GENEROS: PSEUDOMONAS y BURKHOLDERIA.

CLASIFICACION RECIENTE (1994 Manual de Bergey´s)

FAMILIA PSEUDOMONADACEAEFAMILIA BURKHOLDERIACEAE (1993)

CARACTERÍSTICAS PRINCIPALES DE PSEUDOMONAS SPP. Y BURKHOLDERIA SPP. :

1. Bacilos de tamaño mediano de 0.5 a 1.0 x 1.5- 5.0 m

Gramnegativos rectos o ligeramente curvos 2. Son aerobios estrictos 3. Mayoría son catalasa y citocromo-oxidasa positivos 4. Pseudomonas especies y Burkholderia pseudomallei

son MÓVILES 5. Burkholderia mallei es INMOVIL y requiere 1% de

glicerol en el medio de cultivo para su óptimo crecimiento

6. Utilización de aazúcares por vía oxidativa 7. La mayoría especies de Pseudomonas producen

pigmentos solubles 8. No requieren de medios enriquecidos y crecen en

MacConkey Agar 9. Usados biorremediación. 10. Pseudomonas producen pigmentos.

ESPECIES DE PSEUDOMONAS DE INTERÉS VETERINARIO

HOSPEDADORES ENFERMEDAD

P. aeruginosa

Animales domésticos "oportunista“

Genera Infecciones piogénicas

*P. mallei

Equinos Muermo – granulomas purulentos piel y TR

(Asia, Australia y África. Zoonosis.

*P. pseudomall

ei

Animales domésticosMELIOIDOSIS (Falso

Muermo)Nódulos y abscesos en

órganosZoonosis* P. mallei y P. pseudomallei están reclasificadas en el Género

BURKHOLDERIA

Otras especies de Pseudomonas

saprofitas:

P. (Burkholderia) cepacia esta presente en infecciones humanas con fibrosis quisticas

P. stutzeri : rara vez causa infecciones en animales

P. fluorescens puede causar lesiones en reptiles y peces

HABITAT

Ampliamente distribuidos en la naturaleza y mundialmente

Son saprofitos de vida libre en suelo, agua y vegetación en descomposición

P. aeruginosa también puede encontrarse en piel, membranas mucosas y heces de animales

RESISTENCIA

1. Presencia de pus los protege 2. Sobreviven en desinfectantes de amonio

cuaternario, compuestos yodados y fenólicos, el cloro es efectivo

3. Humedad adecuada puede sobrevivir por largos periodos en llaves de agua, utensilios, pisos, instrumentos, humidificadores y equipos para apoyo respiratorio

4. Son susceptibles al calor 550C por una hora y al oxido de etileno

CARACTERÍSTICAS CULTURALES

1. Son aerobios obligados (O/F) (+/-)

2. P. aeruginosa puede utilizar el nitrato en lugar de oxigeno molecular como aceptor final de electrones (RESPIRACIÓN ANAEROBIA)

3. Crecen en agar sangre, tripticasa soya agar y/o agar MacConkey a 37º C por 24 – 48 horas

4. Muchas especies crecen mejor 20 - 30ºC (P. fluorescens)

5. En agar sangre, colonias de P. aeruginosa son grandes,

grises, planas, de bordes irregulares de 3 a 5 mm

6. Producen hemólisis alrededor de la colonia en AS7. Presentan un aroma afrutado (grappe-like)8. Crece en MC sin utilizar la lactosa

CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS Oxidasa - positivas excepto B. mallei Degradan Glucosa por vía oxidativa - Prueba

O/F. Reducen Nitratos a Nitritos y nitrógeno

molecular Indol negativoBUSCAR CUADRO PARA DIFERENCIAR P. aeruginosa de otras Pseudomonas

saprofitas

9. P. pseudomallei colonias redondas, convexas que

al envejecer son granulares de color pardo y no produce pigmentos

PSEUDOMONA AERUGINOSA

1. Son bacilos Gramnegativos, anaerobios facultativos 2. Producen dos pigmentos hidrosolubles: Uno azul verdoso soluble en cloroformo y agua denominado PIOCIANINA y otro verde amarillento PIOVERDINA. FLUORESCEÍNA o pioverdina no soluble en cloroformo. 3. En ocasiones, una cepa puede producir pigmento rojo (piorrubina) o pigmento pardo negruzco (piomelanina) 4. Patógeno oportunista. 5. Resistente a los ANTIBIOTICOS comunes.

