras, con el fin de evitar errores en los resultados que

    conlleven a un diagnstico equivocado.

    Aunque existe una gran variedad de libros, revistas, pginas de internet, etctera,

    donde podemos encontrar tcnicas para la toma de muestras, no siempre

    podemos obtenerlas en un mismo texto, y nos vemos en la necesidad de acudir a

    varios, esa fue la razn por la cual se decidi realizar un manual donde explique

    de manera sencilla y didctica, las tcnicas ms comunes que se utilizan en la

    prctica diaria de clnica de perros y gatos.

    ste trabajo rene los mtodos necesarios para la obtencin, conservacin y

    envo de la muestra en un solo manual, evitando con esto que el mdico tenga

    que acudir a diversos textos, que tenga como consecuencia una prdida de tiempo

    que podra aplicar al paciente.

    Ya que no hay material fotogrfico en un solo texto, que contenga las tcnicas

    ms comunes que se practican en clnica de perros y gatos, en este manual se

    incluyen imgenes, que explique detalladamente las tcnicas y procedimientos

    adecuados para la toma, conservacin y envo de muestras en perros y gatos,

    tanto para mdicos que estn en la prctica profesional, as como para los que

    estn en formacin, ya que es la mejor forma de conocer la tcnica y poder

    realizarla adecuadamente.

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    OBJETIVO GENERAL

    Reunir en un solo trabajo los procedimientos ms comunes que se realizanen un consultorio veterinario para la obtencin y manejo de muestras.

    OBJETIVOS ESPECFICOS

    Que los profesionistas obtengan una gua para obtencin de muestras de

    manera adecuada.

    Un material didctico que sirva de apoyo para las experiencias educativas

    de clnica y medicina y ciruga de perros y gatos.

    ste manual est diseado con el fin de apoyar a estudiantes que estn

    interesados en la clnica de pequeas especies y a mdicos que ya estn

    en la prctica mdica profesional, apoyando con imgenes las tcnicas

    ms comunes en la toma de muestras en perros y gatos.

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    1. RECOLECCIN, MANEJO Y ENVO DE MUESTRAS PARA

    HEMATOLOGA EN PERROS Y GATOS.

    1.1. MATERIAL

    Agujas con tubos al vaco normalmente agujas de calibre 20 G, color

    amarillo, 21 G color verde, 22 G color negro con longitudes de 1 a 1

    pulgada, a seleccionar de acuerdo con el vaso sanguneo a puncionar.

    (Nez et al, 2007).

    Figura 1. Agujas

    Tomado de: www.klinika-medical.del/.../venble/kanuelen.jpg

    Figura 2. Tubos

    Tomado de: www.proveedormedico.com/TUBOSVACUTAINER.jpeg

    http://www.klinika-medical.del/.../venble/kanuelen.jpghttp://www.proveedormedico.com/TUBOSVACUTAINER.jpeghttp://www.proveedormedico.com/TUBOSVACUTAINER.jpeghttp://www.klinika-medical.del/.../venble/kanuelen.jpg
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    Tubos con EDTA, tapn lila, de capacidades 3.0 a 10.0 ml.

    Tubos con Citrato de Sodio, tapn azul claro, de capacidades de 3.0 a 10.0

    ml.

    Tubos con heparina, tapn verde.

    Tubos sin anticoagulante tienen tapn rojo, y vienen en capacidades de 3.0,

    5.0, 7.0 y 10.0 ml.

    Tubos de tapn amarrillo.

    Si no se tienen Vacutainer disponibles, se pueden utilizar jeringas de 3 ml

    con agujas del No. 22 de 1 a 1 1\2 pulgadas. (Nez et al, 2007).Torundas de algodn

    Alcohol al 70%

    Isodine espuma

    Ligadura

    Mquina para rasurar

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    CUADRO 1. TUBOS PARA OBTENCIN DE MUESTRAS

    Tomado de: Hematologa serie blanca, prcticas de laboratorio, Lpez, 2007.

    TAPON ANTICOAGULANTE SECTOR MATERIAL

    EDTA Hematologa

    Vidrio

    o

    plstico

    Gel separador

    com ativador de

    cogulo

    Serologa

    y

    bioqumica

    Vidrio

    o

    plstico

    Citrato

    de

    Sodio

    Hematologa

    (Coagulacin)Vidrio

    Siliconizado

    sin

    anti-coagulante

    Serologa

    y

    bioqumica

    Vidrio

    o

    plstico

    Heparina

    Sdica

    Bioqumica

    e

    Inmunologa

    Vidrio

    Fluorato de

    sdio + EDTABioqumica

    Vidrio

    o

    plstico

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    SISTEMA VACUTAINER

    AGUJA. CAMISA. TAPN. ETIQUETA. TUBO.

    Figura 3. Sistema Vacutainer

    Tomado de: Hematologa serie blanca, prcticas de laboratorio, Lpez, 2007.

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    1.2. TCNICA VENA YUGULAR

    Para obtener una muestra de sangre en perros y gatos se recomienda

    puncionar las venas ceflicas, safenas yugulares. (Figuras 4, 5, 6).

    Dependiendo de la talla de los animales, por ejemplo para perros pequeos

    y gatos, se recomienda tomar la muestra sangunea de vena yugular.

    (Nez, 2005).

    Figura 4. Vena yugular Figura 5. Vena Ceflica

    Figura 6. Vena safena

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    Un primer ayudante debe sujetar al perro en posicin decbito esternal

    sobre el borde de la mesa de exploracin. (Tachika, 2008).

    El ayudante sujetar el cuello y la cabeza del animal con una mano y con la

    otra mano sujetar ambos miembros torcicos, para evitar que el perro los

    mueva durante el procedimiento.

    El ayudante debe procurar que el cuello del perro se encuentre extendido

    para realizar la preparacin antisptica del mismo y prepararse para la

    venopuncin yugular.

    Se limpia la zona que va a puncionar con antispticos, como isodine

    espuma y alcohol al 70%, este debe secarse con una torunda, para evitar

    que penetre por capilaridad y se produzca hemolisis; que afecte la calidad

    de la muestra.Esto afecta la calidad de la misma, tanto para hemograma

    como para bioqumica y citologa. (Aguilaret al, 2005).

    Figura 7. Embrocado

    Para que la sangre se acumule en el interior de la vena seleccionada, se

    puede hacer presin sobre la regin lateral a la lnea media del cuello, justo

    craneal a la entrada del trax, para hacer que resalte la vena yugular.

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    Figura 8. Presin dedo pulgar

    Posteriormente se introduce en la vena, la aguja con el sistema Vacutainer,

    y se coloca el tubo segn el examen que se va a realizar, se deja llenar partes del tubo, y posteriormente se retira la aguja de la vena, y se coloca

    un algodn con alcohol, haciendo presin en donde se hizo la puncin.

    (Nez et al, 2005).

    Figura 9. Puncin con sistema vacutainer.

    Cuando se utiliza una jeringa sin anticoagulante para tomar la muestra, la

    transferencia al tubo se efecta sin aguja y el Vacutainer color lila sin tapn,

    dejando deslizar la sangre por la pared del tubo para evitar la hemlisis.

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    11

    Inmediatamente despus se tapa y se mezcla suavemente con el EDTA k3

    con un movimiento de sube y baja unas 10 veces, evitando agitar

    vigorosamente para mantener sin hemlisis la muestra.

    Si hay presencia de cogulos en la muestra, se debe realizar nuevamente.

    1.3. TOMA DE MUESTRA VENA CEFLICA

    Un primer ayudante debe sujetar al perro en posicin decbito esternal sobre

    la mesa de exploracin. El ayudante sujetar el cuello y la cabeza del animal

    con una mano y con la otra mano se toma la articulacin del codo del

    miembro torcico que le quede ms cmodo, tratando de extender el

    antebrazo del perro. (Tachika, 2008).

    Se realiza la preparacin asptica (rasurado, lavado y embrocado) de la

    regin dorsal del tercio medio distal del radio y ulna, que es la zona que se va

    a puncionar. El ayudante que est sujetando el brazo del perro aplica unaligadura sobre la articulacin del codo para interrumpir el retorno venoso y

    hacer resaltar la vena, durante un mximo de diez segundos antes de la

    venopuncin, el mantenerlo por ms tiempo, produce un falso aumento del

    hematocrito por mayor retencin de eritrocitos que en el plasma y podra

    ocultar la presencia de anemia en algunas ocasiones.

    Para tomar la muestra se debe tomar con una mano el miembro torcico del

    perro, de manera de evitar movimiento indeseable.

    La venopuncin se realiza introduciendo la aguja de la jeringa, con el bisel de

    la misma apuntando hacia arriba, en un ngulo de 45 grados

    aproximadamente, sobre la vena ceflica que se encuentra resaltada por la

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    12

    presin. Una vez que se ha atravesado la piel, el tejido subcutneo y la pared

    del vaso sanguneo, se realizar una ligera aspiracin del mbolo, para

    verificar que efectivamente se introdujo la aguja al vaso sanguneo.

    Se colecta la muestra y se deposita inmediatamente en los tubos especficos

    para su transporte (con o sin anticoagulante).

