Electroforesis
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ELECTROFORESIS
Lee Bojórquez Juan Francisco
Madrid Ruiz Daniela
Morales Carrasco Reyes
Moreno Quiroz Mayra
Orozco Avilés Rebeca
Ramírez Lee Leslie Jennifer
método en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomoléculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa.
Atracción hacia el polo opuesto
Moléculas ionizadas
Campo eléctrico
Moléculas positivas
Cátodo-
Moléculas negativas
Ánodo+
FUERZAS ADICIONALES
Fricción con el disolvente
Movimiento Browniano
Dificulta el movimiento temperatura
Difusión
Moléculas no migran de forma homogénea
Se forma un frente
Para reducir la anchura del frente…
Se reduce el movimiento de las
moléculas empleando un medio que oponga
mas resistencia a dicho movimiento
G E L
Polímero soluble de muy alto peso molecular que atrapa moléculas de agua y forma un tamiz que dificulta el
movimiento de los solutos
la migración electroforética de las moléculas será mas lenta, pero el ensanchamiento del frente se vera reducido
también
MÉTODOS ELECTROFORÉTICOS ZONALESSon útiles para
lograr la separación de
mezclas complejas
Se aplican pequeñas cantidades de la
disolución de proteínas a un soporte sólido, que
se impregna con una solución tampón
Como soporte han sido utilizados
papel (celulosa), almidón,
poliacrilamida, agarosa y acetato
de celulosa
Equipamiento
Fuente de poder
Cubeta vertical u horizontal
Soporte& dos
electrodos
Electroforesis en gel de poliacrilamida
Electroforesis en geles de gradientes
Electroforesis en geles de agarosa
Electroforesis Capilar
isoelectroenfoque
Electroforesis bidimensional
Electroforesis en gel de poliacrilamida
Polimerización de acrilamida
Químicamente inerte
Forma geles transparentes
Estabilidad mecánica
No iónicos
Permiten buena visualización
neurotoxicidad
Control del tamaño del poro
Electroforesis en geles de gradientes
la proteína migra hasta alcanzar una
zona donde el tamaño de poro impida cualquier
avance
Tamaño decreciente del poro
al alcanzarse el limite del poro no se produce una
migración apreciable aunque
no se detiene completamente
concentra las bandas en regiones
mas estrechasIncrementa el rango
de pesos moleculares que se pueden resolver en
un mismo gel
Electroforesis en geles de agarosa
polisacárido• Obtenido de algas
Permanece liquido por encima de los 50°C• Forma un gel semisólido al
enfriarseConstituido por matriz de fibras poliméricas
• Separa moléculas grandes (20 000nucleotidos)
• Realizada sobre un capilar de silica• Fundida a 20 a 30 kv en un campo de 400 a 500 v/cm • El capilar de silica fundida permite el pasaje de la luz UV
Electroforesis Capilar
Es posible separar cationes, aniones, proteínas, macromoléculas y sustancias no cargadas en forma simultanea.
Region del anodo es acida y catodo es alcalina
isoelectroenfoque
Sustancias en PH inferior a su punto isoeléctrico cargadas (+) cátodo
Sustancias en PH alto a su punto isoeléctrico cargadas (-) ánodo
Electroforesis bidimensional
FUENTES DE ERROR
temperatura velocidad
Niveles de catalizador
Tiempo de corrida &
preparación