APL 1.3.3 Manual de Técnicas de Laboratorio Sección Hematología

APL 1.3.3

MANUAL DE TCNICAS DE LA SECCIN HEMATOLOGA (LABORATORIO CLNICO)

LABORATORIO CLINICO

Cdigo Versin Fecha Vigencia Pginas

: CHSJM APL 1.3-3 : 02 : Noviembre / 2013 : 2013 : 1 de 40

MANUAL DE TECNICAS DE LA SECCION HEMATOLOGIA

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INDICE

INDICE 1

HEMOGRAMA 2 VELOCIDAD DE ERITROSEDIMENTACION 10 RECUENTO DE RETICULOCITOS 13 TP Y TTPA 16 TIEMPO DE SANGRIA 22 RPR (REAGINAS PLASMATICAS RAPIDAS) 24 Mini VIDAS: DIMERO D, VIH, HBs Y HVC 27 CLASIFICACION DE GRUPO SANGUINEO 32 HEMOGLOBINA GLICADA 36

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HEMOGRAMA

1. Fundamento del test Analizar una muestra de sangre para hacer una evaluacin de los recuentos celulares, tales como glbulos rojos (eritrocitos), glbulos blancos (leucocitos) y plaquetas. Tambin evaluar parmetros de morfologa celular como, hematocrito y hemoglobina a travs del equipo ADVIA 120. Estandarizar la tcnica para la generacin de frotis sanguneo, tincin de tcnicos paramdicos y lectura de Tecnlogos mdicos del Laboratorio Clnico.

2. Campo de Aplicacin

Seccin de Hematologa del laboratorio clnico.

3. Tipo de muestra Un tubo de muestra sangunea con anticoagulante EDTA, tubo tapa lila. De preferencia en ayuno previo.

4. Transporte de muestra

Transportar el tubo tapado, en posicin vertical, en un recipiente o gradilla dentro de un contenedor slido a prueba de derrames tipo cooler con unidad refrigerante. No poner en contacto la Solicitud de examen con la muestra. Este se debe entregar al laboratorio hasta una hora despus de la toma de muestra.

5. Responsable

Tecnlogo mdico de la seccin Hematologa del laboratorio clnico.

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6. Procedimiento

6.1 Mantencin Diaria

6.1.1 En men operaciones de rutina ir a Estado del sistema, revisar los

ciclos restantes de los reactivos, teniendo presente cuanto le queda y si durante el da se tendr que cambiar algn reactivo, revisar el procedimiento de instalacin de reactivo en el punto 5 (pgina 10) del manual rpido usuario ADVIA 120.

6.1.2 Revisar el ruido de fondo. Asegurarse mirando la fecha y la hora de

la ltima lectura que se hizo, si es del da anterior hacer clic en actualizar para un nuevo recuento de fondo, si algn valor aparece en rojo, debe efectuarse un nuevo actualizar, si se repite un valor fuera de rango realizar un lavado de sistema.

6.1.3 Revisar el envase de rebosamiento para cerciorarse de que no

contenga lquido, tener precaucin que las tuberas que llegan a l no estn en contacto con el fondo del envase.

6.1.4 En men Utilidades ir a estado del analizador, donde se debe

verificar vacos y presin, temperaturas e intensidad de la luz (todos deben encontrarse en color verde). En caso de que algo se encuentre en color rojo realizar un reset hidrulico.

6.1.5 Para comenzar el da con una nueva lista de trabajo se debe

eliminar las muestras procesadas el da anterior, para esto ir al men Personalizar, Ver Configuracin, doble click en Fin de Da, para despus dar un ticket a iniciar SID y presionar Ok.

6.1.6 Vaciar los desechos del instrumento (ver manual usuario ADVIA

120).

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6.1.7 Cargar papel en la impresora. 6.1.8 Salir al panel de control de muestras. 6.1.9 Registrar todos los procedimientos diarios y semanales que se

realizan en el instrumento, para ello utilizar el checklist de MANTENCION DIARIA Y SEMANAL ADVIA 120, ubicado al costado izquierdo del equipo.

6.2 Paso de muestras con cdigo de barras

6.2.1 Colocar las muestras en la gradilla del equipo con el cdigo de

barras hacia afuera, poner la gradilla en la bandeja de entrada y presionar la tecla Iniciar en el instrumento (rombo naranjo).

6.2.2 Recordar que antes de procesar cualquier muestra el estado del

instrumento debe ser LISTO PARA PROCESAR. 6.2.3 Si el instrumento est conectado al LIS todos los resultados se irn

a la carpeta COMPLETOS (analizados y transmitidos al LIS).

6.3 Paso de muestras de forma manual 6.3.1 Equipo en listo para procesar, en men Operaciones de Rutina,

seleccionar la opcin ID Muestra Manual. 6.3.2 Escanear con el lector de cdigo de barra el cdigo de la muestra,

esperar a que en el instrumento aparezca el cdigo ledo al lado de muestra siguiente (arriba y a la izquierda de la pantalla) y luego procesar la muestra en cualquiera de los dos mtodos manuales.

6.3.3 Si no se quiere leer el cdigo debe ingresar una identificacin en la

celda de la pantalla de ID muestra manual que aparece en blanco, luego seleccionar la peticin y finalmente aceptar, esperar que aparezca en la parte superior la identificacin al lado de muestra siguiente (arriba y a la izquierda de la pantalla), ahora ya se puede procesar la muestra en cualquiera de los dos mtodos manuales.

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6.4 Modificacin de Muestras

6.4.1 EDITAR. Si se desea editar un dato del listado antes de procesar

las muestras sin cdigo de barras, ir a peticiones, seleccionar en parmetros NR&Paut, luego ir a ID y buscar el paciente y hacer la modificacin, una vez terminado esto, revisar de nuevo en pendientes, GEST DE ARCHIVO las posiciones de las muestras.

