Evidencias clínicas, preclínicas, y toxicológicas

Gregorio Martínez Sánchez, Pharm.D, Ph.D.

gregorcuba yahoo.it

Toxicidad del Ozono

Altitud (km)

30

Insuficiencia pulmonar Riesgo cardiovascular

15

0

0 50 150 200 250 300

←Contaminación Concentración de O3 (µg/m3)

Efectos del ozono inhalado sobre la salud

• Trastornos respiratorios agudos y crónicos

• Efectos a nivel cardiovascular

• Incidencia en la mortalidad

Fuentes:

• Estudios en humanos en cámaras

• Estudios epidemiológicos

• Adicionalmente: – Estudios de toxicidad en animales

– Estudios del mecanismo de acción in vitro

Fluido alveolar

superficial

Sangre

Volumen 17-20 mL Plasma ~ 2,71 L

Proteinas

totales

~7 µg/mL Total ~130 mg ~75 µg/mL Total ~202 g

Albumina ~3,5 µg/mL Total ~63 mg ~45 µg/mL Total ~122 g

Trasferrina ~0,3 µg/mL 2-3 µg/mL

Ceruloplasmi

na

~25 µg/L 140-400 µg/L

Lactoferrina ~0,5 µg/L ?

GSH 300-400 µM Plasma ~3 µM Eritrocitos

~2,2 mM

Vitamina E ~2 µg/L ~10-20 µg/L

Vitamina C ~3,5 µg/L ~9 µg/L

Acido urico ~0,05 µg/mL ~0,04-0,07 µg/mL

Bilirrubina ? ~1,0 mg/dL

Glucosa ~0,4 µg/mL ~0,7-1,0 µg/mL

¿Por qué es tóxico el ozono para las vías respiratorias?

Peroxidación

lipídica

% i

ncr

ease

in r

isk p

er s

tan

dar

d i

ncr

emen

t

Resumen Estudios Poblacionales

all year

warm season only

Efectos respiratorios crónicos

Algunas evidencias sugiere mayor incidencia de asma y disminución de la función pulmonar

Un amplio estudio de cohortes prospectivo encontró poca relación entre el efecto del ozono y el de otros contaminantes

Los estudios ecológicos para la exposición, no arrojan evidencias claras

Las pruebas que relacionan el O3 con la morbilidad de enfermedades respiratorias crónicas son inconcluyentes

Mortalidad de un dfa- Resumen de un meta análisis

0/o Change in Mortality

0 1 2 3 4

Bell et al. (2005):

3.2 U.S.and n.on u_ s_ studies

(41 estimates)

Ito et a!. (2005):

38 u.s.and no u.s.studies

(43 estimates)

Levy et at (2001):

6 U.S.and European studies (6 estimates.PM-adjusted)

Levy et al. (2005):

28 U.S., Canadian,and European studies

(48 estimates)

Stieb et al. (2003):

10 u.s.and n.on..u.s.studies

(10 estimates, non-GAM studies only)

Thurston and Ito (2001):

7 U.S.and European studies (7 estimates .PM-adjusted)

Wor'ld Health Organization (2004):

8 European studies (15 estimates)

Mortalidad

Resumen

Asociación sólida entre la mortalidad diaria y aumento de la concentración de ozono

No se modifica por la presencia de otros contaminantes, o el estado del tiempo

El riesgo se ha analizado fundamentalmente en temporadas cálidas

La mortalidad cardiovascular algo más fuerte y más coherente que la afectación a las vías respiratorias

ALGUNAS APLICACIONES CLÍNICAS

ANGIOPATÍA Y ENFERMEDADES Arteriopatía Periférica

CIRCULATORIAS ARTERIALES Enfermedades cerebrovasculares

Úlceras Decúbito

ÚLCERAS Y LESIONES Curación y cicatrización de lesiones post-irradiación

DE LA PIEL Gangrena Diabética

Tratamiento de Quemaduras

ENFERMEDADES Proctitis

INTESTINALES Colitis

Hepatitis

Hepatitis C

INFECCIONES VIRALES

Herpes Simple y Herpes Zoster

Terapia COMPLEMENTARIA EN CÁNCER

Poli-artritis Crónica

REUMATISMO, ARTRITIS Inflamación Articular

Y OTRAS Puntos gatillos miosfasciales

Hernia Discal

ODONTOLOGÍA

JOURNAL OF APPLIED TOXICOLOGY

J. Appl. Toxicol. 21, 297-301 (2001)

DOl: I 0.1002/jat.758

Oxidative Preconditioning Affords Protection Against Carbon Tetrachloride-induced Glycogen Depletion and Oxidative Stress in Rats