    1.4. MANEJO DEL PACIENTE

    El paciente debe encontrarse lo menos excitado posible para minimizar las

    variaciones fisiolgicas que stos estados provocan. (Aguilaret al, 2005).

    La adecuada contencin facilita una venopuncin limpia y precisa y evita la

    contaminacin de la muestra.

    Cuando se requiera muestra de sangre y orina, se deben colectar antes de

    cualquier tratamiento. Pero cuando el paciente se encuentra en tratamiento

    por va intravenosa (venas ceflicas o safena), la muestra sangunea debe

    tomarse del miembro opuesto o de las venas yugulares.

    1.5. ENVO

    Las muestras deben estar identificadas: Nombre del paciente, especie,raza, edad, hora y fecha de muestreo. (Aguilaret al, 2005).

    Esto para cualquier determinacin, ya sea para hematologa, bioqumica,

    urianlisis y citologa de lquidos etc.

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    Sealar con tinta roja si el animal es sospechoso de rabia, tuberculosis,

    brucelosis, leptospirosis, salmonelosis u otra enfermedad transmisible al

    hombre, para aumentar las precauciones en el manejo.

    Describir la historia clnica con los hechos ms relevantes: Diarrea, vmito,

    anorexia, hiporexia, fiebre, etc. Con una duracin de x das.

    Indicar si el animal est recibiendo tratamiento y el tiempo de recibirlo.

    Particularmente en el caso de fluidoterapia, corticoterapia de larga accin,

    transfusiones sanguneas, etc., en stos dos ltimos, aunque su

    administracin haya sido concluida, sus efectos pueden perdurar por 5 o

    ms das.

    El envo de la muestra para sangre entera con o sin anticoagulante debe

    estar refrigerada entre +4 y +8C, y debe llegar al laboratorio antes de las

    24 horas tras su extraccin. Se debe proteger los tubos frente a los golpes.

    Se recomienda dejar la muestra a la temperatura de la pieza durante unos

    15 minutos y no exponerla al sol antes de refrigerarla (4C), para evitar unchoque trmico y hemlisis de la muestra.

    Figura 10. Conservacin y envo de la muestra

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    2. TOMA, CONSERVACIN Y ENVIO DE MUESTRA DE HECES

    Hay dos formas en las que se puede recolectar excremento en perros y

    gatos: (Corona, 2009).

    a) Con asas rectales, en el interior del recto del paciente.

    b) Del suelo tan pronto como defeque el animal.

    2.1. MATERIAL

    Asas rectales de plstico

    Recipiente recolector de plstico limpio o estril.

    Gel lubricante

    Portaobjetos

    Cubreobjetos

    Solucin salina

    Figura 11. Material para recoleccin de heces

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    2.2. TCNICA CON ASA RECTAL

    Un primer ayudante debe sujetar al perro que deber estar en

    cuadripedestacin sobre la mesa de exploracin. El ayudante sujetar el

    cuello y la cabeza del animal con una mano y con la otra mano sujetar la

    parte caudal del perro, abrazando el abdomen del mismo, para evitar que el

    perro se mueva durante el procedimiento. (Tachika, 2008)

    Se lubrica el asa rectal y se introduce en el recto del paciente, dando giros

    para poder extraer la muestra de excremento, se necesitan

    aproximadamente de 1 a 2gr, dependiendo el examen que se va a realizar.Como se muestra en las figuras 12 y 13. Se retira el asa rectal y la pequea

    cantidad de excremento que salga pegada a la punta, se extiende sobre un

    portaobjetos.

    Posteriormente se coloca la muestra en un recipiente de plstico de tapa

    ancha, en caso de ser para un examen para microbiologa debe ser un

    recipiente estril.

    Se aaden unas cuantas gotas de solucin salina isotnica a la muestra,

    con la finalidad de convertirla en una suspensin acuosa, y se coloca un

    cubreobjetos para poder visualizar la muestra a travs del objetivo

    panormico y seco dbil (10X) de un microscopio ptico, en busca de

    huevos de parsitos. Figuras 14 y 15. (Quiroz, 2002).

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    Figura 12. Lubricante Figura 13. Toma de muestra

    Figura 14. Portaobjetos Figura 15. Cubreobjetos

    2.3. Conservacin

    Se recomienda no refrigerar la muestra, se debe llevar cuanto antes al laboratorio

    con el fin de obtener resultados confiables, mantenerse alejada de la luz, y en un

    sitio fresco. [consultado el 15 de abril del 2010].

    (http://www.cenavece.salud.gob.mx/.../procedimientos_basicos_en_la_toma_de_m

    uestras_finales.pdf).

    http://www.cenavece.salud.gob.mx/http://www.cenavece.salud.gob.mx/
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    3. TOMA DE MUESTRA DE SEMEN

    3.1. MATERIAL

    Vagina artificial

    Tubo recolector estril

    3.2. TCNICA

    El semen se obtiene en una vagina artificial. (Feldman et al, 2000).

    Figura 16Extremo de vagina artificial bovina, adherida a un tubo estril.

    La tarea ms difcil es la estimulacin del macho, por lo general no se

    necesita una hembra.

    Se da masaje al pene y bulbo erctil dentro del prepucio, cuando el bulbo

    erctil comienza a aumentar de tamao se desliza el prepucio en direccin

    posterior y se exterioriza el pene con el bulbo erctil.

    Extrado el pene y el bulbo erctil el recolector sostiene con firmeza la base

    del pene en direccin proximal al bulbo, se utilizan los dedos pulgar e ndice

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    proporcionando masaje y presin; durante la ereccin o inmediatamente

    despus inician los impulsos plvicos con una duracin de 5-30 seg.

    Figura 17. Estimulacin del pene

    Figura 18. Paciente en posicin para eyacular

    La fase inicial del eyaculado consta de lquido prosttico sin esperma y la

    segunda fraccin es rico en esperma.

    El semen se obtiene de 2 a 5 minutos, es relativamente resistente al choque

    trmico.

    Se colectar semen mientras su consistencia sea blanquecina o cremosa y

    turbio.

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    3.3 CONSERVACIN

    3.3.1. SEMEN REFRIGERADO

    Mediante la agregacin de diluyentes es posible refrigerar el semen, disminuyendoel metabolismo de los espermatozoides mantenindolo a temperaturas de 4 C,

    logrando la viabilidad de estos aproximadamente de 24 a 48 hrs., como mnimo.

    Antes de realizar la IA el eyaculado debe alcanzar la temperatura ambiente

    lentamente.

    Debido a que mediante los diluyentes los espermatozoides se mantienen en

    buenas condiciones es factible realizar una IA vaginal.

    De esta manera se ampla la posibilidad de uso de un reproductor, permitiendo la

    comercializacin de semen y facilitando el intercambio gentico entre deferentes

    establecimientos.

    (http://www.foyel.com/cartillas/20/citologiavaginalcanina.html,2008). [consultado el

    20 de marzo del 2010].

    http://www.foyel.com/cartillas/20/citologiavaginalcanina.htmlhttp://www.foyel.com/cartillas/20/citologiavaginalcanina.html
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    4. TOMA, CONSERVACIN Y ENVO DE MUESTRAS EN PIEL

    4.1 RASPADOS

    Son adecuados para las lesiones externas, en biopsias, cirugas y en necropsias.

    Cualquier perro o gato con prurito o escamoso puede estar infestado con

    Cheyletiella spp., Otodectes cynotis, Scabies scabiei, o Notoedres cati y debe

    hacrsele raspado. [Consultado el 7 de abril del 2010].

    (http//:www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).

    Si se sospecha de sarna, las reas preferidas para el raspado son los hombros,

    corvejones y vientre. El borde de las orejas debe rasparse minuciosamente si se

    observa algn prurito o descamacin en esta rea. Alguna veces, la descamacin

    es ligera y solo se hace evidente durante un examen detallado.

    Debe hacrsele raspado a cualquier perro o gato con una posible demodicosis.

    De esta manera, todo paciente alopcico y todo paciente con ppulas, pstulas,

    costras y particularmente con pododermatitis interdigital, debe ser raspado enbusca de demodicosis. Para un raspado profundo eficaz de la piel de las patas

    puede necesitarse sedacin o anestesia general.

    4.1.1. RASPADO SUPERFICIAL DE PIEL

    4.1.1.1. MATERIAL

    Portaobjetos

    Cubreobjetos

    Aceite de inmersin

    Hoja de bistur

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    Figura 19. Material, para raspado de piel

    4.1.1.2. TCNICA

    Un primer ayudante debe sujetar al perro que deber estar en

    cuadripedestacin sobre la mesa de exploracin. El ayudante sujetar el

    cuello y la cabeza del animal con una mano y con la otra mano sujetar la

    parte caudal del perro, abrazando el abdomen del mismo, para evitar que el

    perro se mueva durante el procedimiento. (Tachika, 2008).

    Se deben identificar las zonas de la piel que presentan lesiones primarias.

    Los sitios son rasurados suavemente con navajas #40. Los caros son

    difciles de encontrar (especialmente los caros de la sarna demodcica), de

    tal manera que entre ms grande sea el rea raspada, se tendr mayor

    oportunidad de obtener un raspado de piel positivo.