6.4.2 BORRAR. Si se desea borrar un paciente del listado de peticiones

o si quedo ingresado un paciente y no se proces por alguna razn y se desea borrar para que no quede pendiente, hacer el mismo proceso de editar solo que cuando se encuentre al paciente hacer clic en BORRAR (botn al lado derecho) y OK.

6.5 Generacin de frotis sanguneo

6.51 Recepcin de muestra, esta ser ingresada al sistema informtico del laboratorio y se le asignara un numero interno.

6.52 Homogenizar la muestra de sangre invirtiendo de 10-15 veces. 6.53 Rotular portaobjeto con nombre o ID del paciente. 6.54 Tomar el portaobjeto rotulado, este debe tenerse firme entre los

dedos o apoyndolo en una superficie lisa y fija. 6.55 Colocar una gota de sangre con pipeta pasteur plstica o capilar en

la superficie del portaobjeto, a 15 mm del extremo de este. 6.56 Colocar el borde del cubreobjeto sobre el portaobjetos, por delante

de la gota de sangre, formando un ngulo de 45 grados, hasta establecer contacto con ella. La sangre se extiende por capilaridad por detrs del cubreobjeto, en la zona de contacto.

6.57 Una vez extendida la gota, deslizar el cubreobjetos a una velocidad

uniforme, sin sacudidas y cuidando que en ningn momento se pierda contacto con el portaobjetos.

6.58 Secar a temperatura ambiente.

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6.6 Tincin de frotis sanguneo May Grnwald-Giemsa

6.6.1 Colocar el frotis sanguneo en la rejilla de soporte.

6.6.2 Cubrir todo el frotis con solucin May Grnwald.

6.6.3 Dejar actuar por 5 minutos.

6.6.4 Agregar al frotis sanguneo agua destilada desde la cabeza a la cola.

6.6.5 Dejar actuar por 1 minuto.

6.6.6 Preparar el Giemsa, (por cada 10 ml de agua destilada agregar 20 gotas de giemsa).

6.6.7 Agregar al frotis sanguneo solucin giemsa desde la cabeza a la cola.

6.6.8 Dejar actuar por 15 minutos.

6.6.9 Secar de forma inclinada a temperatura ambiente.

6.6.10 Limpiar la pared posterior del frotis sanguneo con algodn hmedo.

6.6.11 Dejar el frotis sanguneo a temperatura ambiente para su secado.

6.7 Tincin panptica rpida

6.7.1 Preparar el material necesario.

6.7.2 Una vez seco el frotis sumergirlo en la solucin A, 5 veces por 1 segundo cada vez.

6.7.3 Limpiar la parte posterior con papel absorbente y dejar escurrir el

exceso de solucin.

6.7.4 Sumergir en la solucin B, 8 veces durante 1 segundo cada vez.

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6.7.5 Limpiar la parte posterior con papel absorbente y dejar escurrir el exceso de solucin.

6.7.6 Sumergir en la solucin C, 5 veces durante 1 segundo cada vez.

6.7.7 Lavar bajo un chorro de agua suave para eliminar el exceso de

colorante. 6.7.8 Limpiar con un algodn hmedo la parte posterior del portaobjetos.

6.7.9 Dejar secar a temperatura ambiente o en estufa a 37 C

6.8 Lectura del frotis sanguneo

6.8.1 Colocar el frotis sanguneo ya teido en el microscopio ptico para

su observacin. 6.8.2 Visualizar el frotis sanguneo comenzando con el objetivo de menor

aumento (4x) hasta enfocar el campo. 6.8.3 Continuar enfocando con los objetivos de mayor aumento pasando

por 10x y 40x. 6.8.4 Agregar 1 gota de aceite de inmersin al frotis para continuar con el

objetivo de mayor aumento 100x. 6.8.5 Realizar formula diferencial contando mnimo 100 clulas de la seria

blanca en la cola del frotis, clasificndolas a cada una en su poblacin correspondiente.

6.8.6 Observar de la serie roja morfologa, tamao, color e inclusiones. 6.8.7 Observar de la serie blanca morfologa e inclusiones del citoplasma

y ncleo. 6.8.8 Observar de las plaquetas morfologa, tamao y nmero. 6.8.9 Validar informe.

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7. Control de calidad

7.1 Periodicidad. Los controles de calidad se procesaran una vez al da, todos los das.

7.2 Excepciones. No se procesaran controles de calidad en caso de

que no se cuente con ellos, en caso de que hayan superado su fecha de caducidad, o en caso de algn problema en el equipo en el que se encuentre imposibilitado de funcionar. Debiendo dejar constancia en el archivador de controles de calidad de hematologa, segn anexo 1.

7.3 Accin a tomar. En caso de no poseer controles de calidad, se

procesara una o ms muestra del da anterior junto con la visualizacin de frotis sanguneo para validar el funcionamiento correcto del equipo dejando registro en el archivador de controles de hematologa, segn Anexo 2.

8. Paso de controles por equipo ADVIA 120

8.1 Los controles deben permanecer mnimo 30 minutos a temperatura

ambiente sin moverse, No mezclar los controles. 8.2 El equipo debe encontrarse en Listo para procesar. 8.3 En una gradilla colocar una muestra de sangre sin cdigo de barras

como cebador y luego colocar los controles segn su programacin de paso de controles, con los cdigos de barra hacia adelante.

8.4 Colocar la gradilla en la bandeja de entrada del automuestrador y presionar la tecla de iniciar/parar del instrumento.