E. Candelario-Jalil,1* S. Mohamm ed-A l-Dalain; 0. S. Loon Fermlnd ez;S. Men end ez,2

G. Perez-Davison;N. Merin o,3 S. Sam1 and H. H. Ajami eh 1 1 Center for Research and Biological Evaluation, Uni versity of Havana, Institute of Pharmacy and Food Sciences, Apartado Postal 6079, Havana City I 0600, Cuba 2 Ozone Research Center, Cuba 3 National Cenu·e for Scientific Research, Cuba

CONTROL

CCl4

OzonoOP + CCl4

ESTUDIO HISTOLÓGICO DEL GLUCÓGENO HEPÁTICO

El po-ozono, como mecanismo protector frente a

un desafío oxidativo quedo demostrado a través de:

Mantenimiento de la integridad hepatocelular

(histología, Transaminasas, colinesterasa)

Estimulación de enzimas secuestradoras de ero

(superóxido dismutasa y catalasa)

Preservación de enzima reguladora del calcio

intracelular (atpasa-ca2+)

Mantenimiento de los sistemas antioxidantes

endógenos (Glutatión reducido, glucosa-6-fosfato

deshidrogenasa)

DIABETES MELLITUS

“HAY EVIDENCIAS, CLÍNICAS Y EXPERIMENTALES, CONVINCENTES DE QUE LA GENERACIÓN DE ERO ESTÁ INCREMENTADA EN AMBOS TIPOS DE DIABETES Y QUE EL DESENLACE DE LA DIABETES ESTÁ ESTRECHAMENTE ASOCIADO AL ESTRÉS OXIDATIVO”

American Diabetes Association and the German Diabetes Society. 2001.

CALIDAD DE VIDA SERIAMENTE AFECTADA (Bjonk, 2001):

El RIESGO DE AMPUTACIÓN de miembros inferiores es de 15 a 40 veces

más alto en diabéticos.

La incidencia de ENFERMEDADES CARDÍACAS E INFARTO es de 2 a 4

veces más alta en diabéticos.

La DM es responsable del 40% de las ENFERMEDADES RENALES

TERMINALES y de CEGUERA.

La EXPECTATIVA DE VIDA es de 10 a 15 veces menor, en un individuo

diabético con respecto a uno no diabético.

La FRECUENCIA DE HOSPITALIZACIÓN, los GASTOS en cuidados de

salud y el PRESUPUESTO INVERTIDO EN EL TRATAMIENTO de las

complicaciones diabéticas es mayor con respecto a los no diabéticos.

