8.Efecto de Las Drogas Sobre El Musculo Liso Aislado

Resultados de laboratorio de Resultados de laboratorio de efectos de drogas sobre músculo efectos de drogas sobre músculo

liso aislado.liso aislado.

Paula Benavides Zamora A80906Paula Benavides Zamora A80906Daniel Guevara Bertsch A82860Daniel Guevara Bertsch A82860Sindy Mora Gutiérrez A84193Sindy Mora Gutiérrez A84193

Karina Román Méndez A75697Karina Román Méndez A75697

Objetivos1. Determinar y comparar el efecto sobre el tono, la amplitud y la

frecuencia de contracción de la acetilcolina, adrenalina y pilocarpina sobre el músculo liso aislado de conejo en solución Tyrode con respecto a un control.

2. Observar y analizar la modificación sobre el tono, la amplitud y la frecuencia de contracción que produce la atropina con respecto a un control, y el efecto sobre la atropina al añadir acetilcolina en el músculo liso de intestino de conejo aislado en solución Tyrode.

3. Determinar y analizar la respuesta en torno a la excitabilidad y la contractibilidad del músculo liso aislado de conejo en solución Tyrode, al agregar sustancias que cambian las concentraciones de iones en el LEC, tales como EDTA y KCL, comparadas con un control.

Generalidades del musculo liso.

• Contracción depende de la concentración intracelular de calcio.

• El calcio aumenta intracelularmente por diferentes medios lo cual le permite una variedad grande de maneras de contraerse y una variedad de estímulos que realizan esto.

• Su regulación radica en la cadena liviana de miocina(MLC)

Figura 1.0: Los 3 mecanismos responsables de la generación de Corrientes de calcio transientes que desencadena la contracción del musculo liso. En la figura A, vemos como canales operados por receptores o un oscilador de membrana inducen a la despolarización de la membrana que induce a la entrada de calcio y la contracción. En la figura B vemos como un oscilador citosolico induce la despolarización que induce una entrada de calcio que genera la contracción. En la figura C vemos como un oscilador en las células intersticiales de Cajal induce la despolarización de la membrana.(Berridge 2008)

Fuente: Berridge, M. J.Smooth muscle cell calcium activation mechanisms. The Babraham Institute, Babraham, Cambridge UK.J. Physiol 586.21 (pp 5047–5061) 2008

Fuente: Sanders, K.M. Regulación de la excitación de musculo liso y su contracción .Department of Physiology and Cell Biology, University of Nevada School of Medicine, Reno, NV, USA. Neurogastroenterol Motil (Suppl. 1), (pp 39–53) 2008. Fig 1.

Control Inicial

Figura 3.0: Registro de control sobre el músculo liso aislado de intestino de conejo en solución Tyrode.

Fuente: Hoja de recolección de datos de mesa 4 , Jueves 12 de mayo del 2011, Laboratorio de Fisiología para Medicina. Universidad de Costa Rica.

Figura 27. El oscilador Citosolico de calcio responsable de la actividad marcapaso de las células intersticiales de Cajal, libera pulsos periódicos de calcio que forman una onda de calcio.El incremento de Ca2+ activa canales de Cl- (CLCA) que dan corrientes de entrada espontaneas transientes (STICS) que se suman para formar la corriente espontanea de despolarización (STD) que resulta en la generación de ondas lentas de despolarización de la membrana. La corriente al moverse a través de la GAP junctions permite esas ondas de transmitirse a las células vecinas de musculo liso y se contraen.Fuente: Berridge, M. J.Smooth muscle cell calcium activation mechanisms. The Babraham Institute, Babraham, Cambridge UK.J. Physiol 586.21 (pp 5047–5061) 2008

Resultados de Acetilcolina

Figura 3: Registro del efecto de la acetilcolina sobre el músculo liso aislado de intestino de conejo en solución Tyrode.

Fuente: Hoja de recolección de datos de mesa 4, Jueves 12 de mayo del 2011, Laboratorio de Fisiología para Medicina. Universidad de Costa Rica.