8.5 Una vez que los controles se procesaron, en panel de control de

muestras hacer clic en INCOMPLETO y luego un clic en Rev/Edit 8.6 La primera muestra es un cebador, dar clic en Ok cuando aparezca

el cdigo 99900 y luego ver los controles.

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8.7 Validar cada control haciendo click en ok, si este aparece en gris

terminar de revisar todos los valores del control con la flecha hacia abajo para que este icono se active y pueda darle clic.

8.8 Ahora ir a la carpeta de CC para que evale sus resultados, si se

quiere repetir el control basta con hacer clic en la fecha del control que se va a eliminar y luego con doble clic derecho, omitirlo y aceptar. A continuacin se puede repetir el control.

9. Calibraciones

No procede

10. Tiempo de respuesta de exmenes Ambulatorios y hospitalizados: 6 horas desde la toma de muestra o desde su ingreso al sistema. Urgencias: 90 minutos desde su ingreso al sistema.

11. Limitaciones Aquellas muestras sin identificacin o mal rotuladas, con relacin sangre-anticoagulante inadecuada o muestra con microcogulos, cogulos o restos de fibrina, no sern procesadas.

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VELOCIDAD DE ERITROSEDIMENTACION

1. Fundamento del test Analizar una muestra de sangre para estimar la Velocidad de Sedimentacin Eritrocitaria (VHS) es decir, la decantacin de los glbulos rojos a travs del equipo Bioline Therma.

2. Alcance

Seccin de Hematologa del laboratorio clnico.

3. Tipo de muestra Un tubo de muestra sangunea con Citrato Sdico 3,8% en relacin 1:4.


Transportar el tubo tapado, en posicin vertical, en un recipiente o gradilla dentro de un contenedor slido a prueba de derrames tipo cooler con unidad refrigerante. No poner en contacto Solicitud de examen con la muestra. Este se debe entregar al laboratorio hasta una hora desde la toma de muestra.

5. Responsable


6. Procedimiento

6.1 Procesamiento de muestras

6.1.1 Las muestras tomadas en el laboratorio para VHS se toman con sistema vacutainer. En la atencin cerrada trabajan sin vacutainer por lo que del tubo lila para hemograma se sacan aprox. 1,24 mL de sangre y se agregan al tubo de VHS con citrato de sodio al 3,8 % (tubo tapa negra) y se homogenizan.

6.1.2 Los tubos deben estar llenados hasta la marca que se indica

aceptndose un error de 1 cm.

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6.1.3 En el men principal del equipo se debe presionar dos veces el

icono de cdigo de barras. 6.1.4 Pistolear el cdigo de barra. 6.1.5 Presiono una vez la flecha de retroceso. 6.1.6 En la lista de trabajo asegurarse que estn ingresadas las

muestras. 6.1.7 Colocar las muestras en las posiciones correspondientes. 6.1.8 El equipo censa los tubos ingresados mostrando en la pantalla

principal el crculo pintado entero (indicando posicin), luego de 20 minutos saldrn los resultados, cambiando el crculo pintado a presentar una letra F en su interior.

7 . Control de calidad

7.1 Periodicidad. Se procesan controles de calidad nivel 1 y 2 o solo un nivel dependiendo del proveedor una vez al da todos los das.

7.2 Excepciones. No se procesaran controles de calidad los fines de

semana que no hayan muestras para analizar, en caso de que no se cuente con ellos, no exista disponibilidad de material o en caso de que hayan superado su fecha de caducidad, dejando registro en el archivador de control de calidad de hematologa.

8 . Procesamiento de controles

8.1 Los controles para VHS se procesan de igual que una muestra. 8.2 Se deben mezclar bien, asegurndose que no queden sedimentos en

el fondo del tubo. 8.3 En el men principal del equipo se debe presionar dos veces el icono

de cdigo de barras. 8.4 En la parte superior se mostrara el nmero de posicin de los

controles.

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8.5 Presionar QC1 y luego QC2. 8.6 Presiono una vez la flecha de retroceso. 8.7 En la lista de trabajo asegurarse que estn ingresados los controles. 8.8 Ingresar los controles en la posicin indicada. 8.9 El equipo censa los tubos ingresados mostrando en la pantalla

principal el crculo pintado entero (indicando posicin), luego de 20 minutos saldrn los resultados, cambiando el crculo pintado a presentar una letra F en su interior.

8.10 Se deja su registro en Archivador control de calidad de

Coagulacin, VHS, Gases y Hemoglobina Glicada.

9. Calibraciones No procede.

10. Tiempo de respuesta de exmenes

Ambulatorio y hospitalizado: 6 hrs. desde la toma de muestra o de su ingreso al sistema. Urgencias: no procede.

11. Limitaciones Aquellas muestras sin identificacin o mal rotuladas, no sern procesadas. No se procesan muestras con evidencia de cogulos, micro cogulos o restos de fibrina.

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RECUENTO DE RETICULOCITOS 1. Fundamento del test

Analizar una muestra de sangre para estimar un recuento de reticulocitos que corresponden a glbulos rojos con RNA que no han alcanzado la madurez, por medio de una extensin sangunea con azul cresil brillante al 1%.

2. Alcance

Seccin de Hematologa del laboratorio clnico. 3. Tipo de muestra

Un tubo de muestra sangunea EDTA, tubo tapa lila.

4. Transporte de muestra Transportar el tubo tapado, en posicin vertical, en un recipiente o gradilla dentro de un contenedor slido a prueba de derrames tipo cooler con unidad refrigerante. No poner en contacto Solicitud de examen con la muestra. Este se debe entregar al laboratorio hasta una hora desde la toma de muestra.

5. Responsable


6. Procedimiento preparacin del frotis.

6.1 Utilizar el mismo tubo que para hemograma. 6.2 En un tubo kahn agregar igual cantidad de sangre y azul cresil brillante al

1%, Ej: 5 gotas de sangre + 5 gotas de azul cresil brillante y tapar con parafilm.

