PROBLEMAS DE CROMATOGRAFIA PLANAR

QUMICA ANALTICA II

PROBLEMAS DE CROMATOGRAFA

DEPARTAMENTO DE QUMICA ANALTICA

FAC. DE CIENCIAS BIOQUMICAS Y FARMACUTICAS

-2014-1) Realice una clasificacin general de los diferentes mecanismos de separacin cromatogrficos, indique la naturaleza del las fases y el tipo de interaccin que tiene lugar en cada caso. D algunos ejemplos de los mtodos comprendidos. PROBLEMAS DE CROMATOGRAFA PLANAR2) a-En base al cuadro de los adsorbentes ms comunes dado a continuacin discuta porque no est incluida celulosa.

b- Justifique por qu en cromatografa de adsorcin no usara sacarosa como fase estacionaria slida si tuviese que analizar una solucin acuosa que contiene cationes sodio, potasio y magnesio.Adsorbentes dbilesAdsorbentes medianosAdsorbentes fuertes

sacarosa carbonato de calciosilicato de magnesio activado

almidn fosfato de calcio almina activada

talco fosfato de magnesio carbn activado

carbonato de sodio hidrxido de calcio slica gel activada

3) Dado el Rf = 0.5 para una sustancia, cul es la posicin de la misma sobre la placa que se muestra a continuacin? Frente de solvente Lnea de siembra4) Para la separacin de dos analitos (una acetona aliftica de un alcohol aliftico) en silicagel, discuta porque el Rf del alcohol debera ser menor que el de la cetona (consultar Tabla III). Podra esperarse una retencin por quimiosorcin?

5) Dos componentes A y B en una mezcla tienen un Rf muy similar de 0.02 y 0.03 en slica gel con fase mvil de 2-cloropropano : pentano (8:92). Cul de las siguientes fases mviles usara para la separacin de los componentes A y B:

a- pentano c- acetonitrilo-pentano (20:80)

b- metanol d- metanol-diclorometano (1.5:98.5).

Para conocer el valor de (o (energa de adsorcin del solvente por unidad de rea del adsorbente) consulte la nomografa que se adjunta (tablas I y II).

6) a- La Fig. 1 muestra la separacin de acetofenona y bifenilo. Calcule la resolucin entre ambos compuestos, siendo la distancia entre los centros de las manchas 1,27 cm y los dimetros promedio del bifenilo y acetofenona 0,35 y 0,40 cm respectivamente.b- Discuta cmo se podra mejorar la resolucin entre dos compuestos que tienen un valor de Rf aceptable pero que no estn bien separados. 7) A continuacin se clasifican y dan algunos ejemplos de los diferentes mtodos de revelado que se utilizan en cromatografa planar: Segn se destruya o no la muestraSegn el tipo de interaccin

DestructivoNo destructivoQumicoFsico

Radiacin UV

Vapores de yodo

cido sulfrico

AguaRadiacin V

Radiacin UV

Vapores de yodo

AguaVapores de yodo

cido sulfrico

AguaRadiacin V

Radiacin UV

a- A partir de la observacin del cuadro discuta las siguientes aseveraciones:

a1- Cuando se visualizan aminocidos rociando con un spray de ninhidrina se est usando una tcnica qumica destructiva.

a2- El agua podra actuar como agente destructivo en el caso de algunos sters.a3- Los compuestos inorgnicos no pueden detectarse utilizando cido sulfrico.

a4- La radiacin ultravioleta podra ser una tcnica de visualizacin destructiva.

b- En una cromatografa preparativa justifique qu mtodo usara para visualizar: destructivo o no destructivo?