    Se aplican varias gotas de aceite mineral directamente sobre la piel rasurada

    o sobre la hoja de bistur y se distribuye uniformemente en el rea. Como se

    muestra a continuacin. [Consultado el 8 de abril del 2010].

    (http//:www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).

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    Figura 20. Aceite para inmersin

    El aceite es raspado con una hoja de bistur # 11 en direccin del

    crecimiento del pelo, la muestra recolectada se coloca sobre una laminilla y

    se extiende con la hoja con un movimiento de untar mantequi lla al pan. Seraspa de 10 a 15 veces especialmente cuando se sospecha sarna

    demodcica, como se muestra en las figuras 21 y 22.

    Figura 21. Raspado superficial en gato Figura 22. Portaobjetos

    Se recomienda realizar de 3 a 5 laminillas por cada sitio de muestreo.

    Se utiliza un cubreobjetos para permitir una evaluacin rpida y completa

    de los restos recolectados y se examinan la(s) lmina(s) sistemticamente

    con bajo aumento (x10 x40) del ngulo superior izquierdo al ngulo inferior

    derecho, como se muestra en las figuras 23 y 24.

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    Figura 23. Cubreobjetos Figura 24. Observacin al microscopio

    4.1.2. RASPADOS PROFUNDOS DE PIEL

    4.1.2.1. MATERIAL

    Portaobjetos

    Cubreobjetos

    Aceite de inmersinHoja de bistur

    Mquina para rasurar

    4.1.2.2. TCNICA

    Puesto que los caros de Demdex canis y felis viven en el folculo piloso, es til

    presionar la piel tan fuerte como lo tolere el paciente antes del raspado con el fin

    de sacar a los caros de la profundidad de los folculos. Como se muestra en la

    figura 25. [Consultado el 8 de abril del 2010].

    (http//:www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).

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    Figura 25. Presin de la piel

    Se utiliza una hoja recubierta con aceite mineral en direccin del

    crecimiento del pelo hasta que se observe sangrado capilar.

    Figura 26. Raspado profundo

    Para evaluar un paciente con demodicosis, el raspado debe ser profundo,

    hasta que se observe sangrado capilar. La piel debe ser presionada al

    mximo para maximizar la recoleccin de caros.

    Los miembros y la cara son raspados fuertemente, de tal manera quepueda ser til el raspar las reas eritematosas adyacentes a las ppulas y

    costras interdigitales para maximizar el material recolectado y minimizar el

    sangrado asociado con el raspado.

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    La muestra recolectada se coloca sobre una laminilla y se extiende con la

    hoja con un movimiento de untar mantequilla al pan. Y se le coloca un

    cubreobjetos para observar al microscopio en el objetivo 10x y 40x.

    Figura 27. Extendido de la muestra

    Figura 28. Cubreobjetos

    Los raspados negativos o el depilado de pelos de las reas interdigitales no

    descartan la pododemodicosis; puede ser necesaria una biopsia paraconfirmar o descarta el diagnstico.

    El hallazgo de ms de un caro debe considerarse como diagnstico.

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    5. TOMA DE MUESTRA DE CULTIVO PARA DERMATOFITOS

    Est indicado un cultivo de hongos en cualquier perro o gato con posible infeccin

    por hongos y por ello en cualquier paciente con alopecia, ppulas, pstulas y/o

    costras. [Consultado el 8 de abril del 2010].

    (http//:www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).

    5.1. MATERIAL

    Portaobjetos

    Hoja de bistur

    Cinta adhesiva

    Papel higinico

    5.2. TCNICA

    Deben tomarse pelos y escamas del borde de la lesin (preferiblemente

    aquellos que fluorescan bajo la lmpara de Wood).

    Si las lesiones no estn bien circunscritas o si se sospecha de un portador

    asintomtico, se recomienda el mtodo McKenzie del cepillo de dientes.

    En sta tcnica, el pelo es cepillado con un cepillo de dientes estril(cualquier cepillo de dientes nuevo en una caja sellada est lo

    suficientemente estril micolgicamente). Las escamas y los pelos

    desprendidos recolectados en el cepillo de dientes son colocados

    suavemente en agar. Figura 29.

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    Figura 29. Un cepillo dental estril puede ser empleado para recolectar pelos.

    Figuras 30 y 31. La superficie del agar es tocada delicadamente con las cerdas del

    cepillo, inoculando el medio cultural. Tomado de:

    (http://www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).

    El medio agar Sabouraud es el medio para cultivo de hongos ms comn.

    En la prctica se usa frecuentemente el medio de prueba para dermatofito

    (DTM). El DTM es esencialmente un agar Sabouraud con indicador de color

    e ingredientes adicionados que inhiben el sobrecrecimiento de saprfitos y

    bacterias.

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    5.3 CONSERVACIN

    Despus de ser inoculado, la caja de cultivo debe ser incubada entre 25C

    y 30C con 30% de humedad, o en un rincn oscuro y calientito, sin cerrar

    la tapa de rosca completamente hasta abajo.

    Los cultivos deben ser incubados durante 2 a 3 semanas y ser evaluados

    diariamente. [Consultado el 8 de abril del 2010].

    (http://www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).

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    5. 4. TRICOGRAMA

    Los tricogramas pueden ser tiles en cualquier animal alopcico as como tambin

    en animales sospechosos de dermatofitosis ppulas, pstulas o costras

    asociadas. (Ackerman, 2008).

    5.4.1. MATERIAL

    Pinzas sin diente

    Portaobjetos

    cubreobjetos

    Aceite mineral

    5.4.2. TCNICA

    Se utilizan unas pinzas para arrancar fuertemente los pelos de la piel

    afectada. Ver figuras 32 y 33.

    Los pelos son colocados sobre una lmina y se evala con bajo aumento.Se coloca aceite mineral y cubre objeto para prevenir que la muestra de

    pelo se vuele sobre la mesa en vez de permanecer bajo el microscopio.

    Figura 34.

    Figura 32 y 33 Toma de muestra Figura 34 Muestra en portaobjetos

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    6. EXAMEN CON LMPARA DE WOOD

    Cualquier perro o gato con posible infeccin con Microsporum canis debe ser

    examinado con la lmpara de Wood.

    Cualquier paciente con alopecia, ppulas, pstulas y/o costras pueden

    beneficiarse de este procedimiento. (Ackerman, 2008).

    6.1. MATERIAL

    Lmpara de wood

    6.2. TCNICA

    La lmpara de Wood debe entibiarse por 5 minutos antes de utilizarse pues

    la estabilidad de la longitud de onda de la luz y la intensidad dependen de la

    temperatura.

    El animal se examina bajo la lmpara en cuarto oscuro.

    Figura 35. Lmpara de wood

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    Los pelos invadidos porM. canis pueden mostrar una fluorescencia amarilla

    verdosa. Esta fluorescencia se presenta lo largo del tallo del pelo, a

    diferencia de la fluorescencia discreta de escamas individuales ocasionales

    que puede verse en animales y humanos normales.

    Algunos medicamentos, jabones y bacterias tales como la Pseudomonas

    aeruginosa pueden tambin producir fluorescencia pero usualmente no est

    asociada con los tallos del pelo.

    La fluorescencia positiva es diagnstico de dermatofitosis y el M. canis es

    por mucho el dermatofito fluorescente ms comn en medicina veterinaria.

    Figura 36.

    Otros dermatofitos pueden mostrar fluorescencia, pero estos no son

    relevantes en dermatologa veterinaria.

    La ausencia de fluorescencia no debe descartar la dermatofitosis. Los

    siguientes pasos son el cultivo de hongos y/o la biopsia.

    Figura 36. Fluorescencia de los metabolitos dermatofticos sobre la cola de un

    paciente felino, uti lizando la lmpara de Wood.

    Tomado de: Atlas de dermatologa en pequeos animales, 1 ed. Buenos aires:

    Inter-Mdica, Ackerman, Lowell 2008.

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    7. CULTIVO BACTERIANO

    Los cultivos bacterianos se emplean con poca frecuencia en dermatologa

    veterinaria. La mayora de las afecciones bacterianas de la piel son causadas por

    Staphylococcus intermedius. Si los cocos se identifican citolgicamente, la terapia

    antibacteriana emprica es suficiente en la mayora de los pacientes.

    [Consultado el 20 de abri l del 2010].

    (http://www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).

    La terapia emprica en dosis apropiadas por un tiempo apropiado no ha logrado

    resolver la pioderma (las lesiones estn an presentes y la citologa an revela

    cocos). Numerosas bacterias en forma de bastn son identificadas en las

    muestras citolgicas de los canales auditivos. Estos organismos juegan rara vez

    un papel importante en las infecciones cutneas de los pacientes que clnicamente

    no responden a la terapia emprica.

    7.1. Material

    Gasas

    Solucin salina

    Recipiente estril

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    7.2. TCNICA

    Los frotis son tomados de los canales auditivos como se describe en las

    muestras para citologa. [consultado el 25 de abril del 2010].

    (http://www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).

    Los aspirados de pstulas intactas son tiles en pacientes con pioderma

    superficial.