6.3 Dejar 20 minutos en la estufa de cultivo. 6.4 Realizar un frotis de dicha mezcla. 6.5 Observar el frotis en el microscopio con un aumento de 100X.

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6.6 Buscar un campo en el que idealmente podamos tener un recuento de

1000 glbulos rojos. 6.7 Establecidos en el sector a contar, se deben observar 10 campos y

contar los reticulocitos observados. 6.8 Estimar el porcentaje de ellos por la siguiente ecuacin: Ejemplo: 10

Reticulocitos contados en 10 campos.

1000 100%

10 X X = 0,1 % de Reticulocitos


Consiste en la realizacin de una extensin de frotis de una muestra con un recuento de reticulocitos conocidos, validada en el mismo laboratorio, la cual se procesara una vez al mes.

8. Procedimiento de control de calidad

Se realiza de la misma manera que el punto 6.

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9. Procedimiento calibraciones

No procede 10. Tiempo de respuesta de exmenes

Ambulatorio y hospitalizado: 6 hrs. desde la toma de muestra o de su ingreso al sistema. Urgencias: no procede.

11. Limitaciones

Aquellas muestras sin identificacin o mal rotuladas, no sern procesadas.

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TIEMPO DE PROTROMBINA Y TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA

1. Fundamento del test

Analizar una muestra de sangre para estimar el tiempo de protrombina (TP) y tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPa) a travs del equipo Sysmex CA-500.

El TP evala la va extrnseca y comn de la cascada de la coagulacin, se define como el tiempo que coagulacin obtenido al agregar al plasma un exceso de tromboplastina histica o tisular y calcio (0,025 M). Esta prueba es til para el monitoreo del tratamiento anticoagulante oral (TACO), el diagnostico de deficiencias factoriales congnitas o adquiridas y el control de las actividad heptica.

El TTPa evala la va intrnseca y comn de la cascada de la coagulacin, se define como el tiempo de coagulacin al adicionar al plasma tromboplastina histica, un activador y calcio. Esta prueba es til para el control del tratamiento con heparina.

2. Alcance

Seccin de Hematologa del laboratorio clnico. 3. Tipo de Muestra

Un tubo de muestra sangunea con Citrato Sdico 0,106 M en relacin 1:9.

4. Transporte de Muestra


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5. Responsable


6. Procedimiento

6.1 Mantencin diaria

6.1.1 Rellenar con cubetas el equipo cuidando de tomarlas solo del borde.

6.1.2 Cambiar el agua al de reaccin del equipo todos los das martes y

viernes. Alminar y rellenar con agua destilada del equipo Millipore. 6.1.3 Eliminar los desechos. 6.1.4 Sacar reactivos del refrigerador y posicionarlos en el equipo. 6.1.5 Verificar el volumen de reactivos en el sistema, para ello se debe

ingresar a Men Especial Colocar Reactivo, donde aparecern los reactivos que se estn utilizando.

6.1.6 Introducir el volumen del reactivo Enter salir y as

sucesivamente con el resto de los reactivos. 6.1.7 Una vez ingresados los volmenes correspondientes se debe

presionar men principal y el equipo preguntara Renovar ajustes? Y se debe presionar Guardar.

6.1.8 Realizar lavado de sondas, para esto ingresar a Men Especial

Lavado de Sondas Fijar. 6.1.9 Al terminar el lavado de sondas el equipo estar listo para el

procesamiento de muestras y controles. 6.1.10 Al final del da laboral los reactivos se deben guardar en el

refrigerador.

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6.2 Procesamiento de muestras

6.2.1 Las muestras una vez tomadas y etiquetadas con su respectivo cdigo

de barra se dejan en la centrifuga (Eppendorf/Centrifuge 5702), cuidando siempre de contrapesarlos.

6.2.2 Se cierra la tapa y se centrifuga a 3000 rpm por 10 minutos. 6.2.3 Luego de los 10 minutos se abre automticamente la tapa de la

centrifuga. 6.2.4 Se dejan las muestras en una gradilla al lado del equipo de

coagulacin Sysmex CA-500 para su procesamiento. 6.2.5 Para procesar las muestras se posicionan en el rack con el cdigo de

barras hacia afuera, se pueden ingresar los analitos a medir de manera manual, seleccionando el analito deseado en la pantalla donde aparecer un circulo bajo el nmero 2 y/o 3 ya se TP y/o TTPK o se deja que el lector lea el cdigo de barras y determine los analitos que debe procesar.

6.2.6 Presionar en la pantalla Empezar (borde superior derecho). 6.2.7 Una vez censadas las posiciones el equipo preguntara Primera

cubeta o Continuar, cuando es el primer anlisis del da se debe seleccionar Primera cubeta, de lo contrario se debe seleccionar Continuar.

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6.3 Reconstitucin de Reactivos

El reactivo para TP Tromborel S se encuentra liofilizado del fabricante

6.3.1 Disolver el reactivo Tromborel S con 4.0 ml de agua destilada. 6.3.2 Dejar incubando el reactivo por 30 minutos. 6.3.3 Mezclar el reactivo cuidadosamente en su posicin, sin invertir ni

agitar antes de usarlo

El reactivo para TTPa Actin Fs viene en un formato listo para utilizarse, al igual que el Calcio.


7.1 Periodicidad. Los controles de calidad se procesan una vez al da todos los das.

7.2 Excepciones. Los controles de calidad no se procesaran en caso de que

no se cuente con ellos, no existan muestras que analizar durante el da y en caso de que hayan superado su fecha de caducidad, dejando registro en el archivador de control de calidad de coagulacin, VHS, gases y hemoglobina Glicada, segn Anexo 1.