INFARTO INFARTO AMPUTACIÓN DE

MIOCARDIO CEREBRAL MIEMBROS

COMPLICACIONES ASOCIADAS A LA DIABETES

HIPERGLICEMIA

MICROVASCULARES MACROVASCULARES

ATEROSCLERÓTICAS

RETINOPATÍA NEFROPATÍA NEUROPATÍA CORAZÓN CEREBRO EXTREMEDIDADES

INFERIORES

CEGUERA ENFERMEDADES ENFERMEDADES

RENALES TERMINALES DEBILITANTES

GENÉTICO

ENZIMAS PROTECTORAS

DESARROLLO

MEDIO AMBIENTAL

CONTAMINANTES Y FÁRMACOS

VIRAL

RESPUESTA INMUNE

E R O

DIETA

ANTIOXIDANTES

PROOXIDANTES

ESTADO

NUTRICIONAL

ENZIMAS INMADURAS

DEFICIENCIA

MUERTE

CELULAS

HIPERGLICEMIA

DIABETES MELLITUS TIPO 1

DIABETES TIPO 2

HIPERGLICEMIA

ERO

ESTRÉS OXIDATIVO

DISFUNCION CÉLULAS

DAÑO DE CÉLULAS

NÚMERO DE CLULAS

ESTRES OXIDATIVO Y DIABETES MELLITUS TIPO 2

LA OZONOTERAPIA EN LA DIABETES Y SUS

COMPLICACIONES VASCULARES

O

MECANISMOS PATOLÓGICOS DEL DAÑO ENDOTELIAL EN LA DIABETES

CAT H O

.-

2

SOD

H2O 2 2

GSH-Px +

ERO

GSSG GSH

GR HMPS

PTGA

NADPH NADP

NAD+ NADH

GLUCOSA AR SORBITOL SD

FRUCTOSA

NADPH NADP

LDL

OXIDADA

NOS

L-ARGININA L-CITRULINA + ON.

.NO

DAÑO

ENDOTELIAL

,

Pkwmacolagicm .J/j;:; lU'I. 44• .!Y.o.. 5.-::!001

do6:10.WOI5.o'plus.100"!_0867, s1.-ailable aWine st :llnp:/. :l.'l.l."o\I:.E me libnu:y..com o:!lllll l

OZON.E TREATl\iiENT REDUCES :MARKERS OF OXIDATIVE i\1""iD

ENDOTHE.LIAL D"' I.:. \G·E Irr; A_-x· EXPERlliE2\TAL DIABETE S lODEL 1.."" RATS

S.AID ·10H..1J...fED .AL-DJ!i.LA.Th"r., GKEGORlO :MAR.TINEZ<l., EDU. O CJL "DEI...Po.RIO-J... .IV1

SIL'VIA MENEN"DEzb, l.....!U.1BER.TO R..E= , ATTILIA GIULI.P..NJ.ti and OLGA SONI.J.l. LEON.s ...

centerfor Re::ear;c.h amJ.Biological E ·.- luancn (CJE.B-IF..!L). U11i "Br :sitJl qfH.'Jl-muz. Hal..Yr.l'J a 10400..

C tb-a.. b O=.one .R sse-an:;oh CsJJte?-; C ttb-a.. "' UMi\.'6'TS;,..:ifA.t1ctma.. 1taiJ,·. oJD'B.._r:N:.rtment oj'ChemistJy ami

_i\tediC'.al Bioc-h·e:mi:;J'J'Y.. t> E7;Si( Jl of}!!lila..tJ '. Ma 5.-.."l.lduJi, 50-20133 j\Jilm L-:aiJ,·

O:z:on.e has been used ;;,s a the rapem.t[:::al agem ar111d heneiilcca!effects ba;.-. e been ob:::;e:n;ed. Hmve-;rer

s;o f;:rz- only a fetv bioc:he mica.I ar!lld phan:nca.c.odyn<am i:i c: mecllanli.J:n.s hare beel!l ehrcidated. ue

dE!I.ll.Ol.lS"b:a.te th.a conrl:m led ozone ad.J:mni.stnt i:ol!l may promote an oxidati:,.-e PJ:·ec.oudi6om'Dg or

adap13tion to oxidati:-..·e .:;tress, p: .-e:,.--entmg the dcamage indm.c.ed by r•eac.ti.l e ox)'·ge:a speciies (ROS)_

Takiug into acc:ou.nt that dia is a disorder assor:::iated 1,:...-irth oxjdati:-..·e st:J:es:.:;, we postulate that

ozo:n.e n:ea!me:uil: in om- expe:riimental co:n.diti.ol115 might p o'tect an.ti:oxi:da:n.t .systell.l5 and ma]!nta.in,

a'l: a pb.ysio .ogacal le'i.-e othe :m.carl;.e-rs of endo!helaal ce ! damage a..ss.ociated w:Lth dlia.bet:c