Figura 4. Promedio de las variaciones en el tono del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de acetilcolina.Fuente. Anexo 1, cuadro 1

Figura 5. Promedio de las variaciones en la frecuencia de contracción del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de acetilcolina.Fuente. Anexo 1, cuadro 2

Figura 6. Promedio de las variaciones en la amplitud del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de acetilcolina.Fuente. Anexo 1, cuadro 3

Fuente: Billington Charlotte K., Le Jeune Ivan R Young Kenneth W. and Hall Ian P. 2008. A major functional role for phosphodiesterase 4D5 in human airway smooth muscle cells. American journal of respiratory cell and molecular biology, 38(1), 1-7. Cuadros extraído de referencias del articulo.

Resultados de Adrenalina.

Figura 7: Registro del efecto de la adrenalina sobre el músculo liso aislado de intestino de conejo en solución Tyrode.


Figura 8: Promedio de las variaciones en el tono del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de adrenalina.

Fuente: anexo 1, cuadro 4.

Figura 9: Promedio de las variaciones en la frecuencia de las contracciones del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de adrenalina.

Fuente: anexo 1, cuadro 5

Figura 10: Promedio de las variaciones en la amplitud de las contracciones del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de adrenalina.


Membrana Celular

β

Receptor

Adrenalina

β ال

Gα

GTP

GDP

Adenilato Ciclasa

PK-A

MLCK

HIPERPOLARIZACIÓN

AMPck+

Fuente: Presentación realizada por estudiantes de medicina, resultados de laboratorio “efecto de drogas en músculo liso aislado”, 2007. Modificada

2011

Resultados de Pilocarpina.

Figura 11: Registro del efecto de la pilocarpina sobre el músculo liso aislado de intestino de conejo en solución Tyrode.


Figura 12: Promedio de las variaciones en el tono del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de pilocarpina.

Fuente: anexo 1, cuadro 7

Figura 13: Promedio de las variaciones en la frecuencia de las contracciones del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de pilocarpina.


Figura 14: Promedio de las variaciones en la amplitud de las contracciones del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de pilocarpina.


Pilocarpina

M3

Ca++

α Bγ

PLC

IP3 DAG

PIP2 Calmodulina

Ca++

Ca++

Ca++

Ca++Ca++

Achasa

Fuente: Presentación realizada por estudiantes de medicina, resultados de laboratorio “efecto de drogas

en músculo liso aislado”, 2007. Modificada 2011

Resultados del Bloqueo competitivo de la Atropina sobre la Acetilcolina.

Figura 15: Registro de efecto de atropina, en el efecto de la acetilcolina en el músculo de intestino de conejo aislado en solución Tyrode.Fuente: Hoja de recolección de datos de mesa 1, Jueves 12 de mayo del 2011, Laboratorio de Fisiología para Medicina. Universidad de Costa Rica.

http://www.ropana.cl/plantas_toxicas/alcal.htm

Fuente: Anexo 1, cuadro 10.

Fuente: Mathias, E., et al. Frequency encoding of cholinergic- and purinergic-mediated signaling to mouse urinary bladder smooth muscle: modulation by BK channels.Am J Physiology Regulatory Integrative Comp Physiology292:616-624, 2007.

Fuente: Sushil K. S., Molecular, functional, and pharmacological targets for the development of gut promotility drugs. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 291:G545-G555, 2006. Modificado 2011.

AtropinaAtropina

AtropinaAtropina

Atropina


Atropina

Atropina Atropina

Atropina

Atropina


Atropina

Atropina

AtropinaAtropina

Atropina


Atropina

AtropinaAtropina

Atropina

Atropina


Resultados de EDTA

Figura 19: Registro de un minuto de control y tres minutos posteriores a la adición de 10 gotas de EDTA a músculo liso aislado de intestino de conejo obtenido mediante un quimógrafo.Fuente: Mesa 4 Laboratorio de Fisiología para Medicina, jueves 12 de mayo del 2011.