7.3 Accin a tomar. En caso de no contar con controles para procesar, se

proceder a analizar una o dos muestras del da anterior, para validar la funcionalidad del equipo, dejando registro en el archivador segn anexo 2.

7.4 Procesamiento de Controles

7.4.1 Reconstituir el control normal y patolgico con 1.0 ml de agua destilada con una pipeta volumtrica.

7.4.2 Disolver mezclndolo cuidadosamente, sin formar espuma. 7.4.3 Dejar reposar entre 15 y 25C por 30 minutos

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7.4.4 Antes de usarlo, mezclar con cuidado. 7.4.5 Alicuotar cada control en 4 copas Dimensin con 250 uL cada una y

guardar en el freezer. 7.4.6 Para el procesamiento de los controles se debe sacar del freezer

los controles nivel 1 y 2 previamente alicuotados y esperar que se descongelen a T ambiente.

7.4.7 Para ingresar los controles se deben posicionar en el rack de

muestras, en la posicin N1 control normal (1) y en la N2 control patolgico (2).

7.4.8 Introducir NID QC N del control (por ejemplo: 01) para el

control normal presionando las pruebas que deseo controlar Enter, lo mismo para el control patolgico (QC 02)

7.4.9 Presionar Empezar. 7.4.10 Al dar el Empezar, el equipo puede preguntar Cambiar rack de

muestra, Correcto? Empezar. 7.4.11 Tambin preguntara Primera cubeta o Continuar, cuando es el

primer anlisis del da se debe seleccionar Primera cubeta, de lo contrario se debe seleccionar Continuar

7.4.12 Se deja su registro en Archivador control de calidad de

Coagulacin, VHS, Gases y Hemoglobina Glicada.

7.5 Ingreso nuevo lote de control de calidad

7.5.1 En men principal 7.5.2 Control de calidad (segunda opcin barra de abajo) 7.5.3 Elegir prueba 7.5.4 TP o TTPA 7.5.5 Elegir nmero de QC que se quiere utilizar

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7.5.6 Ajustes

7.5.7 Ingresar los valores de intervalo de referencia, nmero de lote y

fecha de caducidad 7.5.8 Repetir con TT y TTPA del otro nivel.

8. Calibraciones En el caso de cambio de lote o cada tres meses en que se mantenga el mismo lote de Tromborel S es necesario realizar la curva de calibracin del tiempo de protrombina para el clculo correcto del porcentaje de actividad e INR.

8.1 Men principal 8.2 Entrar lote 8.3 Reactivo 1. Ingresar nmero de lote y fecha de caducidad del nuevo lote. 8.4 Regresar. Guardar 8.5 Anlisis standardingreso de porcentajes presentes en el inserto del

reactivo. 8.6 Empezar 8.7 Entrada manual cambiar el normal y el ISI segn corresponda. 8.8 Salir aceptar curva? Fijar

9. Entrega de Examen Ambulatorio y hospitalizado: 6 hrs. desde la toma de muestra o desde su ingreso al sistema. Urgencias: 90 minutos desde su ingreso al sistema.

10. Limitaciones

Aquellas muestras sin identificacin o mal rotuladas, con exceso e muestra o bajo el nivel de llenado, hemolizadas o coaguladas no sern procesadas.

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TIEMPO DE SANGRIA


Analizar in vivo la presencia de una posible alteracin en la hemostasia primaria por medio del mtodo de Ivy. El mtodo de Ivy consta con aplicar una presin de 40 mmHg sobre el antebrazo del paciente, utilizando un esfigmomanmetro, la cual se mantiene constante durante todo el ensayo. Inmediatamente se le realiza un corte tomando el tiempo en que demore en finalizar el sangrado.

2. Alcance


No aplica 4. Transporte de muestra

No aplica 5. Responsable

Tecnlogo mdico de la seccin Hematologa del laboratorio clnico. 6. Procedimiento de realizacin del examen

6.1 Se sienta al paciente con el brazo en posicin supina, sobre un soporte firme. Se escoge un rea en la parte muscular en el antebrazo, distal a la fosa antecubital, evitando venas superficiales, cicatrices, y contusiones. Limpiar con algodn y alcohol y dejar secar al aire, por lo menos 30 segundos.

6.2 Colocar el manguito del esfingomanmetro en la parte superior del brazo. 6.3 Sacar el dispositivo (Surgicutt) del plstico y rompa el botn caf de

seguridad en el lado opuesto al gatillo, girndolo. No tocar el gatillo, ni la ranura de la cuchilla.

6.4 Inflar el esfigmomanmetro hasta 40 mmHg de presin. 6.5 Colocar el dispositivo firmemente sobre el antebrazo sin hacer opresin

excesiva.

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6.6 Oprimir el gatillo y simultneamente poner en marcha el cronmetro. 6.7 Despus de 30 segundos al absorber la sangre con papel de filtro, sin tocar

el borde de la incisin (para no alterar el tapn plaquetario). Continuar absorbiendo la sangre cada 30 segundos hasta que esta ya no manche el papel de filtro, seguidamente detener el cronmetro.

6.8 Quitar el manguito, limpiar el brazo y aplicar un apsito en la incisin.

Aconsejar al paciente que mantenga el apsito durante 24 horas. 6.9 Se anota el tiempo que tarda en cesar la hemorragia, esto es lo que

corresponde al tiempo de sangra.

7. Control de calidad No procede

8. Procedimiento control de calidad

No procede 9. Procedimiento calibraciones

No procede 10. Tiempo de respuesta de exmenes

Ambulatorios: 6 hrs. desde su ingreso al sistema. Urgencias. No aplica

11. Limitaciones

No estar tomando aspirina (cido acetilsaliclico) o antinflamatorios no esteroidales (AINES) en los ltimos 7 das.