PROBLEMAS DE CROMATOGRAFA EN COLUMNA

8) Si el tiempo de retencin de un componente A es mucho mayor que el de un componente B, qu indica esto acerca de los analitos en:

a- Una cromatografa de permeacin en gel?

b- Una cromatografa de fase reversa?9) a- Dibuje un diagrama de bloques e identifique los componentes fundamentales de un cromatgrafo de gases.

b- En qu circunstancias es conveniente derivatizar un analito antes de realizar un anlisis por CG?c- Qu es un gradiente en CG y en CL?d- Qu ventajas tiene una fase estacionaria ligada en CG?

e- Porqu el detector de conductividad trmica responde a todos los analitos excepto al gas portador?

f- Comparar las propiedades de una columna tubular abierta con las de una columna empaquetada.

10) Los siguientes datos fueron obtenidos por medio de un cromatograma gas lquido, en una columna de 1.50 m., cuya fase estacionaria es de escualeno.

Compuestotr (min)w (min)

no retenido3

benceno (PE 80 C)101.1

hexano (PE 68 C)111.4

Calcular : a- El tiempo de retencin corregido (tr') para cada compuesto. b- El nmero promedio de platos (N prom.). c- La resolucin (R) entre ambos picos y decir si se logra la separacin. d- En base a los datos obtenidos grafique un cromatograma, respetando las escalas. Considere que el hexano es el compuesto que est en mayor concentracin. e- Cmo se puede mejorar la resolucin entre dos picos prximos en CG?11) Los siguientes tiempos de retencin y ancho de picos fueron observados en una columna gas lquido de 1,50 m, rellena con FE muy polar, de composicin qumica del tipo del etilen glicol.Compuestotr (min)w (min)

no retenido0.40-

hexano (PE 68 C)4.600.35

1-metiletil metanoato (PE 68 C)5.000.37

Calcular: a- El factor de capacidad (k') para cada sustrato. b- El factor de selectividad (). c- La altura equivalente del plato terico (AEPT o H). d- Qu modificaciones hubiese observado en los tr si la fase estacionaria hubiese sido no polar, por ejemplo escualeno? Y si la fase hubiese sido levemente polar, con una estructura del tipo de ftalato de didonilo? (ver Tablas IV, V y VI).

12) Para determinar la (op de una CGL, se procede a injectar alcuotas iguales de una misma muestra, a distintas velocidades de flujo cada vez. Los datos obtenidos son los siguientes:Alcuotatr (min)w (min)( (cm/seg)

15.530.705

28.580.8510

311.330.8020

411.640.8530

511.920.9040

612.161.0050

76.90.7070

a- Con esta informacin dibuje la curva de Van Deemter, indicando en la grfica la (op y la Hmin. La longitud de la columna es de 90 cm.

b- Si la muestra usada es un compuesto halogenado, sugiera el tipo de fase estacionaria. c- Qu proceso considera cada uno de los trminos de la ecuacin de Van Deemter?.

d- Por qu la difusin longitudinal (trmino B) es un problema ms serio en CG que en CL?.

13) Los cromatogramas de CG de la pgina 6 se obtuvieron bajo las condiciones indicadas.

a- Cules cambios realizara en cada caso para mejorarlos y lograr la separacin de los compuestos en la mezcla?

b- Qu ventajas aporta la programacin de temperatura en CG?14) Se desea determinar la concentracin de etanol en sangre por el mtodo de patrn interno. Para ello se procesan (de la misma manera) una serie de soluciones acuosas patrn de etanol y una muestra de suero: una alcuota de 0.01 mL de cada solucin se diluyen con 0.1 mL de una solucin patrn de 2-propanol 0.1mg/mL. Se inyectan 0.1 (l de cada solucin en un CG provisto de un detector FID (ionizacin de llama), un integrador y una columna PEG-400 (polietilenglicol) a 80 C. Los resultados obtenidos fueron los siguientes:

Patrones de etanol (mg/mL)Medida del integrador

Pico del etanolPico del propanol

0.5551812754

0.75756311893

1.01035012084

1.251393512870

1.51562812314

Muestra de sangre986212604

a- Construir el grfico de calibracin correspondiente y usarlo para determinar la concentracin de etanol en la muestra de sangre.

b- Qu ventajas tiene emplear las reas integradas de los picos en vez de sus alturas para realizar la cuantificacin?15) a- Realice una clasificacin de tipos de resinas de intercambio inico, indicando grupo inico fijo y contrain (in intercambiado).b- Indicar los efectos de aumentar el entrecruzamiento en las columnas de intercambio inico.

