CARACTERIZACION DE NAFTOQUINONAS CON HPLC NORMAL
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INVESTIGADORES:
•SELMA RIBEIRO DE PAVIA
•LICINIO FONTOURA DE ALMEIDE
•JOSE LUIS MAZZEI
•MARIA AUXILIADORA COELHO KAPLAN
EXPOSITORES:
Asurza Parra Jorge Luis
Atauje Alexandra
Landeo Mesa Ruddy Lucia
Rivera Diaz Flor Jackeline
EL PERFIL QUIMICO DE P. SCANDENS (NATIVO) Y P. AURICULATA (CULTIVADA) SE OBTUVO MEDIANTE HPLC (CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA RESOLUCION) FASE NORMAL Y FASE REVERSA CON DETECTOR DE ARREGLO DE DIODOS.
OBJETIVO
ENCONTRAR SIMILARES PATRONES METABOLICOS EN TALLOS Y HOJAS DE DICHAS ESPECIES VEGETALES.
PLUMBAGO AURICULATA LAM
FAMILIA TAXONOMICA
• REINO : PLANTAE• DIVISION:MAGNOLIOPHYTA• CLASE : MAGNOLIOPSIDA• ORDEN :CARYOPHYLLALES• FAMILIA:PLUMBAGINACEAE• GENERO:PLUMBAGO• ESPECIE :PLUMBAGO AURICULATA • NOMBRE BINOMIAL:PLUMBAGO
AURICULATA LAM
PLUMBAGO AURICULATA LAM
El género Plumbago comprende 10 especiesde las partes más cálidas del mundo. Hay 5 especies en Sudáfrica.
Sinónimos : Plumbago capensis Thunb.Nombre común en castellano : Azulina. Celestina. Embeleso. Jazmín azul. Jazmín celeste. Jazmín del Cabo. Jazmín del cielo. Jazminero azul. Malacara. Plumbago. Distribución general : África Época de floración : Julio. Agosto. Septiembre. Octubre. Noviembre. Diciembre. Formas vitales :Fanerófito. Hábitat : Cultivada en los jardines.
Plumbago se utiliza tradicionalmente para tratar :las verrugas,huesos rotos ,Heridas.Se toma como un tabaco para dolores de cabeza y un emético para disipar malos sueños. Un palo de la planta se coloca en la paja de chozas para conjurar los relámpagos.
TIPOS DE COMPUESTOS CON ACTIVIDAD PLAGUICIDA
• Las antiecdisonas son aquellas que interfieren alguna de las fases del proceso de la muda en los insectos.
Por ejemplo:La azadiractina,producida por la
especie Azadirachta indica (árbol del Nim) de la familia Meliaceae y la plumbagina y la naftoquinona, sintetizadas por el arbusto Plumbago capensis de la familia Plumbaginaceae. Floración y fructificación, con un marcado incremento de los mismos durante los meses de agosto y septiembre.
PLUMBAGINA
Plumbago scandens L.
FAMILIA TAXONOMICA
•REINO : PLANTAE•DIVISION:MAGNOLIOPHYTA•CLASE : MAGNOLIOPSIDA•ORDEN :CARYOPHYLLALES•FAMILIA:PLUMBAGINACEAE•GENERO:PLUMBAGO•ESPECIE :PLUMBAGO SCANDENS L
CARACTERISTICAS
• Plumbago scandens es un subarbusto con flores blancas bastante extendidas en Brasil, encontrándose a lo largo de la costa.
• Es una especie nativa que se encuentra en una vegetación típica de "restinga", que se caracteriza por la alta intensidad luminosa, el suelo arenoso y la restricción de agua.
Usos:•son atribuidos a preparados obtenidos a partir de raíces, tales como anestésico local y depurativas.• También se usa como infusión o decocción para reducir la inflamación de las articulacionesEntre los compuestos aislados, la plumbagina naftoquinona.
PLUMBAGINA NAFTOQUINONA
Merece atención por la descripción de numerosas actividades farmacológicas:
• antimicrobiano• anti tumoral • tripanocidas • antipalúdico entre otros.Este naftoquinona se encuentra principalmente en
las raíces de varias especies del género Plumbago
¿PORQUE SE CONCENTRAN LOS METABOLITOS SECUNDARIOS MAS EN LAS RAICES Y EN LAS
HOJAS?• Los compuestos orgánicos constituyen el alimento de la célula y los
componentes estructurales de la pared y el protoplasma, además de otros compuestos especiales, tales como las hormonas, pigmentos y enzimas.