EDTA quela los iones de calcio

Aumenta la probabilidad de apertura de los canales de Na+estabilizados por Ca+2

La entrada de Na+ produce despolarización

y así es como se explica la

hiperexcitabilidad (efecto inicial)

Figura 19: Registro de un minuto de control y tres minutos posteriores a la adición de 10 gotas de EDTA a músculo liso aislado de intestino de

conejo obtenido mediante un quimógrafo.Fuente: Mesa 4 Laboratorio de Fisiología para Medicina, jueves 12 de

mayo del 2011.

La despolarización activa los canales de

Ca+2 voltaje dependientes, y por el gradiente antes creado

el Ca+2 SALE!!

El Ca+2 que sale es quelado por EDTA y el

efecto total es una disminución de la

concentración de Ca+2 y por lo tanto

RELAJACIÓN!!!

Figura 19: Registro de un minuto de control y tres minutos posteriores a la adición de 10 gotas de EDTA a músculo liso aislado de intestino de

conejo obtenido mediante un quimógrafo.Fuente: Mesa 4 Laboratorio de Fisiología para Medicina, jueves 12 de

mayo del 2011.

Fuente: Jankowski, R., et al. Development of an experimental system for the study of urethral biomechanical function. 2004. Am J Physiol Renal Physiol 286: F225–F232.

Resultados de KCl

Figura 23: Registro de un minuto de control y tres minutos posteriores a la adición de 10 gotas de KCl a músculo liso aislado de intestino de conejo obtenido mediante un quimógrafo.Fuente: Mesa 4 Laboratorio de Fisiología para Medicina, jueves 12 de mayo del 2011.

Cambio en la concentración iónica del LEC cambio en el potencial de membrana

Despolarización de la membrana con lo que aumenta la probabilidad de apertura de los VOCCs

Entrada de calcio por los VOCCs con loque aumenta [Ca+2]i

Fuente: Ratz P.H., Berg K.M. et al. Regulation of smooth muscle calcium sensitivity: KCl as a calcium-sensitizing stimulus 288:769-783, 2005.

Fuente: Ratz P.H., Berg K.M. et al. Regulation of smooth muscle calcium sensitivity: KCl as a calcium-sensitizing stimulus 288:769-783, 2005. Modificada.

CONCLUSIONES.

Referencias Bibliográficas.• Bigovic, D. et al. Relaxant Effect of the Ethanol Extract of Helichrysum plicatum

(Asteraceae) on Isolated Rat Ileum Contractions. Molecules. Department of Pharmacology, Faculty of Medicine, University of Nis, Bulevar dr Zorana Djindjica. 2010; 15:3391-3401.

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Anexos

Tono (mm)

Mesa Control 1 minuto 2 minuto 3 minuto

1 0 16 15 15

3 0 1,4 1,4 1,1

4 0 30 28 30

5 0 20 19 19

7 0 30 29 28

8 0 40 40 40

9 0 31 32 32

10 0 19 20 20

Promedio 0 23,425 23,05 23,1375

Desviación 0 11,89 11,87 12,03

n 8 8 8 8

Fuente: Hoja de recolección de datos, Jueves 12 de mayo del 2011, Laboratorio de Fisiología para Medicina, ME2012. Universidad de Costa Rica.

Cuadro 1: Tono en mm del músculo liso aislado de intestino de conejo al agregar acetilcolina

Frecuencia (contracciones/min)


1 14 7 13 9

3 11 8 14 12

4 13 2 7 13

5 11 10 13 12

7 8 0 0 0

8 5 0 0 0

9 4 0 0 0

10 9 3 0 0

Promedio 9,375 6 11,75 11,5

Desviación 3,58 3,39 3,20 1,73

n 8 5 4 4


Cuadro 2: Frecuencia en contracciones por minuto del músculo liso aislado de intestino de conejo al agregar acetilcolina.

