DETERMINACION DEL SISTEMA DETERMINACION DEL SISTEMA ABOABO

REPRESENTACION ESQUEMATICA DE LA SINTESIS BIOQUIMICA DE LOS ANTIGENOS ABH

LA DETERMINACIÓN DEL SISTEMA ABO COMPRENDE DOS PARTES:

1.Prueba celular para determinar el antígeno de grupo sanguíneo

2.Prueba sérica o inversa para determinación de los anticuerpos

Las dos pruebas se realizan simultáneamente y se complementan.

En aquellos casos en que hay discrepancias entre ambas pruebas, la investigación adicional revelará una condición que puede ser de importancia clínica o solo interesante desde el punto de vista serológico.

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS EN ABO

P. celular P. sérica Interpretación

G.R. desconocidos Suero desconocido Grupo sanguíneo Suero conocido Hematíes

Anti-A Anti-B Anti-A,B A1 B -----------------------------------------------------------------------------

- - - + + O

+ - + - + A

- + + + - B

+ + + - - AB

- - + - + subgrupo A

- - + + + subgrupo A +

anticuerpo

INTERPRETACION DE LA DETERMINACION DEL FACTOR Rh

DISCREPANCIAS ENTRE LA PRUEBA CELULAR Y LA PRUEBA SERICA

Las discrepancias son el resultado de:

1. ERRORES TECNICOS

* Material sucio * Contaminación bacteriana de las muestras o de los reactivos * Proporción incorrecta entre suero y células * Exceso o falta de centrifugación * Uso incorrecto de la temperatura de incubación * Pérdida de la actividad de los reactivos * Presencia de hemólisis, la cual no se identificó * Incorrecta identificación de las muestras

2. PROBLEMAS INHERENTES A LAS CELULAS

a.Pseudoaglutinación

b.Autoaglutinación

c.Poliaglutinación

d.Sub-grupos débiles de A

e.Antígeno B adquirido

f. Reacción de campo mixto

PSEUDOAGLUTINACION

No es verdadera aglutinación, las células se agrupan formando pilas de moneda ( rouleaux ). Se observa: cuando los G.R. están suspendidos en su propio suero, hay exceso de proteínas o proteínas anormales, gelatina de Wharton o presencia de macromoléculas.

AUTOAGLUTINACION

G.R. fuertemente sensibilizados por anticuerpos y puede aglutinarse espontáneamente con los sueros hemoclasificadores ABO. Se observa en A.H.R.N., transfusión con sangre incompatible,enfermedades hemolíticas inmunes.

Si esto sucede es posible remover una cantidad del anticuerpo unido mediante elusión suave que no modifique los antígenos, después de los cual se puede hacer una tipificación efectiva para el ABO

POLIAGLUTINACION

Los G.R. de un individuo son aglutinados por todos o casi todos los sueros humanos. El fenómeno es debido a que bajo ciertas circunstancias son expuestos o descubiertos antígenos que forman parte de la estructura de la membrana eritrocítica y que normalmente están ocultos pero para los cuales existen anticuerpos en casi todas las personas. La poliaglutinación no tiene relación directa con el sistema ABO.

Las células poliaglutinables pueden ser clasificadas en: * Por activación T: todas los G.R. tienen el receptor T latente que se pone de manifiesto por infecciones bacterianas tanto in vitro como in vivo. Es un fenómeno transitorio. * Por activación Tn: también se debe a la activación de un receptor latente pero por mecanismo no conocido que ocurre solo in vivo y no es transitorio. Las personas presentan pancitopenia. * El Ag. Cad ( Super Sid ) es de baja incidencia y es el único poliaglutinable hereditario; la mayoría adultos contienen el anti-Cad. La reacción de aglutinación es la típica de campo mixto.

ANTIGENOS DEBILES O SUPRIMIDOS

Puede aparecer en subtipos débiles de A o B en caso de leucemia o enfermedades malignas que debilitan la reactividad de los antígenos.

La discrepancia se presenta porque en los G.R. no se observa la aglutinación con los reactivos correspondiente, pero en el suero están presentes el anti-A o anti-B.