• Dependiendo de la etapa fisiológica de plantas, estos compuestos muestran cambios en su contenido. , las raíces siempre están expuestas a microorganismos del suelo distintos, que pueden explicar la acumulación de compuestos de defensa tales como la plumbagina naftoquinona.
• Puede funcionar en la defensa química de la planta contra patógenos. Durante el desarrollo floral, la planta puede ser más susceptible al ataque de microorganismos, una vez que su metabolismo puede estar involucrado en la transición del ápice caulinar vegetativo en un ápice reproductiva
• En la planta, dependiendo de la etapa, pueden variar, y este hecho influye en la producción de sustancias químicas. El aumento en el contenido de compuestos de defensa tales como naphthoquinonas durante el desarrollo floral puede proteger la planta durante un período sensible.
PLUMBAGO AURICULATA PLUMBAGO SCANDENS
PARTE EXPERIMENTAL Material botánico
Hojas, tallos y raíces de Plumbago scandens L
Hojas, tallos y raíces de Plumbago auriculata Lam
Extracción Tallos y hojas
Muestra(Tallos y hojas deambas especies)
Lavado Desinfectado
Secado
TrituradoExtracción por Maceración
conMetanol en mesa giratoria.
Mesa giratoria modelo Shaker
Bigger Bill con una
velocidad de 50 rpm, a
temperatura ambiente.
Raíces
Muestra(Raíces de
ambas especies)
Lavado Desinfectado
Secado
TrituradoExtracción en soxhlet con cloroformo.
Los extractos de cloroformo de las raíces
fueron obtenidos por extracción en
Soxhlet durante 30 h.
El disolvente se eliminó en un evaporador
rotativo Büchi R114 a una
temperatura de 40 ° C,
equipado con controlador de vacío y baño de enfriamiento.
EQUIPO:
HPLC shimadzu Class-LC10
EQUIPADO CON DOS BOMBAS LC10AT
detector de espectro UV/VIS por una matriz de fotodiodos SPD-M10A
INYECTOR Rheodyne 7725i, con volumen de inyección (Loop) de 20 uL
Columnas: Shim-Pack CLC-SIL 250x4.6 mm Shim-Pack CLC-ODS 259X4.6 mm
Pre-Columnas: Shim-Pack CLC-G-SIL 10x4.0 mm Shim-Pack CLC-G-ODS 10X4.0 mm
Análisis de naftoquinonas por HPLC en fase inversa
Análisis de flavonoides con HPLC en fase inversaColumna: Shim-Pack CLC-ODS 259x4.6 mmPre-columna: Shim-Pack CLC-G-ODS 10x4.0 mmFase estacionaria : • C-18 o RP-18 (Si-(CH2)17-CH3); flujo 1ml/minFase movil: • Acetonitrilo – agua 10:90 v/vAmbas fases con acido trifluoroacetico a 0.05 %
Detección mediante escaneo de rango:• 200 nm a 400 nm Durante seguimiento de 3 longitudes de onda:• 220 nm, nm 260 y 340 nm.
RESULTADOS.• Se realizo realizó con gradiente de
composición de la fase móvil en vista rica producción de flavonoides ricos en ambas especies.
• Se comprueba la presencia de estos flavonoides en los espectros de absorción UV/VIS entre el rango de 200 – 400 nm
Señales cromatográficas en análisis de extractos metanólicos de Plumbago auriculata y P. scandens
Orientina
Vitexina-2-O-rhamnosideo
C27H30O14
Quercitrina
Epigenina 7-O-glucosideo
Vitexina
Acido Clorogenico
Análisis de naftoquinonas por HPLC en fase normal
Se realizo usando el modo de elusión isocrática.Naftoquinona plumbagina se aisló por métodos clásicos
fitoquímicas y se caracterizo por métodos espectrométricos
Composición de la fase móvil
QUINONAS
PLUMBAGO SCANDENS
• Son muy abundantes en la naturaleza, en el reino vegetal
• Coloración desde amarillo pálido hasta negro
• Se encuentra frecuentemente en la corteza o la raíz , y en algunos casos en las hojas
• Pueden clasificarse en benzoquinonas, naftoquinonas o antraquinonas
NAFTOQUINONAS
• Son pigmentos naturales, que tienen como característica estructural poseer dos grupos carbonilo en las posiciones 1,4 y se presentan con grupos hidroxilo y/o metilo como sustituyentes
• Se han aislado de plantas, hongos, bacterias, e inclusive de animales. Sin embargo, se encuentran en mayor proporción en plantas superiores de determinadas familias de Angiospermas como: Ebenaceae, Droseraceae, Bignoniaceae, Verbenaceae, Plumbaginaceae
PROPIEDADES DE NAFTOQUINONAS
Además de sus propiedades como colorantes las naftoquinonas naturales presentan actividades biológicas importantes
TintóreasTintóreas