FACTORES DE VIRULENCIA

1. Pili y flagelos, que facilitan la adherencia a células epiteliales susceptibles del tracto respiratorio (COLONIZACION)

2. Colonizan epitelio superficial y también tejido profundo (caso: quemaduras y traumatismos graves)

3. Cápsula polisacáridica: antifagocitica4. Endotoxina (LPS) y Lípido A: median los

efectos biológicos del síndrome séptico: fiebre, shock, leucopenia, coagulación intravascular diseminada

5. Exotoxina A: producida por cepas patógenas que inhiben la síntesis de proteínas en células eucarióticas, causando necrosis

6. Exotoxina S: no muy claro mecanismo de acción, pero inhibe tambien la síntesis proteica

7. Fosfolipasa C destruye la membrana

citoplasmática (que actua como surfactante pulmonar)

, causando atelectasia

8. Proteasas: involucradas en invasión y

destrucción de tejido

Leucocidinas: inhiben la función de neutrófilos y

linfocitos 9. Produce una Enterotoxina que causa diarrea en infecciones intestinal

|0. Hemolisinas que actúan en

sinergismo con Fosfolipasa C para descomponer

lípidos y lecitina facilitando la destrucción tisular

||. Producen Piocianinas que suprimen el

desarrollo de otras bacterias, producen daños

oxidativos en los tejidos

PATOGENICIDAD

PATOGENO OPORTUNISTA

1. Contaminante frecuente en procesos patológicos con otras bacterias 2. Patógeno oportunista en tejidos debilitados en caso de quemaduras, heridas, pacientes con neoplasias, débiles e inmunodeficientes y en animales jóvenes 3. Reemplaza a bacterias que han sido eliminadas de procesos infecciosos por tratamiento antimicrobianos y puede causar septicemias mortales 4. Rara vez infecta a individuos sanos.

NATURALEZA ANTIGENICA

Especie muy heterogénea, con 20 serotipos basados en diferentes antígenos "O“

Pueden tipificarse por bacteriófagos y producción de piocianinas (bacteriocinas)

DIAGNÓSTICO LABORATORIAL

MUESTRAS: 1. Orina, pus, tejidos infectados, hisopados con exudado o raspado de superficie tisulares infectadas 2. Examen directo de la muestra con Tinción de Gram es de poca utilidad

1. Sembrar en medios simples: agar nutItivo 2. Crecen en agar sangre / MacConkey agar a 370C en

aerobiosis x 24- 48 h 3. Colonias irregulares grandes, planas, translúcidas,

de 3 a 5 mm, y pueden mostrar un brillo 4. Azul metálico (Piocianina).5. Olor a frutas (aminoacetofeno)6. Hemólisis Beta en AS7. Variación colonial: Forma S (lisa y brillante); Forma

R ( rugosa y seca); y Forma M (mucoide)8. MacConkey agar forma colonias grandes pálidas

( lactosa negativo) con pigmentación verde azulada9. Frotis de colonias: bacilos gramnegativos, tamaño

mediano

AISLAMIENTO Y CULTIVO DE PSEUDOMONA AERUGINOSA

1. Producción de pigmentos hidrosolubles: PIOCIANINA (azul), PIOVERDINA llamada “fluoresceína” (amarillo), piorrubina (rojo oscuro) y piomelanina (marrón oscuro) según medio de cultivo empleado 2. Movilidad por flagelos polares3. Licuefacción de gelatina4. Peptoniza la leche tornasolada

  RESUMEN DE LA IDENTIFICACION

5. Utiliza citrato fuente de carbono.6. Indol negativo.7. Oxidasa positiva.8. Reduce Nitratos a Nitritos y a nitrógeno Molecular.9. Prueba O/F positiva para Oxidación de la glucosa

Elaborado por: Profa . Zoraida M. Nava Lotuffo. M,V. MSc.