    Los frotis de la superficie de la piel para el cultivo de organismos de

    pacientes con pioderma profundo no son convenientes. Las muestras son

    tomadas de manera similar a la que se utiliza en biopsias bajo condiciones

    aspticas (lavado de la superficie de la piel y la utilizacin de instrumentos y

    guantes estriles). La mitad superior de la muestra de tejido con la

    epidermis y el pelo se corta y la mitad inferior se introduce en un recipiente

    estril colocado sobre una compresa de gasa estril empapada en solucin

    salina estril para cultivo de macerado. Esto previene el sobrecrecimiento

    en el cultivo de bacterias superficiales no relevantes a la infeccin profunda.

    Cada muestra para cultivo y sensibilidad debe estar acompaada por un

    examen citolgico y los resultados del cultivo deben ser interpretados en

    relacin a los hallazgos citolgicos.

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    8. TCNICAS DE COLECCIN CON HISOPOS DE ALGODN

    Se usan en sitios donde no hay fcil acceso para las otras tcnicas de coleccin,

    como en el canal del odo, en la vagina, prepucio, ano, mucosa conjuntival,

    mucosa oral o en lesiones fistulosas. (Feldman y Nelson, 2000).

    8.1. MATERIAL

    Hisopos estriles

    Portaobjetos

    Solucin salina

    Figura 37. Material para hisopados

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    8.2. TCNICA

    Se introduce el hisopo dentro del canal lentamente, en los pacientes con

    piel seca, (Figuras 38, 39, 40, 41 y 42), el hisopo de algodn puede

    humedecerse con solucin salina y frotarlo sobre la superficie de la piel

    afectada antes de ser rotada sobre la lmina. (Aguilaret al, 2005).

    Se hace girar rotndolo con los dedos ndice y pulgar, y se retira con

    cuidado para no contaminarlo con otros tejidos.

    Estar bien tomada si observamos un ligero color caf en el hisopo. Una

    vez tomada la muestra se introduce el hisopo hasta el fondo en un tubo con

    medio de transporte Cary-Blair que debe estar bien tapado (tapn de

    rosca).

    Despus, se rueda el hisopo sobre una laminilla, ejerciendo una ligera

    presin con el dedo sobre la varilla para hacer impresiones lineales. Y se

    deja secar al aire. Figuras 43, 44 y 45.

    Se recomienda realizar dos o tres impresiones en cada laminilla.

    En pacientes con piel hmeda o grasosa, se puede frotar la lmina o tomar

    directamente la impresin sobre la piel afectada.

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    Figura 38. Citologa vaginal Figura 39. Hisopado conjuntival

    Figura 40. Hisopado en mucosa oral Figura 41. Hisopado de odo

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    Figura 42. Hisopado en ano

    Figura 43. Muestra de mucosa conjuntival Figura 44. Muestra de heces

    Figura 45. Muestra de citologa vaginal

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    38

    8.3 ENVO

    Para estudios bacteriolgicos se enva inmediatamente despus de haberse

    tomado. No hay que refrigerar la muestra. [consultado el 2 de mayo del

    2010].(http://www.cenavece.salud.gob.mx/.../procedimientos_basicos_en_la

    _toma_de_muestras_finales.pdf).

    En caso de ser para estudios virales mandarlo en refrigeracin, aunque no

    se recomienda usar hisopo para el caso de virus, en sta tcnica s se

    recomienda refrigerar la muestra.

    http://www.cenavece.salud.gob.mx/http://www.cenavece.salud.gob.mx/
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    9. TCNICA PARA MUESTRAS EN CINTA ADHESIVA

    9.1. MATERIAL

    Cinta adhesiva

    Portaobjetos

    Azul de metileno

    Cubreobjetos

    Aceite de inmersin

    9.2. TCNICA

    La tcnica de impresin directa utiliza cinta adhesiva transparente para recolectar

    desechos de la superficie de la piel. Aunque rpido, este mtodo necesita prctica

    para establecer que es "normal." (Ackerman, 2008).

    La cinta se presiona con el lado adhesivo hacia abajo sobre la piel.

    La cinta se presiona por el lado pegante sobre la piel afectada.

    Luego, se presiona (de nuevo con el lado adhesivo hacia abajo) sobre una

    gota de azul de metileno o tincin azul de DiffQuick sobre una laminilla.

    Se presiona luego con el lado pegante hacia abajo sobre una gota de azul

    de metileno sobre una lmina.

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    La cinta sirve como cubreobjeto: La lmina puede ser evaluada an bajo

    aceite de inmersin (con una pequea gota de aceite colocada

    directamente encima de la cinta).

    Esta tcnica es especialmente til para la evaluacin de Malassezia. Otros

    elementos de inters que pueden ser identificados incluyen clulas

    inflamatorias tales como neutrfilos (los cuales pueden haber pasado a

    travs de la epidermis en respuesta a una infeccin superficial), clulas

    epiteliales nucleadas (lo cual no es normal y reflejan una anomala de

    queratinizacin), cocos (bacterias esfricas), bacilos (bastones rectos),

    macrfagos, caros de Demdex de cuerpo pequeo, Cheyletiella y

    ocasionalmente caros de Sarcoptes.

    9.3. Tincin

    Se puede utilizar una coloracin de Wright modificada (por ejemplo, DiffQuick)

    para colorear las laminillas secadas al aire. Es mucho ms rpida y ms fcil que

    la coloracin de Gram y suficiente para evaluar casi todas las muestras citolgicas

    de piel. Sin embargo, la coloracin de Gram es igualmente adecuada. (Ackerman,

    2008).

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    10. OBTENCIN DE MUESTRAS PARA CITOLOGIA

    La tcnica para la coleccin de muestras en citologa depende de la localizacin y

    de las caractersticas del tejido. (De buen et al, 2001).

    Para las diferentes muestras el envo es el mismo:

    Los portaobjetos que han de enviarse a un laboratorio deben secarse al aire

    y colocarse en contenedores adecuados para el transporte de portaobjetos,

    los cuales por lo general son provistos por el laboratorio.

    Los portaobjetos deben transportarse a temperatura ambiente para evitar

    que el agua se condense en la superficie y produzca la lisis de las clulas.

    Lo ideal sera que las muestras citolgicas se enven al laboratorio en forma

    separada de los tejidos fijados en formalina para evitar el contacto con los

    vapores de formalina, los cuales pueden inhibir la ptima tincin de los frotis

    secados al aire.

    Las muestras citolgicas deben entregarse al laboratorio junto con la

    siguiente informacin:

    a) Descripcin detallada

    b) Breve historia clnica

    c) Hallazgos relevantes del examen fsico,

    d) Terapia previa,

    e) Resumen de los resultados de los exmenes

    f) Diagnsticos pertinentes,

    g) Diagnstico tentativo, y sitio donde se tom la muestra.

    h) Esta informacin es til para que patlogo realice la interpretacin.

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    10.1. ASPIRACIN CON AGUJA FINA

    10.1.1. ASPIRACIN DE NDULOS

    Esta tcnica ayuda a obtener muestras de masas, lquidos y lesiones cutneas.

    Mientras ms blando sea el tejido a muestrear, menor ser el calibre de la aguja y

    menor, tambin, la presin negativa que se ejerza al momento de la aspiracin.

    (El mbolo se retrae hasta la marca de 3 a 7ml). (Aguilaret al, 2005).

    10.1.1.1 MATERIAL

    Jeringas de 10, 12 ml y aguja calibre 21 a 25.Mquina para rasurar

    Alcohol al 70%

    Torundas de algodn o gasas estriles.

    10.1.1.2 TCNICA

    El sitio de la aspiracin, se rasura y se limpia bien con alcohol, se agarrafirmemente el ndulo y entonces se inserta la aguja, aspirando varias

    veces, en varias direcciones en el centro y en la periferia de la masa (hasta

    la marca de 10 ml si es posible), se libera la presin y se saca la jeringa con

    la aguja an adherida. (Aguilar et al, 2005).

    Figura 46. Embrocado Figura 47. Aspirado

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    Es importante liberar la presin antes de retirar la aguja, si no el aspirado

    puede ser succionando dentro del tubo de la jeringa, de la cual este puede

    no ser recuperado. (Davidson et al, 2000).

    Se desconecta la aguja, el mbolo se jala hacia atrs y la aguja se vuelve a

    reconectar, como se muestra en las figuras 48 y 49.

    Figura 48. Liberacin de presin Figura 49 Aspirado para presin

    Las clulas son vertidas sobre un portaobjetos. Figura 50.

    Y se realiza un frotis lineal o en cruz, posteriormente se tie, se deja secaral aire y se observa al microscopio. En un objetivo de 10x, 40x, 100x. Ver

    figura 51.

    Figura 50. Portaobjetos Figura 51. Frotis en cruz

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    10.2 AGUJA FINA SIMPLE SIN ASPIRACIN

    10.2.1 MATERIAL

    Jeringas de 3ml, 5ml y aguja calibre 21 a 25.

    Mquina para rasurar

    Alcohol al 70%

    Torundas de algodn

    10.2.2. TCNICA

    ste mtodo se ha convertido en una prctica muy comn hoy en da.