16) Las siguientes aseveraciones se refieren a los distintos modos de HPLC. Indique si las mismas son verdadera (V) o falsas (F).

a- En cromatografa de adsorcin la fase mvil es no polar.

b- Molculas polares pueden ser fcilmente separadas por cromatografa de adsorcin.

c-El tiempo de retencin de los solutos en cromatografa de exclusin puede ser alterado cambiando la polaridad de la fase mvil.

d- La exclusin molecular se usa slo para separar molculas grandes.e- En cromatografa reversa la fase mvil es ms polar que la fase estacionaria.

17) Una mezcla de fenil metil cetona, nitrobenceno, benceno y metil benceno se separa en una columna C18 con una fase mvil metanol: agua 60:40. En estas condiciones la cetona eluye primero.

a- En qu orden eluyen los otros solutos?

b- Cmo se puede cambiar la composicin de la fase mvil para cambiar el tiempo de retencin de los solutos?

c- Cmo se afectara el tiempo de retencin de los solutos si se usa una columna ligada con grupos fenilos en lugar de C18? 18) Una mezcla conocida de los compuestos C y D produce los siguientes resultados en HPLC:CompuestoConcentracin (mg.mL-1)

en la mezclarea del pico (cm2)

C1.0310.86

D1.164.37

Se prepara una solucin mezclando 12.49 mg de D ms 10,00 mL de un problema que slo contiene C y se diluye a 25,00 mL. La reas de los picos son de 5.97 y 6.38 cm2 para C y D respectivamente. Hallar la concentracin de C (mg.mL-1) en el problema.

RESPUESTAS

1) MECANISMO DE SAPARACINNATURALEZA DE LA FASEINTERACCION

F. MVILF. ESTACIONARIA

1-AdsorcinLquido o gasSlidoFuerzas de Van der Waals

y enlaces hidrgeno

2- ParticinLquido o gasLquido (+)Solubilidad

3- Intercambio inico LquidoResinaFuerzas electrostticas

4- Exclusin molecularLquidoGel porosoTamizado

5- AfinidadLquido SlidoReaccin de alta especificidad

(+)El mecanismo de particin abarca a la cromatografa convencional (fase estacionaria lquida), a la cromatografa de fase invertida ya la cromatografa de fase normal (las dos ltimas con fase estacionaria ligada).Ejemplos de mtodos:

1- Adsorcin. Planar (TLC, HPTLC) Columna (LSC clsica, HPLC, GSC)2- Particin. Planar (papel, HPTLC) Columna (LLC clsica, HPLC, GLC)

3- Intercambio inico. Columna (IEC)4- Exclusin molecular. Columna (SEC)3- Afinidad. Columna (AC)2) a- La celulosa se usa en cromatografa de particin, en donde la fase mvil y la fase estacionaria son lquidos. La fase estacionaria consiste en el agua retenida en las fibras de celulosa. b- Para la mezcla de solutos dada no debe usarse sacarosa como adsorbente pues se disuelve en medio acuoso.

3) distancia desde el punto de siembra al centro de la mancha

Rf =

distancia desde el punto de siembra al frente del solvente

Rf = 0.5 = x / 9 cm

x = 4.5 cm

4) El hecho de que el alcohol tenga un Rf menor significa que est ms retenido en la FE. Esto se debe a que, mientras la cetona interacta por fuerzas de London sobre los CH2 y los CH3 de las cadenas de slica y por unin hidrgeno como un aceptor de protones, el grupo -ol interacta por esas fuerzas y por unin hidrgeno como un dador de protones (ver esquema 1).