COJJ.IPl iic:ati:ollS.. Fir.e gms; of :r.ats tve.re cla.£Smed as follow.s:(1) comrnl group hl:!ated on!y R<Lfu

physiological sa.liiue solution; (2) posM:i...,-e control gr0np using sb"eptmzotocin (STZ) as a di.a.hert:e.s

in.ducto1 (3) o2:one gJ"Ol!l.p, ]jf!Ceil:m,g 10 b:-e:altmenh: (1.1mg kg-1), one pe dca.j· after SYZ-indnc:ed

mabetes; {4) oxygen grGlJip (26 kg-l), 0!1.1! per dca.y, .a:; in g!'Otlp 3 but using oxy gen only;

(:5) cou1rol ozone group,.as gro.up 3, bot 't'i.'itb.-ot!J.t STZ_ The o;z;one n-ealbneu im:pro'i.--ed g!ycelillc

control and p1:·.-ented oxjd atil.-.e st:J:ess, the increase of aldose :reductase, :fi"l!Jctolys.ine e:onten.t and

adti.r;:m.c.e d oxidaiti.ou protem pmm:u::'ls. N:i',lrite and :mtt""atie eYE .5 l.'l.rere mamtain.e d wiiliou: ch;mgss

'!Arith rega d to !ll_on-d.ja"betic co:an·o _ The ll:!sults. of thi:s study .:how tha' repeate,d adwinis'lr.-:Jtion

of ozone in non-toxic doses might play a role lin ·fue conrb:o oi diabetes a!n.d its compljcations._

@ 20-Q 1Academe Press

EFECTOS DEL PostOx POR OZONO EN RATAS DIABÉTICAS

PESO CORPORAL Y CONCENTRACIONES PLASMÁTICAS DE GLUCOSA

Grupos

Cambios en el

Peso Corporal (g)1

Glucosa Plasmática

(mmol·L-1)

Significación Estadística

de Glucosa Plasmática

Inicio

Fin2

Control No Diabético

+ 41,52 ±18,16 a

12,73±1,45a

10,35±1,25a

N.S.

Diabético (STZ)

- 30,26±14,59 b

22,74±1,12b

27,12±2,12b

p < 0,001

STZ +

OzoneOxPost

+ 29,82±6,91 a

21,47±1,67b

16,10±1,45(3)c

p < 0,0001

(1) Cambios en peso corporal entre Inicio y Fin del experimento; (2) 10 días después de la diabetes inducida por STZ;

(3) Después de 10 tratamiento con ozono en ratas diabéticas.NS, No signifiativo. Datos representan la Media ± ESM.

Grupos con letras diferentes representan diferencias significativas.

EFECTOS DEL PostOx POR OZONO SOBRE MARCADORES DEL DAÑO ENDOTELIAL EN RATAS DIABÉTICAS

Niveles de ALDOSA REDUCTASA, FRUCTOLISINA, and ÓXIDO NÍTIRICO (NO3/NO2)

Grupos

AR1

FA2

ÓXIDO3

NÍTRICO

Control No Diabético

0,58±0,09(a)

6,36±0,00(a)

11,74±0,74(a)

Diabéticas (STZ)

1,38±0,08(b)

32,13±0,87(b)

5,32±0,98(b)

STZ + PostOx por Ozono

0,58±0,10(a)

9,36±0,01(a)

12,61±0,82(a)

(1) AR: Aaldosa Reductasa (mmol glucose min-1 mg protein-1); (2) FA: Fructolisina (contenido relativo de

fructolisina.mg protein-1 x 10-5); (3) Óxido Nítrico (nmol. mg protein-1).

Datos representan la Media ± ESM. Grupos con letras diferentes representan diferencias significativas

p < 0.05 entre grupos.