    (Aguilaret al, 2005).

    Se inicia rasurando la zona donde se va a puncionar, se desinfecta el rea

    con isodine espuma y se retira con alcohol al 70%, con torundas de

    algodn, como se muestra en las figuras, 52 y 53.

    Figura 52. Rasurado Figura 53. Embrocado

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    Se realiza en forma similar al aspirado, con la diferencia de que la aguja no

    est conectada a una jeringa no se ejerce una presin negativa.

    Solamente se introduce la aguja al tejido de inters y se imprime un

    movimiento de vaivn para obtener una muestra limpia y sin contaminacin

    sangunea, como se muestra en la figura 54.

    Se punciona en varias direcciones y posteriormente se retira y se coloca el

    contenido en un portaobjetos conectando la jeringa a la aguja para expulsar

    el contenido obtenido, como se muestra en la figura 55 y 56.

    Se realiza un frotis lineal en cruz, se tie y se observa al microscopio en

    10x, 40x.100x (con aceite de inmersin), como se muestra en la figura 57.

    Figura 54. Puncin de masa Figura 55. Puncin en varias direcciones

    Figura 56. Expulsin del contenido Figura 57. Frotis en cruz

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    10.3. PREPARACIN DE LOS FROTIS

    10.3.1 FROTIS EN CRUZ

    Las dos laminillas se mantienen en forma de cruz y sin ejercer presin.

    La laminilla superior se desliza hacia donde marca la flecha, para efectuar

    el extendido de las clulas, y el frotis se obtiene en la laminilla inferior,

    como se muestra en la figura 57.

    Se debe secar al aire para la fijacin de los frotis.

    Se recomienda realizar siempre un mnimo de tres a cinco frotis de cada

    muestra obtenida. Los frotis no se refrigeran.

    Si el material es de viscosidad moderada, como la sangre, se puede hacer

    un frotis estndar, cuya fuerza de separacin celular es ligeramente inferior

    a la de las laminillas en cruz. (Aguilaret al, 2005).

    10.3.2 FROTIS ESTNDAR

    Se coloca una pequea gota de material sobre una laminilla portaobjetos.

    Con otra laminilla se forma un ngulo de aproximadamente 45.

    La laminilla superior se desliza hacia atrs, hasta tocar la muestra, y

    despus hacia delante, para efectuar el extendido de las clulas.

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    El resultado es un frotis en forma de pluma que muestra tres diferentes

    densidades, como el frotis sanguneo. Vase figura 58. (Davidson et al,

    2000).

    Figura 58. Frotis estndar

    Tomado de: Manual de patologa clnica en pequeos animales, Davidson et al,

    2000.

    10.3.3 FROTIS LINEALES

    Se mantiene la lamini lla superior en un ngulo cercano a los 80.

    El extendido sobre la laminilla inferior se suspende a la mitad del camino.

    Con este procedimiento se obtiene un frotis que, en su eje horizontal,

    contiene pocas clulas, mientras que en su eje vertical (el frotis lineal,

    propiamente dicho) hay ms clulas. En la mayora de los casos, se

    recomienda centrifugar previamente la muestra, con lo cual se obtienen

    mejores resultados.

    Se recomienda realizar rutinas de tres a cinco frotis por cada muestra

    obtenida.

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    Este mtodo se recomienda si la muestra es un lquido no viscoso y casi

    transparente, ya que no hay fuerza de separacin de las clulas o es

    mnima. Ver figura 59.

    Figura 59. Frotis lineal

    Tomado de: Manual de patologa clnica en pequeos animales, Davidson

    et al, 2000.

    5.3.4. IMPRESIONES

    Son las huellas que quedan en una laminilla cuando se pone en contacto con un

    tejido. Resultan adecuadas para las lesiones externas o durante cirugas, biopsias

    o necropsias. (Aguilaret al, 2005).

    Cuando la lesin cutnea esta ulcerada, hay que tomar tres impresiones

    antes de limpiar la lcera y tres despus de limpiarla.

    En el caso de las biopsias o de material de necropsias, se cortan cubos detejido de 0.5 a 1.0 cm de dimetro. Cuando hay lesiones con exceso de

    lquido o de sangre que impiden la adhesin adecuada de las clulas a la

    laminilla, se sugiere hacer impresiones suaves sobre papel absorbente

    (toallas de papel para secar las manos).

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    Las impresiones se efectan hasta que el papel absorba poco lquido, esto

    indica que la muestra esta lista para realizar las impresiones sobre las

    laminillas.

    Una vez que el tejido esta seco, se recomienda realizar varias impresiones

    sobre la misma laminilla para tener mayor superficie de evaluacin.

    Se sugiere hacer de tres a cinco laminillas de diferentes cortes, para tener

    una mejor idea del tipo de poblacin celular que se encuentra en el tejido, y

    para efectuar coloraciones especiales en los casos que lo requieran.

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    11. BIOPSIA DE PIEL (tcnica de sacabocados).

    La biopsia para examen histopatolgico (evaluacin microscpica de los tejidos)

    es de especial importancia en dermatologa, puesto que el tejido de inters (la piel)

    es de acceso inmediato. Si bien es una herramienta valiosa, no se debe aguardar

    que la biopsia defina todo el cuadro. Revela cambios en una regin diminuta de la

    superficie cutnea en un momento temporal particular.

    Las biopsias pueden ser obtenidas mediante escisin de toda la patologa, incisin

    lesional y remocin de una parte representativa o, con mayor frecuencia, con

    sacabocados. Cuando se realiza el procedimiento, es importante brindar

    preferencias a lesiones primarias o secundarias tempranas.

    Los cambios ms profundos, como ulceracin, fibrosis y alopecia completa,

    tienden a resultar menos diagnsticos. Por este motivo, es mejor remitir varias

    secciones para evaluacin, a partir de una variedad de diferentes lesiones y

    estadios de desarrollo. Junto a la muestra, el patlogo debe recibir el historial

    clnico con los posibles diagnsticos diferenciales.

    No deben hacerse biopsias de lceras ni erosiones. No hay que esperar que un

    patlogo sea capaz de describir en forma ms especfica "una lcera" si hace

    biopsia de una lcera o "erosin costrosa" si se selecciona un rea excoriada.

    (Ackerman, 2008).

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    11.1. Preparacin del sitio

    Con excepcin de la biopsia incisional de los ndulos, no se emplea la

    preparacin quirrgica del sitio. An la aplicacin tpica de alcohol y el

    secado al aire puede alterar la epidermis.

    Si hay presencia de costras, estas deben dejarse sobre la piel. Si stas son

    desalojadas accidentalmente stas deben ser colocadas en formalina y se

    debe aadir una nota "por favor corte en la costra" en el formulario de

    solicitud.

    Las costras pueden contener microorganismos o clulas acantolticas que

    pueden ayudar a obtener el diagnstico. La infeccin como resultado de

    una ausencia de preparacin quirrgica no parece ser un problema.

    (Ackerman, 2008).

    11.2. Biopsia excisional o incisional vs. Biopsia de perforacin

    Hay dos tcnicas de biopsia utilizadas comnmente en medicina veterinaria

    1. Biopsia incisional

    2. Biopsia de perforacin

    La segunda se emplea corrientemente como una tcnica de extirpacin cuando se

    quitan ndulos solitarios. Tambin est indicada para vesculas (las cuales son

    tpicamente ms frgiles para sobrevivir a la biopsia de perforacin sin que se

    rompan), en casos sospechosos de paniculitis (en la cual la suficiente profundidad

    de la biopsia no puede lograrse con la puncin) y cuando se biopsia el extremo de

    una lesin en forma de huso (lo cual permite la orientacin correcta de la lesin en

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    el laboratorio donde las lesiones en forma de huso se cortan siempre

    longitudinalmente).

    La biopsia de perforacin es rpida, relativamente atraumtica y generalmente se

    emplea cuando se sospecha de dermatosis infecciosa, inflamatoria y endocrina.

    Los instrumentos desechables para la biopsia de perforacin estn disponibles en

    varios tamaos. Estos pueden ser esterilizados al fro y utilizados nuevamente.

    Con excepcin de la biopsia de cara y patas, se debe utilizar un instrumento de 8

    mm. Se emplean los instrumentos de perforacin ms pequeos con un dimetro

    de 4 o 6 mm para biopsias de cara y pie. Los instrumentos de perforacin muy

    pequeos (por ejemplo 2 a 3 mm) no son tiles en la prctica de pequeos

    animales con excepcin de biopsias de prpado. (Ackerman, 2008).

    11.3. MATERIAL

    Mquina para rasurar

    Marcador de aguaJeringas de 3ml

    Gasas

    Sacabocados

    Formalina al 10%

    11.4. TCNICA

    Se rasura la capa de pelo retirando suavemente y el sitio donde se har la

    biopsia se delimita con un marcador a prueba de agua. Si hay presencia de

    costras, puede ser menos traumtico usar tijeras. (Ackerman, 2008).

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    Figura 60. Se traza un cuadrado alrededor de la muestra para biopsia.

    Figura 61. El anestsico local se inyecta subcutneamente.