Por otra parte, los principales grupos que presentan quimiosorcin son aniones y cidos carboxlicos. Ni el alcohol ni la cetona tienen uniones covalentes con el silicagel. Alcohol dador de protn Alcohol aceptor de protn Cetona aceptora de protn

Esquema 1

5 ) a- El pentano tiene un (o de 0.00 por lo tanto la interaccin entre pentano y los compuestos A y B ser ms dbil que con 2-cloro-propano:pentano (8:92). Los compuestos A y B se adsorbern ms fcilmente y el Rf ser tan bajo como 0.00.

b-El metanol tiene un (o de 0.73 en el otro extremo del pentano. Es probable que este tipo de solvente compita muy bien con los compuestos A y B por los sitios activos del adsorbente y cause que ellos eluyan con un valor alto de Rf, tal vez junto con el frente del solvente.

c- La mezcla tiene un (o de 0.43, lo que es bastante mayor que el 2-cloropropano-pentano (8:92), y no tan alto como el metanol. Este llevara el Rf a un rango de 0.3 a 0.7.

d- Esta mezcla tambin tiene un (o de 0.43. La eleccin entre c y d depende de la naturaleza de los compuestos A y B.

6) a- En CCD la resolucin se calcula segn la siguiente ecuacin: Rs = X / 0.5 (d1 + d2)

siendo Rs = resolucin, X = distancia entre los centros de las dos manchas y d1 y d2 son los dimetros promedios de cada mancha.

Rs = 1.27 / 0.5 (0.4 + 0.35) = 3.38

b-La situacin planteada podra deberse a diversas causas, por ejemplo, a que se sembr ms cantidad de muestra que la conveniente, en una nica aplicacin. Lo aconsejable, para obtener una mancha de tamao y concentracin de analito en la placa aceptables, es sembrar poco volumen de muestra, repetiendo la aplicacin en el punto de siembra dos o tres veces, y permitiendo secar el solvente entre cada aplicacin. Este ltimo punto es importante porque cuando la muestra se aplica a la placa disuelta en un solvente sin permitir que se seque entre cada aplicacin, se producen anillos en donde el tamao de las manchas aumenta gradualmente, lo que dara lugar a una pobre resolucin.

Otra causa podra ser que no se us la FM adecuada. En ese caso debera optarse por otra de igual (o pero distinta composicin; esto probablemente mejorara la efectividad de la FM en el sentido de que, al modificar su interaccin con el adsorbente, facilitara el consecuente desplazamiento de las molculas de analito.

7) a1- La ninhidrina reacciona qumicamente con los aminocidos para dar un derivado coloreado que aparece en la regin visible del espectro.

a2- En general el agua no produce alteraciones en los analitos; sin embargo, es capaz de hidrolizar algunos steres, comportndose en ese caso como agente destructivo.

a3- En la mayora de las sustancias inorgnicas no hay carbonos que se carbonicen con el sulfrico y por lo tanto la mancha no se visualiza. Por otra parte, algunas sustancias inorgnicas pueden reaccionar con el cido para dar compuestos coloreados, lo que se posibilita la deteccin.

a4- La radiacin U.V. es un importante mtodo no destructivo que puede usarse con muchas sustancias no coloreadas. Sin embargo las vitaminas, por ejemplo, se desnaturalizan con este tipo de radiacin.

b- En una CCD preparativa el objetivo es recuperar los productos, por lo que debe utilizarse una tcnica no destructiva. 8) a- En permeacin en gel: A es de menor tamao que B.

b- En fase reversa: A es menos polar que B.