*cerciorarse que el esfingomanmetro se encuentre en las condiciones adecuadas.

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RPR (reagina plasmtica rpida)


Analizar una muestra de sangre (suero) para la pesquisa de anticuerpos producidos por la presencia de la bacteria Treponema pallidum productora de sfilis, por el mtodo de aglutinacin en ltex.

2. Alcance


Un tubo de muestra sangunea sin anticoagulante, tubo tapa roja o tapa amarilla.



5. Responsable


6. Procedimiento realizacin del examen 6.1 Llevar a Temperatura ambiente los reactivos y las muestras antes de

realizar el ensayo. 6.2 Anotar en la parte superior del circulo de reaccin de la tarjeta el

nmero interno o identificacin del paciente 6.3 En cada uno de los crculos de la tarjeta de reaccin colocar con un

gotero plstico suministrado por el proveedor una gota o 50L de muestra.

6.4 Con el extremo cerrado del gotario (extremo opuesto de la pipeta)

distribuir la muestra uniformemente en todo el crculo.

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6.5 Con el gotero metlico provisto en posicin vertical, agregar en el centro

del crculo 1 gota o 17 L de reactivo RPR (partculas de carbn) previamente bien agitado.

6.6 Hacer rotar horizontalmente la tarjeta de reaccin en forma manual o

con agitador rotativo a 100 rpm durante 8 minutos. 6.7 Observar la presencia o ausencia de aglutinacin al cabo de este

tiempo, ya que tiempos de mayores lecturas darn lugar a falsos resultados.

6.8 Un aspecto gris homogneo indica la ausencia de reaginas en la

muestra y se informa como No reactivo. 6.9 La presencia de aglutinacin visible en forma de grumos negros sobre

el fondo claro indica la presencia de reaginas en la muestra se informa como Reactivo.

*Las muestras para RPR se trabajan solo los das viernes, se deben

guardar en el refrigerador durante la semana para su procesamiento.


El control de calidad se realiza cada vez que se realiza una corrida de muestras, dejando su registro en el archivador de control de calidad de test rpidos.


El control de calidad se realiza de la misma manera que el procesamiento de una muestra, con los controles suministrados por el proveedor (punto 6).

9. Calibraciones

No aplica

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Ambulatorio y hospitalizado: Como las muestras se procesan solo los das viernes los resultados se encuentran disponibles a partir de ese da despus de las 15:00 horas.

11. Limitaciones


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MINI vidas: DIMERO D, VIH, HBs y HCV


Analizar una muestra de sangre (plasma, citrato de sodio) para la pesquisa de Dimero-D, (plasma, EDTA) anticuerpo sericos anti-VIH1, anti-VIH2 y antigeno p24 para VIH, antgeno HBs para Hepatitis B y anticuerpos IgG anti HCV por medio del mtodo ELFA. ELFA es el principio de combinacin ELISA y una deteccin final por fluorescencia. La tcnica utiliza un cono de un solo uso sirve a la vez de fase slida con un anticuerpo monoclonal adsorbido en su superficie, y de sistema de pipeteo. El resto de los reactivos de la reaccin inmunolgica estn listos al empleo y previamente repartidos en el cartucho.

2. Alcance Seccin de Hematologa del laboratorio clnico.

3. Tipo de muestra

Dimero-D: Un tubo de muestra sangunea con citrato, tubo tapa celeste. VIH: Un tubo de muestra sangunea con EDTA, tubo tapa lila. HBs: Un tubo de muestra sangunea con EDTA, tubo tapa lila. HCV: Un tubo de muestra sangunea con EDTA, tubo tapa lila.



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5. Responsable Tecnlogo mdico de la seccin Hematologa del laboratorio clnico.

6. Procesamiento de muestras

6.1 Seleccionar Pantalla de Estado 6.2 Seleccionar la seccin a utilizar, A o B. 6.3 Seleccionar el nmero de la posicin a utilizar del 1 al 6. 6.4 ID Muestra pistoliar el cdigo de barras, de lo contrario se puede

utilizar nmeros o tablero de abecedario ENTER, automticamente pasara a la siguiente posicin.

6.5 Ya ingresada (s) la (s) muestra (s) se debe presionar el botn de

retroceso para visualizar la pantalla lista de trabajo. 6.6 Colocar tiras y conos en sus posiciones dejando que alcance

temperatura ambiente por aproximadamente 20 minutos. 6.7 Cargar las muestras en el mismo orden de ingreso agregando 200 uL de

plasma en la tira de reaccin (primer pocillo, nico sin sello). 6.8 Presionar comenzar.


El control de calidad se realiza una vez al mes mediante el procesamiento del QCV en cada una de las posiciones del sistema mini VIDAS enviando un reporte a el proveedor quien genera un informe y una aprobacin que indica que el equipo se encuentra en buenas condiciones para trabajar. Si una posicin en particular no da resultados satisfactorios para el TV1, debern efectuarse dos nuevas determinaciones VIDAS QCV sucesivamente en la posicin implicada. No ser necesario proceder a una nueva determinacin VIDAS QCV en las posiciones que den un resultado conforme con las especificaciones.

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8. Procedimiento control de calidad El equipo quality control VIDAS (QCV) permite detectar un disfuncionamiento del sistema de pipeteo que puede interferir con el resultado obtenido en el anlisis. Permite tambin verificar la capacidad del sistema ptico para dar lecturas de fluorescencia elevadas.

8.1 Sacar los reactivos necesarios para el anlisis dejando que tomen

temperatura por aproximadamente 20 minutos en el equipo y dejar a 2-8 C los reactivos no utilizados.