    Se debe aplicar anestesia local, inyectar como mnimo 0.5 cc o ms de

    lidocana en el espacio subcutneo.

    Utilizar sacabocados del tamao adecuado (4 a 8 mm) para muestrear la

    lesin, manteniendo el rea de inters en el centro del instrumento, como

    se muestra en la figura 53.

    Aplicar presin mientras se gira el instrumento, a los efectos de avanzar con

    mnimo retorcimiento del tejido. Para evitar el dao del tejido subyacente,

    es mejor levantar un pliegue de piel para alejarse de aquel.

    Alcanzar el espacio subcutneo con pinza, socavar el subcutis por debajo

    de la muestra y recortar con tijera de ciruga. No asir el tejido de inters.

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    Sacar la muestra y colocar en un recipiente con formol. El volumen

    requerido de formalina es de por lo menos 10 veces el volumen de la

    muestra.

    El defecto que queda se puede curar con suturas o grapas.

    Los ndulos deben ser seccionados en pedazos de 1 cm de grosor para

    permitir la adecuada penetracin de la formalina al centro de la lesin.

    Figura 62

    El instrumento de perforacin se coloca verticalmente sobre la superficie y se hace

    rotacin en una sola direccin.Tomado de: Atlas de dermatologa en pequeos animales, Ackerman 2008.

    Figura 63

    La muestra es quitada sujetando su base con una pinza y cortndola.

    http://filename%3D%27/products/product.asp?PN=formaldehyde%27;displayProd()http://filename%3D%27/products/product.asp?PN=formaldehyde%27;displayProd()
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    Figura 64

    Si la muestra de la biopsia es delgada, sta se coloca sobre un cartn o abate

    11.5. ENVO

    Para aumentar las posibilidades de recibir un reporte que sea diagnstico,

    es importante el completar cuidadosamente los formularios apropiados para

    solicitar el examen de la biopsia de la piel, incluyendo la historia clnica y el

    examen fsico.

    Es importante una lista de diagnsticos diferenciales en cualquier caso

    clnico pero es esencial en pacientes dermatolgicos. La seborrea o tractos

    de drenaje pueden ser el resultado de un amplio rango de procesos deenfermedad. Esta lista es importante para que el clnico este seguro que l

    o ella ha considerado todas las opciones y ha obtenido tanta informacin

    como sea posible tanto de la mascota como del propietario ya antes de

    tomar la biopsia. Es igualmente importante para el patlogo y puede ayudar

    en la eleccin de la tincin especial para descartar o confirmar afecciones

    inusuales. (Ackerman, 2008).

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    12. OBTENCIN DE MUESTRAS PARA BIOPSIA

    Obtenidas a partir de pacientes vivos para establecer la naturaleza de un tejido

    anormal que puede observarse macroscpicamente, detectarse clnicamente o

    mediante el uso de tcnicas de imagen (radiografa, tomografa o ecografa).

    El examen histolgico puede ayudar a establecer la naturaleza de una

    enfermedad, es decir, puede ayudar a diferenciar una neoplasia de una

    inflamacin o de un cambio degenerativo. (Davidson et al, 2000).

    La recogida de muestras y el examen citolgico implican la obtencin y la

    preparacin de clulas individualizadas o de pequeos grupos de clulas. Estas

    clulas se obtienen in vivo a travs de distintas vas.

    Estas incluyen: desprendimiento o exfoliacin natural (por ejemplo, descamacin a

    partir de la piel o de las mucosas oral, vaginal, anal etc.); eliminacin natural a

    travs de la orina, esputos u otras secreciones (por ejemplo, oculares, nasales,

    auriculares); o aspiracin mediante agujas de varios calibres, cnulas o catte res

    (por ejemplo, a partir de cavidades corporales o de rganos macizos).

    12.1. TCNICA

    Las muestras celulares se depositan sobre portaobjetos inmediatamente

    despus de recogerlas. (Davidson et al, 2000).

    Se extienden y se secan rpidamente al aire o se fijan en alcohol al 95%,

    antes de teirlas y examinarlas con el microscopio.

    Cuando las muestras son predominantemente liquidas suelen

    centrifugarse suavemente para concentrar las clulas o se procesan

    mediante el uso de una citocentrfuga.

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    CUADRO 2. Sistemas orgnicos y sus correspondientes tcnicas de biopsia

    rgano o localizacin Tipo de biopsia Comentarios

    PielEscisionalIncisional

    -Consideraciones de lugar y

    tamao.-Lesiones solitarias, mltiples

    o generalizadas-Agujas normalmente no tiles.

    -Perforador de keyes.

    Ndulos linfticosperifricos

    Exfoliacin (improntas)

    Incisional (aguja)Escisional (impronta)

    -til en ulceraciones oneoplasias.

    -Las agujas son tiles

    Aparato reproductor:Macho: Testculos

    Prstata

    Hembra: Vagina

    Mamas

    Escisional

    Incisional (aguja fina)

    Exfoliacin

    Incisional (aguja)

    Exfoliacin

    Escisional/incisional

    Escisional; incisional

    EscisionalIncisional

    Exfoliacin (secreciones)

    -Se acostumbra a realizar unaorquidectoma bilateral.

    -Dificultad para interpretar laaspiracin con aguja fina.

    Masaje prosttico a travs delrecto

    Las tcnicas con aguja sondifciles; evitar va recto.

    -Consideraciones de lugar ytamao.

    -Incluir ndulos linfticoscuando sea necesario.

    -Problemas de cicatrizacin.-Agujas tiles si el paciente es

    de avanzada edad o estdebilitado.

    -til en mastitis o neoplasias.

    Aparato urinario:Rin

    Vejiga

    Incisional

    Escisional

    Exfoliacin

    -Normalmente con agujas Vim-silverman; posible hemorragia.

    -Si todo el rgano esclaramente anormal.

    -Centrifugar o sedimentar lamuestra completa; rpido

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    Hgado

    Incisional

    Incisional

    deterioro.-Consideraciones de tamao y

    lugar-La reseccin en forma decua requiere laparotoma.

    -til aguja de gran calibre(Menghini)-Dificultad para interpretar la

    aspiracin con aguja fina.

    Tracto digestivo:

    Cavidad oral

    Tracto superior:Esfago

    Estmago

    Tracto intermedio:Intestino delgado

    Tracto inferior:ColonRecto

    Ano

    Exfoliacin (improntas)

    Escisional; incisional

    ExfoliacinEscisional

    Escisional; incisional

    EscisionalPocas veces incisional

    EscisionalPocas veces incisional

    Escisional; incisionalExfoliacin (improntas)

    til si hay abrasin de lasuperficie.

    Consideraciones de lugar ytamao.

    Endoscopia y fibra ptica conrecogida de muestras concepillo de citologa o con

    pinzas de biopsia.

    Consideraciones de tamao;endoscopia con pinzas de

    biopsia si es pequea.Normalmente requiere

    laparotoma.

    No es posible usar laendoscopia; requiere

    laparotoma o capsulas debiopsia.

    Puede alcanzar el leon distal.

    Consideraciones de tamao;endoscopia con pinzas de

    biopsia si es pequea.

    Consideraciones de lugar ytamao.

    til si es accesible o mediantelegrado de la lesin.

    Tracto respiratorio:Cavidad nasal Exfoliacin Secreciones nasales o

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    Vas areas

    Pulmones

    Escisional; incisional

    ExfoliacinEscisional; incisional

    EscisionalIncisional

    irrigacin con solucinisotnica.

    Consideraciones de tamao ygrado de invasin.

    Esputos o irrigacin mediantebroncoscopio.Muestreo con pinzas de

    biopsia mediantebroncoscopio.

    Lobectoma va toracotomaAgujas (de gran calibre ofinas) mediante la tcnica

    abierta o percutnea.Reseccin va toracotoma

    Tomado de: Manual de patologa clnica veterinaria en pequeos animales,

    Davidson et al, 2000.

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    12.2. TIPOS DE BIOPSIA

    CUADRO 3. Diferentes tipos de biopsia

    Tipos de biopsia Breve descripcin y caractersticas

    Escisional

    -Extirpacin quirrgica-A menudo requiere anestesia general-Son importantes las consideraciones de lugar ytamao.

    Incisional

    -Eliminacin nicamente de una parte representativa dela lesin.-Problemas de cicatrizacin si es una neoplasia-Permite la planificacin de abordajes teraputicosadicionales.

    Con trocar -Eliminacin de un cilindro de tejido-Normalmente uso limitado a la piel

    Con aguja

    -Eliminacin de un pequeo ncleo cilndrico de tejido onicamente de clulas.-Es importante la precisin; es til guiarlas medianteecografa-Poco invasiva

    Endoscpica

    -Eliminacin de pequeas muestras por avulsin o porescisin mediante pinzas de biopsia de los tractosdigestivo y respiratorio y de los orificios corporales.-Pequeas muestras de tejido

    -Poco invasiva-Requiere sedacin o anestesia general en funcin dellugar de muestreo.

    Exfoliativa

    Recogida de clulas descamadas (de forma natural opor legrado) procedentes de superficies externas ointernas.Normalmente se realiza un estudio citolgico.Simple y fcil, en funcin de la localizacin.Poco invasiva, en funcin de la localizacin.