ANTIGENO B ADQUIRIDO

Se debe considerar este antígeno cuando en la prueba celular los G.R. se comportan como AB y en la prueba sérica se demuestra el anticuerpo anti-B. Solamente los G.R. del grupo A adquieren la espeficidad anti-B. * Para identificarlo se recomienda observar el grado de aglutinación con el anti-A y el anti-B. * Determinar en la saliva la presencia de la sustancia A y B * Revisar la H.C.:buscar asociación con enf. Malignas: colon, recto, próstata, cuello uterino; infecciones con E. coli O86

AGLUTINACION DE CAMPO MIXTO

Dos poblaciones de células rojas distintas y separables están presentes en la muestra de sangre. Se reconoce porque en la tipificación, la reacción de aglutinación muestra células aglutinadas en medio de un mar de células no aglutinadas.

Este fenómeno se observa:

a. Pacientes del grupo A o B que reciben transfusión de sangre O

b. Hemorragia materno fetal

c. Transfusión intrauterina

d. Quimeras

e. En la reacción débil adquirida del antígeno A como se observa en las leucemias.

Las dos poblaciones de células se pueden separar por técnicas de aglutinación o hemólisis

3. PROBLEMAS INHERENTES AL SUERO

a) Presencia de anticuerpos irregulares fríos que reacciona con otros Ags. presentes en los G.R. A y B usados en la prueba inversa. Vg. Auto anti-I, anti- A1, anti-H. * Auto anti- I, es el de mayor frecuencia. Este anticuerpo aglutina a todas las células adultas, incluyendo las propias y las usadas en el grupo inverso. Las células del cordón, regularmente no contienen el antígeno I, no son aglutinadas por la prueba inversa y permite aclarar las discrepancia. * Anti A-1 presente en los individuos A2 y A2B, aglutinan a las células A1 . * anti-H en personas A1 y A1B. Generalmente causan pocos problemas.

b) Disproteinemias que causan el fenómeno del roleaux

c) Ausencia de anti-A y anti-B

TIPIFICACION DE LOS ANTIGENOS TIPIFICACION DE LOS ANTIGENOS RhRh

INDICACIONES TIPIFICACION DEL Rh

La rutina del Banco de Sangre solo incluye la determinación del antígeno D y la demostración de la actividad Du.

Los demás antígenos se tipifican en situaciones especiales, como: * Investigación de paternidad *En personas con anticuerpos anti-Rh *En la sangre a transfundir a receptores con anticuerpos anti-Rh *En pacientes que reciben transfusiones periódicas

REACTIVOS COMERCIALES UTILIZADOS EN LA TIPIFIACION DEL Rh

1.SUERO ANTI-D DE ALTA PROTEÍNA

Estos reactivos dan resultados rápidos y reprodu –cibles, sin embargo pueden haber falsos positivos cuando los G.R. están sensibilizados con anticuerpos ( autosensibilización ).

Para detectar estos falsos positivos se debe usar un reactivo control.

Factores que conducen a los falsos positivos: *Dependientes del reactivo *Dependientes del suero del paciente

DETERMINACION DEL ANTIGENO D

CON SUERO DE ALTA PROTEINA

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Tubo anti-D Tubo control RhInterpretación

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+ - Rh positivo

+ débil - Posible Du

- - Rh negativo o posible Du

+ + Autoaglutinación

( investigar dicha situación )

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PRUEBA PARA DETERMINAR DU

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Tubo con anti-Rh Tubo control Rh Interpretación

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- - Rh negativo

+ - Rh positivo

+ + Prueba inválida

( bloqueo in vivo por

anticuerpos )

Se debe proceder a la Prue- ba Rh usando anti-D salino o de molécula IgG modificada

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PRUEBA CON ANTI-D SALINOSe usa para determinar el antígeno D cuando la prueba con el reactivo anterior ha sido inválida--------------------------------------------------------------

Tubo con anti-D Tubo controlInterpretación

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+ No requerido G.R. contienen el antígeno D

- No requerido G.R. no contienen el antígeno D

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SUERO ANTI-D DE MOLECULA IgG MODIFICADA

Los anticuerpos IgG anti-D son convertidos en aglutininas salinas mediante reducción química que desdoblan los enlaces disulfídicos confiriendo una mayor flexibilidad a la molécula lo que le permite que sus dos porciones Fab cubran una distancia mayor que la IgG nativa. Este suero anti-D puede ser usado con toda confianza en lugar del reactivo de alta proteína sin que sea necesario montar pruebas de control.

Se usa también para la determinación de la prueba Du , aunque no debe realizarse si el Coombs directo es positivo. -------------------------------------------------------------------------- Tubo con anti-Rh Tubo auto-controlInterpretación -------------------------------------------------------------------------- - - Rh negativo + - Rh positivo + + Prueba no válida ---------------------------------------------------------------------------