8.2 Colocar en el sistema los conos y cartuchos, cerrar bien las puertas de

los bloques de conos y las tapas de las secciones. 8.3 Iniciar la determinacin. Todas las etapas son creadas por el sistema

automticamente, los resultados se obtienen en aproximadamente 20 minutos.

8.4 Al finalizar la determinacin, imprimir y analizar los resultados como se

indica a continuacin. Eliminar los conos y cartuchos utilizados en un recipiente adecuado.

8.5 Resultados e interpretacin

Se efecta una primera lectura (R1) al inicio del protocolo para verificar la integridad de reactivo y constituir uno de los datos de clculo. Se realizara una segunda lectura (R2) despus de una serie de pipeteos con velocidades variables correspondiente a la verificacin de las capacidades de transferencia de la bomba. Se realiza una tercera lectura (R3) despus de pipetear una pequea cantidad de substrato muy concentrado. Esta operacin permite verificar la capacidad del sistema ptico para dar medidas de fluorescencia elevadas. Una vez finalizada la prueba, se realiza automticamente por el programa el clculo de los valores de la prueba TV1 (relacin R2/R1) y TV2 (relacin R3/R1) a partir de de las tres lecturas de fluorescencia y se presenta en un informe de anlisis.

El valor de la prueba TV1 y el valor de la lectura R3 deben estar dentro de las normas de aceptabilidad siguientes: Norma de aceptabilidad de TV1: cada posicin debe ser >= al valor indicado en la etiqueta del envase.

Cuando una posicin particular da un resultado fuera de rango, deben

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efectuarse sucesivamente dos nuevas pruebas VIDAS QCV, si dan los tres resultados TV1 fuera de rango, desconectar la seccin y llamar al servicio tcnico.

9. Calibraciones

La re calibracin de tcnicas se realiza en caso de cambio de lote.

9.1 Calibracin con lote Patrn (tarjeta MLE)

9.1.1 Cada vez que se tiene un nuevo lote de un kit, la curva patrn debe ser ingresada al equipo.

9.1.2 En caso de ingreso manual colocar la tarjeta MLE de cdigos de barra

en su soporte con la punta de la flecha indicando hacia el equipo. 9.1.3 Deslcela en la bandeja de entrada de cartuchos de la seccin que se

encuentre disponible. 9.1.4 Seleccionar Men de calibracin 9.1.5 Seleccionar Lectura de lote 9.1.6 Seleccionar la seccin en la que se encuentra la curva master Lot. 9.1.7 El equipo comenzara la lectura de los cdigos de barra. Una vez

finalizado el proceso, retorna automticamente al men principal. 9.1.8 Una vez ingresado el cdigo de la curva patrn es necesario validar la

curva realizando el protocolo Re calibracin de Curva. 9.1.9 En caso del ingreso con cdigo de barras, en pantalla de estado

pistolear lentamente el cdigo de barras hasta que emita un pitido, luego de unos minutos se encuentra listo para la re calibracin de curva segn protocolo.

9.2 Recalibracin de Curvas

9.2.1 La re calibracin de las curvas se realiza cada vez que hay cambio de

lote de una tcnica. 9.2.2 Seleccionar Pantalla de Estado

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9.2.3 Seleccionar la seccin a utilizar, A o B. 9.2.4 Ingresar identificacin de posiciones, para esto una vez ingresado a la

seccin a utilizar se debe presionar el nmero de posicin de la muestra, 1 a 6 S (Estndar) o C (Control)

9.2.5 El estndar siempre va en duplicado o triplicado dependiendo de la

tcnica (revisar inserto de tcnica) Ingresar el nmero de estndar Ej: S1 o S2 ENTER, automticamente pasara a la siguiente posicin.


DIMERO D: 6 hora desde que se ingresa la muestra al sistema. Urgencias: 90 minutos VIH: 6 horas desde que se ingresa la muestra al sistema. Urgencias: no aplica HsB: 6 horas desde que se ingresa la muestra al sistema. Urgencias: no aplica HCV: 6 horas desde que se ingresa la muestra al sistema. Urgencias: no aplica

11. Limitaciones


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CLASIFICACION GRUPO SANGUINEO


Analizar una muestra de sangre para la clasificacin de grupo sanguneo ABO y RH por medio de clasificacin en lamina o en tubo.

2. Alcance


Un tubo de muestra sangunea con EDTA, tubo tapa lila. 4. Transporte de muestra


5. Responsable


6. Procedimiento

6.1 Clasificacin en Lmina

6.1.1 En la placa de vidrio adicionar en forma vertical una gota de antisuero: anti A, anti B, anti AB y anti D.

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6.1.2 Luego agregar una gota de sangre del tubo con EDTA previamente homogenizado.

6.1.3 Mezclar la sangre con el antisuero. 6.1.4 Dar suaves giros a la placa de vidrio para observar alguna

aglutinacin. 6.1.5 Si presenta aglutinacin es que presenta el antgeno para el

sistema ABO y Rh.

6.2 Clasificacin en Tubo

6.2.1 Rotular 4 tubos Kahn: Anti-A, Anti-B, Anti-AB, Anti-D para la prueba directa y 2 tubos kahn GR A1 y GR B para la prueba inversa.

6.2.2 Realizar una suspensin celular con los glbulos rojos (muestra

sangre total) al 2-4% con PBS. 6.2.3 Para la prueba directa aadir a cada tubo kahn 1 gota de

suspensin 2-4% de glbulos rojos ms 2 gotas del antisuero Anti-A, Anti-B, Anti-AB, y Anti-D respectivamente.

6.2.4 Para la prueba inversa aadir a cada tubo kahn 1 gota de los

glbulos rojos testigos GR A1 y GR B ms 2 gotas del suero del paciente.