    Tomado de: Manual de patologa clnica veterinaria en pequeos animales,Davidson et al, 2000.

    A continuacin se explica de forma general como se obtienen las muestras por

    biopsia.

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    12.3. BIOPSIAS ESCISIONALES E INCISIONALES

    La biopsia escisional permite extirpar la lesin entera en una sola operacin. En

    cambio la biopsia incisional elimina de forma deliberada solo una parte

    (idealmente representativa) de la lesin. Por lo general basta con este tejido para

    los propsitos diagnsticos o de planificacin, ya que es posible que la lesin

    est situada cerca de un tejido u rgano vital y la extirpacin comprometa la

    integridad del rgano, que la lesin sea infiltrativa o que sea necesario

    determinar su naturaleza (neoplsica, maligna o benigna) antes de ir ms all.

    No se necesitan instrumentos especiales para las biopsias escisionales o

    incisionales; es suficiente con el instrumental quirrgico estndar, es decir,bistur, pinzas con dientes, tijeras, mosquitos e instrumental de sutura. Hay que

    tener cuidado con la biopsia escisional cuando existe alguna duda sobre la

    capacidad de coagulacin sangunea del paciente.

    Cuando se obtiene una biopsia por incisin para realizar un estudio

    histopatolgico antes de planificar una ciruga ms radical, se recomienda que el

    tejido incluya un margen de tejido normal siempre que sea posible. (Davidson et

    al, 2000).

    12.4. BIOPSIA CON AGUJA Y CON TROCAR

    El trocar de keyes, que es ampliamente utilizado para obtener ncleos circulares

    de epidermis y dermis de 5 mm de dimetro o menores. Estos instrumentos son

    adecuados para la obtencin de mltiples muestras cutneas de perros y gatos y

    tambin cuando la lesin es pequea, focal y puede ser abarcada por el trocar de

    biopsia. Las biopsias elpticas pueden realizarse bajo sedacin y anestesia local,

    al igual que se hacen normalmente las biopsias de sacabocados. (Davidson et al,

    2000).

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    12.4.1. MATERIAL

    Las agujas para realizar biopsias son de dos tipos: las de gran calibre y las de

    pequeo calibre, y su longitud vara entre los 12 mm y los 15 cm.

    CUADRO 4. Tipos de aguja de biopsia

    Denominacin Nombre G Muestra

    Gran calibre

    Vim-silvermanmodificada

    Tru-cut

    OsgoodJamshidi

    Menghini

    14

    14

    15/1615

    15

    Cilindro de tejido (rin).

    Cilindro de tejido (todos rganos y tejidos).

    Medula sea (tejmedular + sangre).Trepano seo (hueso medula).Cilindro de tejido (hgado

    Aguja fina Hipodrmica 21-25 Clulas (aspiracin cualquier rgano).

    Tomado de: Manual de patologa clnica veterinaria en pequeos animales,

    Davidson et al, 2000.

    CUADRO 5. Ventajas y desventajas de las tcnicas con aguja

    Ventajas Desventajas

    -Poco invasivas pero depende de lalocalizacin.

    -Rpidas, citologa por aguja fina en menosde una hora.

    -Repetibles; depende del tamao,localizacin y naturaleza de la lesin.

    -Anestesia; sedacin con anestesia localms que anestesia general.

    -Adecuadas para pacientes debilitados ogeritricos.

    -Tamao de muestra pequeo; pueestar fragmentada.

    -Es posible que no sea representativa toda la lesin.

    -Es posible que no se muestree la lesfocal, a menos que sea guiada mediaecografa.-puede dar falsos negativos.

    -La interpretacin requiere un expe(especialmente la aspiracin con ag

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    -Relacin coste-eficacia, ya que elinstrumental de muestreo no es caro.

    fina).

    -diseminacin de las clulas de uneoplasia maligna (raro).

    Tomado de: Manual de patologa clnica veterinaria en pequeos animales,Davidson et al, 2000.

    12.5. MANIPULACIN DE LOS TEJIDOS Y DE LAS BIOPSIAS

    El manejo correcto de las muestras liquidas y tisulares despus de realizar la

    biopsia o la extraccin es una fase importante a la que a menudo no se le presta lasuficiente atencin.

    El manejo inicial tras su obtencin, la fijacin y el transporte de la muestra pueden

    influir en el xito del diagnostico; las muestras mal fijadas o mal manipuladas,

    especialmente si son pequeas (por ejemplo, biopsia endoscpica), pueden

    impedir que se realice un diagnostico lgico. (Davidson et al, 2000).

    12.5.1. MUESTRAS LQUIDAS

    La clave del xito est en que sean procesadas rpidamente, idealmente en el

    mismo da. Cuando las muestras pueden llevarse al laboratorio para ser

    examinadas el mismo da de su obtencin, debe disponerse un volumen

    representativo, no ms de 20 ml, en un contenedor estril sin fugas.

    Si el lquido tiende a coagularse, debe emplearse EDTA o un anticoagulante

    similar.

    Cuando no sea posible procesar un lquido fresco sin fijar, deben realizarse

    extensiones sobre portaobjetos. Si el lquido tiene una de gran densidad celular,

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    puede extenderse una pequea gota de la suspensin utilizando la tcnica

    hematolgica convencional. Es un mtodo similar a la tcnica estndar utilizada

    para hacer extensiones sanguneas, las clulas ms grandes y los agregados

    celulares tienden a distribuirse en el rea con forma de pluma de la extensin. Por

    consiguiente, el extremo con forma de pluma debe terminar dentro del

    portaobjetos. Si se coloca demasiado material se perdern estas clulas,

    especialmente si la viscosidad es baja o se aplica un ngulo o una velocidad

    incorrectos a la hora de hacer avanzar el portaobjetos superior.

    Cuando la densidad celular sea baja, el contenido celular debe concentrarse, si es

    posible, mediante centrifugacin a 1.500 rpm durante 3-5 minutos o, si no hay una

    centrifuga disponible, mediante la sedimentacin por gravedad de la muestradurante unos 30 minutos. Las muestras de lquido cefalorraqudeo requieren un

    manejo especial (Jannison y Lumsden, 1988) y deben estar listas para su examen

    antes de pasada una hora desde su extraccin para evitar las alteraciones

    morfolgicas.

    Las extensiones deben secarse lo ms rpido posible al aire agitndolas

    vigorosamente o utilizando un pequeo secador de manos a baja temperatura.

    Entonces pueden ser enviadas al laboratorio en un contenedor apropiado. No es

    recomendable realizar la fijacin y el transporte en alcohol al 95%. (Davidson et al,

    2000).

    12.5.2. MUESTRAS HISTOLGICAS

    El tamao de las muestras histolgicas vara desde unos pocos milmetros de

    dimetro, en el caso de las biopsias endoscpicas y de los fragmentos exfoliados,

    hasta grandes masas neoplsicas de 15-20 cm de dimetro o ms.

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    Las muestras histolgicas pequeas deben colocarse en una placa de Petri sobre

    un soporte de espuma no vellosa o una base similar y deben humedecerse con

    suero salino isotnico estril o con medio de cultivo para tejidos hasta el momento

    de su fijacin, alternativamente, y si es posible, se fijan dentro de los 5-20 minutos

    posteriores a su obtencin.

    Las muestras grandes se colocan sobre placas o bandejas limpias y estriles (por

    ejemplo, placas de petri o bandejas de acero inoxidable) antes de seleccionar las

    reas que van a ser fijadas para el examen histopatolgico o utilizadas para otros

    exmenes (por ejemplo, bacteriolgico o bioqumico).

    Las muestras grandes siempre plantean un problema para los clnicos remitentes,ya que el dogma tradicional de la fijacin de las muestras de tejido con formalina a

    razn de un volumen de tejido por 10 volmenes de formalina, dejado de lado

    por los anatomopatologos, a menudo queda anulado por el tamao y complejidad

    de estas muestras. En el caso de masas bien definidas o encapsuladas, como las

    neoplasias de la superficie cutnea de unos 3-4 cm de dimetro, la fijacin con

    formalina a razn 1:10 todava es factible, pero permanece el problema de la

    penetracin adecuada del fijador en la muestra. Si no se produce una correcta

    penetracin, la muestra de tejido sufre una autolisis, lo que dificulta o imposibilita

    la interpretacin histopatolgica.

    El problema tiene una solucin lgica que puede aportar una informacin til

    adicional para el diagnostico. En el caso de masas pequeas o de lesiones bien

    definidas, nicamente con una biseccin es suficiente y la muestra puede fijarse

    en forma de dos mitades (preferiblemente seccionadas de forma longitudinal). Si la

    lesin debe ser dividida en dos, hay que hacerlo completa y uniformemente.