Amplitud (mm)


1 5,5 2 2 2,5

3 0,5 0,4 0,15 0,25

4 5 3 3,5 3,5

5 10 2 3 4

7 7 0 0 0

8 17 0 0 0

9 5 0 0 0

10 13 25 0 0

Promedio 7,875 6,48 2,1625 1,28125

Desviación 5,23 10,39 1,48 1,66

n 8 5 4 4


Cuadro 3: Amplitud en mm del músculo liso aislado de intestino de conejo al agregar acetilcolina.

Tono (mm)


1 0 -1 -2 -2

3 0 -0.2 -0.5 -0.6

4 0 0 -3 -4.5

5 0 -3 -6 -7

7 0 -3 -4 -4.5

8 0 0 0 0

9 0 1 1 2

10 0 4 11 14

Promedio 0 -0.36666667 -0.5 -0.37142857

Desviación 0 2.65 5.56 6.99

n 8 6 7 7


Cuadro 4: Tono en mm del músculo de intestino de conejo al agregar adrenalina.



1 15 3 0 0

3 12 8 6 5

4 12 14 0 0

5 11 0 0 0

7 12 1 1 5

8 7 0 0 0

9 5 2 1 3

10 9 1 0 0

Promedio 10.375 4.83333333 2.66666667 4.33333333

Desviación 3.20 5.19 2.89 1.15

n 8 6 3 3


Cuadro 5: Frecuencia en contracciones/min del músculo de intestino de conejo al agregar adrenalina.

Amplitud (mm)


1 4.5 3.5 0 0

3 0.4 0.5 0 0

4 5 3.75 0 0

5 7 0 0 0

7 12 0 0.5 4.75

8 10 0 0 0

9 7 1 0 2

10 3 2 0 0

Promedio 6.1125 2.15 0.5 0.84375

Desviación 3.73 1.45 0.35 1.94

n 8 5 2 2

Cuadro 6: Amplitud en mm del músculo de intestino de conejo al agregar adrenalina.

Fuente: Hoja de recolección de datos, Jueves 12 de mayo del 2011, Laboratorio de Fisiología para Medicina, ME2012. Universidad de Costa Rica

Tono (mm)


1 0 8 10 9

3 0 0.5 0.3 0.4

4 0 11 23 19

5 0 7 15 19

7 0 34 37 34

8 0 31 30 29

9 0 27 28 27

10 0 25 29 28

Promedio 0 17.9375 21.5375 20.675

Desviación 0 12.71 12.17 11.30

n 8 8 8 8


Cuadro 7: Tono en mm del músculo de intestino de conejo al agregar pilocarpina.



1 17 18 19 13

3 12 13 14 12

4 13 12 21 13

5 11 13 14 13

7 9 17 14 14

8 9 11 12 13

9 7 9 22 24

10 8 9 12 10

Promedio 10.75 12.75 16 14

Desviación 3.24 3.33 4.04 4.21

n 8 8 8 8


Cuadro 8: Frecuencia en contracciones/min del músculo de intestino de conejo al agregar pilocarpina.

Amplitud (mm)


1 6 5 2.25 4

3 0.4 0.25 1.5 0.3

4 8 6 3.25 4.5

5 7 11 9 6

7 10 8 9 7

8 13 6 3 2

9 14 11 2 1

10 12 13 7 7

Promedio 8.8 7.53125 4.625 3.975

Desviación 4.45 4.11 3.18 4.24

n 8 8 8 8


Cuadro 9: Amplitud en mm del músculo de intestino de conejo al agregar pilocarpina.

Tono (mm)

Atropina Acetilcolina

Mesa Control (1min) 2min 3min 4min 5min

1 0 -2 -9 -4 2

3 0 0 -7 0 0

4 0 -9 -20 4 6

5 0 -4 -7 1 3

8 0 -9 -14 -2 -3

9 0 -8 -19 -1 -0,5

10 0 4 10 0 1

Promedio 0 -4,66666667 -9,42857143 -0,4 1,41666667

Desviación 0 5,12510163 10,11364 3,04959014 3,07272951

n 7 6 7 5 6


Cuadro 10: Tono en mm del músculo de intestino de conejo al agregar atropina y luego acetilcolina.