6.2.5 Centrifugar los 6 tubos 1 minuto a 1000 r.p.m. 6.2.6 Leer aglutinacin. 6.2.7 En el caso de obtener un Rh Negativo se debe proceder a la prueba

del DU, punto 6.2.

6.3 Prueba del DU

6.3.1 La prueba del DU se realiza en tubo y procede igual que un test de Coombs indirecto, obteniendo lecturas a Temperatura ambiente, 37 C y con Antiglobulina Humana.

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6.3.2 Tomar una suspensin de clulas (glbulos rojos) y lavar una vez con PBS.

6.3.3 El lavado de clulas consiste en agregar 2 gotas de la muestra

(sangre total) al tubo kahn y PBS hasta llenar las partes del tubo. 6.3.4 Centrifugar 3 minutos a 3000 r.p.m. 6.3.5 Eliminar el sobrenadante completo de forma enrgica vaciando todo

el PBS y secando golpeando el tubo sobre un papel absorbente hasta eliminar todo el PBS.

6.3.6 Con los glbulos rojos lavados se procede a la prueba del DU. 6.3.7 Realizar una suspensin celular con los glbulos rojos lavados al 2-

4% con PBS. 6.3.8 Aadir al tubo kahn 1 gota de suspensin 2-4% de glbulos rojos

ms 2 gotas del antisuero Anti-D. 6.3.9 Centrifugar 1 minuto a 1000 r.p.m. 6.3.10 Leer aglutinacin. 6.3.11 Incubar a 37C por 30 minutos. 6.3.12 Centrifugar 1 minuto a 1000 r.p.m. 6.3.13 Leer aglutinacin. 6.3.14 Agregar 2 gotas de Antiglobulina Humana (suero color verde). 6.3.15 Centrifugar 1 minuto a 1000 r.p.m. 6.3.16 Leer aglutinacin. 6.3.17 Si el resultado de la prueba del DU es Negativa, sin aglutinacin

visible en el tubo confirmara el Rh Negativo, de lo contrario si la prueba del DU es Positiva revierte el resultado siendo Rh Positivo.

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No procede 8. Procedimiento control de calidad

No procede 9. calibraciones

No aplica 10. Tiempo de respuesta de exmenes

6 horas desde que se ingresa la muestra al sistema. Urgencias: no aplica

11. Limitaciones


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HEMOGLOBINA GLICADA


Analizar una muestra de sangre para la pesquisa de la fraccin A1C de la hemoglobina mediante el mtodo HPLC (cromatografa liquida de alta resolucin) por el equipo TOSOH G7

2. Alcance Seccin de Hematologa del laboratorio clnico.

3. Tipo de muestra Un tubo de muestra sangunea con EDTA, tubo tapa lila.

4. Transporte de muestra Transportar el tubo tapado, en posicin vertical, en un recipiente o gradilla dentro de un contenedor slido a prueba de derrames tipo cooler con unidad refrigerante. No poner en contacto Solicitud de examen con la muestra. Este se debe entregar al laboratorio hasta una hora desde la toma de muestra.

5. Responsable Tecnlogo mdico de la seccin Hematologa del laboratorio clnico..

6. Procedimiento 6.1 Revisar volumen de reactivos: Buffer 1, 2 y 3 ms el hemolizante. 6.2 Chequear que hay papel en la impresora (sin papel el equipo no funcionar) 6.3 Revisar contenedor de los desechos. 6.4 Abrir tapas delanteras y revisar que no existe algn derrame o fuga.

Nota: El equipo nunca debe estar apagado (botn lado izquierdo inferior), una vez todo revisado se procede a encender el equipo.

6.5 Presionar botn POWER (esperar 15 minutos) 6.6 Cargar las muestras en las gradillas que son especiales para el equipo con

el cdigo de borrar hacia adentro, para que sea ledo por el lector. 6.7 Una vez cargadas las muestras proceda a presionar botn START.

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6.8 Tener la precaucin que despus del ltimo rack con muestras pasar un

rack sin muestras para que el equipo termine de trabajar.

*Las muestras para hemoglobina glicada se trabajan solo los das martes y viernes, por lo que mientras esperan para ser procesadas se deben guardar refrigeradas.


7.1 Periodicidad. El control de calidad se realiza con cada procesamiento de

muestras los das martes y viernes. 7.2 Excepciones. No Se procesaran muestras en caso de que no se cuente

con los controles necesarios o cuando hayan superado su fecha de caducidad, dejando registro en el archivador correspondiente segn Anexo 1.

7.3 Acciones a tomar. Se procesara una muestra previamente validada por el laboratorio, dejando registro de ello en el archivador correspondiente segn Anexo 2.


8.1 Sacar controles de calidad del refrigerador y esperar a que se descongele y

tomen temperatura ambiente por lo menos por 15 minutos. 8.2 Reconstituir la muestra con solucin hemolisys and wash solution

agregando 1490 microlitros, Resuspender y procesar de la misma manera que la muestra (punto 6).

9. Procedimiento calibraciones

No aplica

10. Tiempo de respuesta de exmenes Das martes y viernes a partir de las 15:00. Urgencias: no aplica

11. Limitaciones Aquellas muestras sin identificacin o mal rotuladas, no sern procesadas. Muestras coaguladas o con presencia de microcogulos no sern procesadas.

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MODIFICACION

- Modificaciones realizadas al Documento por nueva revisin:

COD Elaboracin del documento

Modificacin del Documento

Descripcin Breve

CHSJM APL1.3.3

30/Mayo/2012 15/Noviembre/2013 Se modifica actividades del procedimiento.

APL 1.3.3 Manual de Técnicas de Laboratorio Sección Hematología

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