9) a- Consulte en la bibliografa sugerida.

b- La derivatizacin generalmente aumenta la volatilidad y en ciertos casos puede producir una respuesta selectiva del detector.

c- En CG se refiere a un aumento de temperatura durante la separacin cromatogrfica. En CL se refiere al aumento en el poder de elucin de la fase mvil durante la separacin cromatogrfica.

d- Reduce la tendencia de la fase estacionaria a sangrar de la columna a elevadas temperaturas.

e- El detector de conductividad trmica compara la conductividad trmica del eluato con la del gas portador.

f- Las columnas tubulares abiertas se caracterizan por: mayor resolucin, debido a que la longitud de la columna es mayor; menor tiempo de anlisis, debido a que al contener menos fase estacionaria retienen menos a los solutos; mayor sensibilidad, por las caractersticas que le son propias. Tienen menor capacidad de muestra, es decir, se puede aplicar menos muestra que a una columna empacada.

10) a- tr' = tr - tmtr'(Benceno) = 10 min - 3 min = 7 min

tr'(Hexano) = 11 min - 3 min = 8 min

b- N = 16 (tr/w)2

N (Benceno)= 16 (10/1.1)2 = 1322

N (Hexano) = 16 (11/1.4)2 = 988

Nprom = (1322 + 988) / 2 = 1155

c- R = 2 (tr(H) - tr(B)) / (W(B) + W(H))

R = 2 ( 11 min - 10 min ) / ( 1.1 min + 1.4 min) = 0.8

Para una separacin completa R debe ser mayor o igual a 1.5. En este caso la separacin no es completa.d-

e- Para mejorar la resolucin, usar: una columna ms larga, una columna de menor dimetro, una fase estacionaria con menor espesor, otra fase estacionaria. Duplicando la longitud de la columna se duplica el nmero de platos y la resolucin aumenta en , pero se duplica el tiempo de retencin. Usando una columna ms estrecha o pelcula de fase estacionaria ms delgada, aumenta la resolucin sin la penalizacin de aumento en el tiempo de retencin. Si se cambia la FE, cambia completamente la retencin relativa de los compuestos (cambia () y se puede modificar la separacin de los picos.

11) a- k' = (tr - tm) / tmk'hexano = (4.60 min. - 0.40 min.) / 0.40 min. = 10.5

k'm-e-metanoato = (5 min. - 0.40 min.) / 0.40 min. = 11.5

b- ( = k'(y) / k'(x) = k'(m-e-metanoato) / k'(hexano)( = 11.5 / 10.5 = 1.09

c- Nhexano = 16 (4.60 min. / 0.355 min.)2 = 2687

Nm-e-metanoato = 16 (5.00 min. / 0.372 min.)2 = 2890

Nprom = 2788

H = L / Nprom H = 150 cm / 2788 = 0.054 cm

d- La mezcla consiste en un compuesto no polar (hexano) y en otro moderadamente polar (1-metiletil metanoato), ambos con igual punto de ebullicin. En una fase muy polar, el ster, que es polar, se disuelve en la fase y es retenido, mientras que el hexano, no polar, no se disuelve muy bien y migra rpidamente.

Con una fase estacionaria no polar, que es el caso del escualeno, los dos compuestos tambin se hubiesen separado, pero el orden de elucin hubiese estado invertido; primero habra eludo el ster y luego el hexano, el cual, ms afn con la fase no polar, queda ms retenido.

Con una fase semipolar, probablemente no se hubiesen separado. Dado que sus puntos de ebullicin y sus solubilidades son similares, no tendran porque migrar a diferentes velocidades.

12) a- N = 16 ( tr / w )2 H = L / N

Alicuota

N

H

1

998

0.090

2

1630

0.055

3

3209

0.028

4

3000

0.029

5

2807

0.032

6

2366

0.038

7

1555

0.058

b- Para compuestos halogenados, se usan columnas con fase estacionaria polar, por ej. XE-30.

c- A: difusin en remolino, B: difusin longitudinal, C: dispersin por resistencia a la transferencia de masa transversal del analito en la fase mvil y entre las fases mvil y estacionaria.

d- Porque los coeficientes de difusin de los analitos son ms grandes en fase gaseosa que en lquida.