Frecuencia (contracciones/ min)


Mesa Control (1min) 2min 3min 4min 5min

1 14 11 0 9 12

3 11 5 0 13 12

4 12 9 0 11 10

5 9 3 0 0 3

7 9 9 8 11 9

8 12 7 3 5 8

9 21 12 0 2 8

10 9 2 0 0 0

Promedio 12,125 7,25 5,5 8,5 8,85714286

Desviación 4,015594601 3,65474252 3,53553391 4,18330013 3,07834216

n 8 8 2 6 7


Cuadro 11: Frecuencia en contracciones/min del músculo de intestino de conejo al agregar atropina y luego acetilcolina.

Amplitud (mm)


Control (1min) 2min 3min 4min 5min

Mesa

1 3 2,5 0 3 3

3 3 3 0 9 11,1

4 3 5 0 6,5 15

5 5 2 0 0 3

7 12 11 17 17 18

8 7 6 4 3 8

9 2 2 0 1 1

10 10 11 0 0 0

Promedio 5,625 5,3125 10,5 6,58333333 7,3875

Desviación 3,700868624 3,78849292 9,19238816 5,85163795 6,53499736

n 8 8 2 6 7


Cuadro 12: Amplitud en mm del músculo de intestino de conejo al agregar atropina y luego acetilcolina.

Tono (mm)

Sujetos Control 1 minuto 2 minuto 3 minuto

1 0 2 2,5 5

3 0 0 0 0

4 0 1 5 7

5 0 0 0 0

7 0 0 0 4

8 0 0 -1 -7

9 0 2,5 3,5 3

10 0 0 0 0

Promedio 0 1,833333333 2,5 2,4

Desviación 0 0,76 2,55 4,04

n 8 3 4 5


Cuadro 13: Tono en mm del músculo liso aislado de intestino de conejo al agregar 10 gotas de EDTA.

Frecuencia (contracciones/minuto)


1 13 3 9 13

3 12 11 12 12

4 13 16 12 11

5 13 12 0 0

7 8 8 6 3

8 9 8 8 5

9 6 8 7 5

10 7 7 6 0

Promedio 10,125 9,125 8,57142857 8,16666667

Desviación 2,76 3,87 2,57 4,31

n 8 8 7 6


Cuadro 14: Frecuencia en contracciones/min del músculo liso aislado de intestino de conejo al agregar 10 gotas de EDTA.

Amplitud (mm)


1 5 2 1 3

3 0,75 0,4 0,6 0,4

4 3,5 5 4 4,5

5 1 1 0 0

7 12 12 8,5 5

8 23 20 6 30

9 13 12 13,5 16

10 9 10 8 0

Promedio 8,40625 7,8 5,2 7,3625

Desviación 7,53 6,88 4,41 2,15

n 8 5 8 4


Cuadro 15: Amplitud en mm del músculo liso aislado de intestino de conejo al agregar 10 gotas de EDTA

Frecuencia (contracciones/minuto)


1 15 0 0 16

3 10 11 12 11

4 12 12 12 13

5 7 6 6 0

7 7 10 9 10

8 10 10 10 11

9 3 3 6 7

10 6 6 8 0

Promedio 8,75 8,28571429 9 11,3333333

Desviación 3,77 3,30 3,94 3,01

n 8 7 7 6


Cuadro 17: Frecuencia en contracciones/min del músculo liso aislado de intestino de conejo al agregar 10 gotas de KCl.

Amplitud (mm)


1 3 0 0 0,5

3 0,6 0,4 0,25 0,15

4 6,5 8 6 6

5 9 8 7 0

7 16 10,5 13,5 10,5

8 15 15 23 12

9 9 4 12 16

10 8 5 5 0

Promedio 8,3875 7,27142857 9,53571429 7,525

Desviación 5,29 4,73 7,40 6,43

n 8 7 7 6


Cuadro 18: Amplitud en mm del músculo liso aislado de intestino de conejo al agregar 10 gotas de KCl.

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