Agentes antiparasitariosAgentes antiparasitarios
AntifúngicosAntifúngicos
AnticancerígenosAnticancerígenos
AntibacterianosAntibacterianos
Naftoquinona plumbagina
• (2-metil-5-hidroxi-1,4-naftoquinona)• Se encuentra en las hojas, corteza y raíces
de especies de géneros como Plumbago (Plumbaginaceae)
• Se ha descrito el uso de Plumbago zeylanica en el tratamiento del dolor reumático, en donde la plumbagina se muestra como la responsable de tal efecto
• Otras actividades de la plumbagina son como antiespasmódica, antibacteriana, antifúngica antiparasitaria y anticancerígena
Cromatograma típico a 267mm de extractos clorofórmicos de raíces de Plumbago scandens (a) y de Plumbago auriculata (b) – en fase móvil
ciclohexano,cloroformo, isopropanol (50,50,1 v/v) con elusión isocrática
Señales cromatográfica en análisis de extractos metanólicos de hojas y tallos y extractos clorofórmicos de raíces de Plumbago auriculata
y P. scandens
• Se han caracterizado nueve quinonas , como plumbagina naftoquinona se encuentra en los tallos y las raíces de ambas especies
• El análisis por HPLC en fase normal, demuestra de nuevo la mayor producción de metabolitos en P. auriculata, confirmando lo que ya se había encontrado en el análisis por HPLC en fase inversa
• El plumbagina se caracterizó en HPLC en fase normal, mostrando un tiempo de retención de aproximadamente 4 minutos
• La presencia de quinonas se observó en todos los órganos de las plantas en estudio.
• En P. auriculata predomino quinonas en los tallos• P. scandens el mayor número de sustancias metabólicas de esta clase se
caracteriza en las hojas• Naftoquinona plumbagina se caracterizó como el producto principal producido en
las raíces de P auriculata y P. scandens, que representan aproximadamente 12% a 20% del extracto crudo.
• Su identificación se realizo mediante comparación con el estándar espectrométrico.
CONCLUSIONES
• Los perfiles cromatogràficos de hojas, tallos y raíces de las especies Plumbago auriculata y P. scandens fueron caracterizados por HPLC en fase normal y fase inversa para estudios de normalización química de estas especies, determinando principalmente flavonòides y naftoquinonas.
• La especie Plumbago auriculata mostró una mayor representación de las clases químicas analizadas, y una mayor producción metabólica. Con la identificación de la presencia de cuatro flavonòides, un ácido o derivado fenólico y plumbagina naftoquinona.
• Este estudio reafirma los datos ya obtenidos en estudios anteriores de quimiosistemàtica de orden Plumbaginales. La plumbagina naftoquinona, presente en grandes cantidades en las raíces de ambas especies, puede indicar una desviación metabólica para su producción, que debe cumplir un papel muy importante en estas especies.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS Olga Lock de Ugaz . Investigación Fitoquimica:Métodos en el estudio de
productos naturales pp. 182-195. Editorial PUCP.
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López L, Lluvia Itzel; Leyva, Elisa; García de la Cruz . Las naftoquinonas: más que pigmentos naturales . Revista Mexicana de Ciencias Farmacéuticas, vol. 42, núm. 1, enero-marzo, 2011 pp.6-17. Asociación Farmacéutica Mexicana, A.C..
María Emilia Carretero Accame. Compuesto fenólicos: Quinonas. Revista Panorama Actual Med 2000; 24 (236): 778-782
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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• Joly, A. B.; Botânica: Introdução à Taxonomia Vegetal, Companhia Editora Nacional: São Paulo, 1977, p. 542.
• Lima, O. G. de; D'Albuquerque, I. L.; Maciel, G. M.; Maciel, M. C. N.; Rev. Inst. Antibiot. 1968, 8, 95.
• Gupta, M. M.; Verma, R. K.; Uniyal, G. C.; Jain, S. P.; J. Chromatogr. 1993, 637, 209
PAGINAS WEB: hppt:// issuu.com/kathycharrimacassi/docs/hplc#download
Hppt://www.upct.es/~minaeees/fundamentos_analisis_cromatografico.pdf
hppt://www.ulpgc.es/hege/almacen/download/39/39360/separaciones_por_cromatografia_1.pdf
hppt://dspace.ubu.es:8080/trabajosacademicos/bitstream/10259.1/64/1/Mart%C3%ADnez_Santamar%C3%ADa.pdf