13) a- Fig. A En el primer cromatograma la diferencia en los tiempos de retencin es adecuada pero estos tiempos son muy largos y los picos anchos. Se puede pensar en distintas opciones para mejorar la resolucin:

Aumentar la velocidad de flujo. Esta decisin es correcta porque, por ej. una velocidad volumtrica de 100 cm3/min es factible y disminuir los tiempos de retencin a ms de la mitad, y los picos sern ms angostos y altos.

Usar una columna ms corta. Es tambin una decisin correcta pero tiene el inconveniente del tiempo que lleva empacar y acondicionar una nueva columna.

Aumentar la temperatura. Esta opcin no es correcta porque 140 C es la temperatura lmite para el escualeno (fase estacionaria) y una temperatura mayor producira su prdida. El recurso de aumentar la temperatura sera vlido si se cambia la fase estacionaria, por ej. con Apiezon L que tiene caractersticas similares al escualeno pero temperatura lmite de 350 C, pero volvemos al inconveniente de preparar otra columna.

Reducir la atenuacin. Esto producira mayores alturas de los picos pero no mejoraran los largos tiempos de retencin y por lo tanto no es una solucin satisfactoria.

Fig. B En este caso, los tiempos de retencin son cortos y la resolucin pobre.

Una posibilidad para mejorar los resultados es disminuir la temperatura, ya que una temperatura de 100 C es bastante superior a los puntos de ebullicin de ambos alcoholes. Bajndola a 60 70 C, probablemente los picos se separarn, sin prdida de tiempo.

Otra posibilidad es disminuir el volumen de muestra inyectada y la atenuacin. Efectivamente, 10 (l de muestra es bastante, pero reducindola no se tendr una mejora suficiente. En realidad lo conveniente sera combinar las estrategias de disminuir la temperatura, el volumen inyectado y la atenuacin.

Aumentar la longitud de la columna tambin sera una opcin dado que una columna de 75 cm es bastante corta. Pero cambiar la columna requiere ms tiempo de trabajo que las soluciones anteriores.

Fig. C En este cromatograma los tiempos de retencin son razonables, y la diferencia entre ambos es adecuada, pero los picos son muy anchos. El volumen de muestra es un poco grande pero no excesivo; la longitud de la columna, la temperatura y la velocidad de flujo son tambin adecuadas. El problema est en que el horno de inyeccin est apagado (o est quemado su circuito).

Una prctica frecuente, cuando los cromatogramas no son los esperados, es querer cambiar la columna; sin embargo en este caso, no se obtendra un resultado satisfactorio. El benceno y el metilbenceno poseen caractersticas muy similares y el cambio por una columna menos polar (que sera lo normalmente recomendado) producira tiempos de retencin un poco ms largos y apenas una ligera mejora en la resolucin. Este cambio, entonces, no sera suficiente para superar la desventaja del ancho de picos. En general, la obtencin de este tipo de bandas, indica que algo anda mal con la cromatografa y la nica respuesta es encontrar la falla y corregirla.

Fig. D En este caso se nota la poca resolucin de los primeros picos y el ancho (y largos tiempos de retencin) de los ltimos componentes, que indican el amplio rango de puntos de ebullicin de los componentes de la mezcla. Para este caso hay una sola respuesta: usar temperatura programada. Si se comienza a 90 C y se aumenta a 12 C/min, la resolucin de los primeros picos ser pobre y rpidamente se alcanzar la temperatura lmite de DNP (150 C). Si se comienza con una temperatura inferior (por ej. 70 C) y se hace rampa a 8 C/min hasta 150 C, los 10 minutos involucrados sern probablemente suficientes para eluir los ltimos componentes.

b- La cromatografa a temperatura programada permite analizar mezclas de compuestos que tienen un amplio rango de puntos de ebullicin. La temperatura aumenta progresivamente mientras se desarrolla el anlisis, de modo que cada compuesto migra a una temperatura adecuada, hasta alcanzar la temperatura apropiada para el componente menos voltil al final de la corrida. A su vez, mejora la calidad de los picos.