    Muy a menudo el anatomopatolgico recibe muestras deformadas, que son

    difciles de orientar y de convertir en bloques porque la muestra fresca fue

    seccionada de forma incorrecta. Es posible que las lesiones de mayor tamao y

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    las lesiones irregulares tengan que ser sometidas a ms de una seccin o

    seccionadas en ms de un plano. En estos casos es importante que el clnico

    remitente informe al anatomopatlogo sobre lo que se ha hecho y de que partes

    de la lesin, si no es completa, se han enviado. Esto puede hacerse mediante una

    descripcin escrita, pero probablemente la mejor forma y la ms fcil de hacerlo es

    enviando un diagrama comentado.

    Nunca deben colocarse en un mismo contenedor las diferentes muestras tisulares

    de un mismo animal (por ejemplo, una verruga cutnea, un pulis oral y un tumor

    anal no deben depositarse juntos). La colocacin de mltiples muestras sin

    identificar y procedentes de distintos lugares en un mismo contenedor provoca una

    gran inquietud a los anatomopatlogos. (Davidson et al, 2000).

    12.5.3. FIJACIN DE LA MUESTRA

    La fijacin es el proceso por el cual se evitan o se previenen los cambios

    autolticos que se producen en los tejidos, a menudo favorecidos por agentes

    infecciosos, inflamaciones y por un mal manejo fsico despus de obtener la

    muestra. El objetivo es utilizar un producto para fijar y conservar la arquitectura

    celular para la interpretacin y la valoracin histopatolgica.

    El mejor fijador para la mayora de propsitos diagnsticos es aun la solucin de

    formalina, relativamente barata, fcil de usar y, si se maneja prudentemente, no es

    toxica ni irritante para sus usuarios. Una gran ventaja es que la formalina es tan

    buen conservante como fijador, por lo que los tejidos fijados con esta sustancia

    pueden guardarse durante meses si es necesario. (Davidson et al, 2000).

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    13. TOMA, CONSERVACIN Y ENVO DE MUESTRAS DE ORINA

    La orina es una sustancia potencialmente peligrosa porque pueden haber en ella

    organismos causantes de zoonosis como, por ejemplo, los del gnero Leptospira;

    por lo tanto hay que llevar guantes desechables durante la obtencin y el manejo

    de las muestras de orina. (Davidson et al, 2000).

    Es importante emplear el mtodo adecuado para la obtencin de orina.

    Los principales son:

    13.1. MICCIN ESPONTNEA

    13.1.1. MATERIAL

    Tubo recolector estril

    13.1.2. Tcnica

    La orina se recoge durante la miccin o mientras se exprime manualmente

    la vejiga de la orina. La primera fraccin de orina es la mejor muestra

    cuando se sospecha que la lesin se encuentra en la parte ms distal del

    tracto urinario, por lo que sirve para obtener e identificar tapones uretrales,

    cristales, urolitos, bacterias, infecciones vricas o hemorragias. Sin

    embargo, tambin es la muestra con ms probabilidad de estar

    contaminada con clulas, bacterias y restos celulares/ espermatozoides del

    tracto genital y pelo circundante. Figura 65. (Davidson et al, 2000).

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    Figura 65. Miccin espontnea

    La fraccin intermedia es la mejor muestra para la mayora de pruebas, y la

    fraccin final de orina resulta optima para evaluar la existencia de una

    enfermedad prosttica y, en algunos casos para obtener el sedimento o la

    hemorragia que puede estar depositada en el suelo de la vejiga.

    Hay que recoger la mayor cantidad de orina posible en un recipiente inerte y

    estril de plstico, acero o cermica y luego transferido a un recipiente

    estril.

    La orina obtenida por miccin espontanea esta casi siempre contaminada

    por bacterias; sin embargo es un mtodo aceptable para realizar el examen

    fsico, examen qumico, medir el pH y evaluar el aspecto microscpico.

    Este mtodo no es adecuado para realizar un cultivo urinario. (Davidson et

    al2000).

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    13.2. CISTOCENTSIS

    13.2.1. MATERIAL

    Jeringas de 5ml 10ml

    Torundas de algodn

    Alcohol al 70%

    Yodo

    Recipiente estril de plstico

    Mquina para rasurar

    Figura 66. Material para cistocentsis

    13.2.2. TCNICA

    Se debe sujetar al perro en posicin decbito lateral sobre la mesa de

    exploracin. Es necesario que el perro o gato cuente con la vejiga pltora o

    lo suficientemente llena como para palparse con facilidad a travs de la

    pared abdominal. (Tachika, 2008).

    Se prepara de manera antisptica la regin del abdomen caudal y ventral

    (rasurado, lavado y embrocado).

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    Para realizar la cistocentsis, se debe ubicar perfectamente bien la vejiga

    urinaria, a travs de palpacin abdominal externa, la vejiga llena de orina se

    identifica por palpacin y se encuentra apoyada sobre la pared abdominal

    ventral caudal.

    Una vez que se ha localizado la vejiga urinaria, se procede a realizar la

    puncin trans-abdominal con la jeringa de 5 o 10ml, en un ngulo de 45

    grados, con un movimiento firme, pero cuidadoso y delicado. Ver figura 67.

    Se succiona un poco el mbolo de la jeringa, para verificar si se obtiene

    lquido (orina) y en caso de una muestra positiva, se termina de llenar la

    jeringa, para despus retirarla del paciente rpidamente. Posteriormente se

    coloca por unos segundos una torunda de algodn mojada con alcohol en

    el sitio de puncin abdominal

    La orina se recoge con una jeringa o en un recipiente estril, de tal modoque pueda emplearse para el anlisis y/o para el cultivo microbiolgico y el

    antibiograma. Ver figuras 68 y 69. (Davidson et al, 2000).

    La cistocentsis se considera el mtodo de eleccin para la obtencin de

    orina debido a que proporciona muestras no contaminadas por bacterias y

    clulas procedentes de la uretra distal, lo que permite interpretar de forma

    ms exacta los resultados de los cultivos y de los antibiogramas. (Elliot,

    1996; Scott-Moncrieff, 1996).

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    Figura 67. Se introduce la aguja Figura 68. Obtencin de muestra

    Figura 69. Frasco estril de boca ancha

    13.3. CATETERIZACIN

    Es un mtodo til para identificar la localizacin de las obstrucciones parciales o

    totales de la uretra, especialmente cuando son debidas a urolitos, estenosis o

    cuerpos extraos. (Davidson et al, 2000).

    La cateterizacin tambin se emplea en los estudios diseados para controlar el

    volumen de orina y la tasa de produccin en estudios sobre insuficiencia renal,

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    para administrar el medio de contraste radiogrfico y para determinar el volumen

    de orina que queda en la vejiga tras la miccin.

    La cateterizacin es un procedimiento poco invasivo y bien tolerado por muchos

    perros adultos, pero las perras, gatas y los gatos enteros requieren con frecuencia

    la administracin de sedantes o de anestsicos generales. (Smarick et al, 2004).

    Aunque es un procedimiento muy utilizado, tiene sus inconvenientes, pueden

    transportarse los organismos presentes en la parte distal de la uretra y del tracto

    genital a la vejiga y provocar con ello una infeccin del tracto urinario.

    (Biertuempfel et al, 1981).

    13.3.1. MATERIAL

    Mquina para rasurar

    Sondas flexibles rgidas

    Rin de plstico o metal

    Tubo recolector estrilGasas estriles

    Solucin salina

    13.3.2. TCNICA

    Un ayudante debe sujetar al perro en posicin decbito lateral sobre la

    mesa de exploracin. (Tachika, 2008).

    Un segundo ayudante debe limpiar con una gasa que contenga un poco de

    solucin salina isotnica la punta del prepucio del perro. Con otra gasa, se

    realiza el mismo procedimiento sobre la punta del pene.

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    El ayudante, quien previamente se ha puesto guantes estriles, recibe el

    catter uretral estril y sin tocar al paciente, calcula la longitud que va a

    introducir del mismo. Esto se realiza trazando de manera imaginaria el

    trayecto que seguir el catter a travs de la uretra peneana, la uretra

    prosttica hasta llegar finalmente a la vejiga urinaria.

    Se retrae la piel del prepucio de manera que quede expuesta la punta del

    pene y se visualice el orificio uretral, por donde se introducir gentilmente el

    catter urinario, previamente lubricado con gel estril. Ver figura 70

    Figura 70. Se retrae la piel y se introduce la sonda previamente lubricada.

    Una vez que se ha introducido el catter y comienza a salir la orina a travs

    del mismo, se obtiene la muestra en un recipiente estril. Figuras 71 y 72.

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    Figura 71. Obtencin de muestra Figura 72. Obtencin de muestra

    13.4. CONSERVACIN

    El mtodo de conservacin es igual en las tres tcnicas mencionadas

    anteriormente. (Aguilaret al, 2005).

    Una vez que se ha obtenido, la muestra de orina debe ser analizada lo ms

    pronto posible.

    Existen diferencias de criterio entre autores, pero en ningn caso se

    recomienda que se analice despus de dos horas cuando se dispone a

    temperatura ambiente; si no se va a cumplir esta condicin, es necesariorefrigerarla y realizar el anlisis antes de cuatro horas. Si se requiere

    mantener la muestra por ms tiempo, se deber dividir en dos porciones, y

    conservar cada una de la siguiente forma:

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    -Formalina amortiguada al 40%. Se agrega 1 gota por cada 20 ml de orina