14) a-

R = 0.91 mg/mL

b- Si varan ligeramente las condiciones de una columna, el tr de un compuesto y la altura del pico pueden modificarse. Pero el ancho y la altura varan simultneamente y el rea correspondiente se mantiene constante.

15) a-

Tipo de resinaGrupo inico fijoContrain

catinica fuertesulfonato ((SO3-)catin

catinica dbilcarboxilato((COO-)catin

aninica fuerteamonio cuaternario

((N(CH3)3+)anin

aninica dbilamonio secundario

( (NH.CH3)anin

b- Al aumentar el entrecruzamiento de las resina, aumenta su capacidad, selectividad y favorece el equilibrio.

16) a- Verdadero: La fase mvil debe ser relativamente no polar.

b-Falso: Las molculas polares se separan mejor por cromatografa de fase reversa. Utilizando cromatografa de adsorcin las molculas polares tienen tiempos de retencin ms largos y pueden presentar picos con cola

c-Falso: Un cambio en la polaridad de la fase mvil tiene un pequeo efecto sobre los tiempos de retencin ya que en el caso de cromatografa de exclusin la retencin est determinada por el tamao y la forma de la molcula en relacin con el tamao y forma de los poros de la fase estacionaria.

d-Falso: La exclusin molecular es usada para separar pequeas molculas de grandes molculas

e-Verdadero.

17) a- Cuanto ms polar es el soluto ms rpido es eluido. De manera que el orden ser: fenil metil cetona, nitrobenceno, benceno, metilbenceno.

b- Se puede incrementar la polaridad de la fase mvil, por ejemplo, aumentando la cantidad de agua.

c- La columnas con fase ligada de tipo fenilo son ligeramente ms polares que las de C18 y esto podra causar que los solutos eluyan ms rpido; no afecta a todos los solutos de la misma manera, depende en todo caso del tipo de compuesto.

18) En cromatografa en columna, en general, ocurren fluctuaciones relativas al instrumental utilizado y al mtodo; como consecuencia de esto, la respuesta del detector no es reproducible para la misma cantidad de un compuesto dado ni para cantidades iguales de cada sustancia. Para subsanar el inconveniente se inyecta junto con el analito un patrn interno y se mide, empricamente, el factor de respuesta (F); el procedimiento se basa en que ambas seales respondern proporcionalmente, independizndose de estas variaciones.

Clculo de F CC / CD = F AC / AD F = CC . AD / CD . AC = 4.37 cm2 x 1.03 mg.mL-1 / 10.86 cm2 x 1.16 mg.mL-1 = 0.357

Clculo de CC en la solucin problema

Para conocer la concentracin de D: 25.00 mL de solucin --------- 12.49 mg de D

1.00 mL --------- x = 0.499 mg CC = F CD AC / AD = 0.357 x 0.499 mg.mL-1 x 5.97 cm2 / 6.38 cm2 = 0.167 mg.mL-1 1.00 m L -------- 0.167 mg

25.00 mL ------- x = 4.17 mg

10.00 mL -------- 4.17 mg

1.00 mL ---------- x = 0.417 mg CC = 0,417 mg.mL-1

Atenuacin: x 200

Atenuacin: x 104

S

O

Fig.1

H

O

O

O

i

S

O

R

R

H

R

O

O

i

S

O

O

9 cm

O

H

R

H

H

O

O

O

i

Atenuacin: x 105

0,1 (l

Atenuacin: x 500

O

O

tr (B)

op

Hmin

PAGE 11

_1097573310.unknown

_1471335027.xlsGrfico3

0.453

0.636

0.857

1.083

1.269

[EtOH] / [PropOH]

areaEtOH/areaPropOH

Hoja1

0.50.453

0.750.636

10.857

1.251.083

1.51.269

Hoja1

[EtOH] / [PropOH]

areaEtOH/areaPropOH

Hoja2

Hoja3