Availabl e onl ine at www.sciencedirect.com

SCIENCE @DI REC T "

ELSEVIER European Journa l of Pharmacology 523 (2005) 151- 161

www.elsev ier.com/locatelejphar

Therapeutic efficacy of ozone in patients with diabetic foot

Gregorio Mattinez-Sanchez a, Saied M. Al-Dalain a, Silvia Menendez b, Lamberto Re c,

Attilia Giuliani ct, Eduardo Candelario -Jalil a, Hector Alvarez e,

Jose Ignacio Fernandez-Montequin e, Olga Sonia Leon a,*

• Center of Studiesfor Research ond Biologicol Evaluation (C£1£8-/FAL), Universi(y of Havana, Havana 10400, Cuba

b Ozone Research Cente1; Cuba

c Labarat01:Y of Pharmacological Bioted111ology, Universi(y of Ancona, 60131 Ancona, lta(y

d Depm1ment of Chemislly and Medical Biochemi.rtly, Universi(y of Milan, Via Saldini, 50-20133 Milan, lta(y

• I nstitute of Angiology and Vascular Surg&:Y. Cuba

Received 21 Ju ly 2005; accepted I August 2005

Ava ilable on line 29 September 2005

ENSAYO CLÍNICO SOBRE LA EFICACIA DEL TRATAMIENTO CON O3/O2, EN

PACIENTES CON PIE DIABÉTICO NEUROINFECCIOSO.

Pacientes con diagnóstico: Pie Diabético Neuroinfeccioso, n=102, >15 años.

A (n=50)

Ozonoterapía

-Tto local: Oleozón, Bolsas de O3/O2

(50-60 mg.L-1, 1 hora, seguido por

OLEOZON)

-Sistémico O3/O2 rectal, 20 ttos (100 mL 50 mg.L-1)

B (n=52)

Terapia Convencional

-Tto local: antibiótico

-Sistémico: antibiótico

t=1

t=21d

-Concentraciones séricas de glucosa

-Planimetría Digital de las lesiones

-Indicadores clínicos generales

-Indicadores del estado redox

Glucosa Plasmática (mM)

22

20

18

16

14

12

10

8

6

4

2

0

Antes Después Antes Después Tiempo de colección de la muestra

Antibiótico PostOx/Ozono Grupos

Efectos de la Ozonoterapia sobre la Tríada Redox en pacientes

diabéticos

con complicaciones vasculares

Marcador Redox/Grupo Sujetos Sanos

(n = 60)

Antibiótico

(n=49)

PostOx/Ozono

(n=51)

SOD

(U· mL-1·min-1)

Tiempo 0 1,460,14a 0,970,16b 1,090,13b

20 días

- 1,580,16a 6,870,32c

CAT

(U· mL-1·min-1) Tiempo 0 161,5723,12a 2880250b 2112,86210c

20 días

-

2370247b 3101,33290b

Hidroperóxidos

Totales

(M)

Tiempo 0 103.7817.71a 139.1229.71b 145.4331.61b

20 días

- 139.1925.23b 106.3030.92c

OZONOTERAPIA

SOD

O2.- DAÑO DEL PÁNCREAS

LIBERACIÓN INSULINA

NORMALIZACIÓN DE LA GLUCOSA SANGUÍNEA

Glucosa Plasmática (mM)

22

20

18

16

14

12

10

8

6

4

2

0

Antibiotico (n=49) PostOx/Ozono (n=51)

´Relación CAT/SOD

4

3

&& **&&

2

1 &

0

t=0 t=20

Sujetos Sanos

Ozono

Antibiótico

Tiempo de Tto. (días)

D.O.·min-1

1600

1400

1200

1000

800

600

400

200

0

Contenido relativo de Fructolisina

&&

&**

Sujetos Sanos

Ozono

Antibiótico

t=0 t=20 Tiempo de Tto. (días)

Planimetría del área y perímetro de las lesiones al comienzo y al final del estudio

Parámetro Antes (XSD) Después (XSD)

Área (cm2)

Antibiótico n=50

54,840,39

40,720,35

Ozono n=52 57,970,52 23,310,36

pa 0,687 0,017

Perímetro (cm2)

Antibiótico n=50

21,490,11

17,340,14

Ozono n=52 18,490,14 12,620,13

pa 0,063 0,004

Evaluación clínica y tiempo de hospitalización para ambos grupos de tratamientos

Parámetro

Antibiótico (n=49) PostOx/Ozono

(n=51)

Evaluación

Clínica(1)

(n/%)

Curado 34 / 68 39 / 76

No Curado

16 / 32 12 / 23

N.S.

Tiempo de

Hospitalización

(días)(2)

X 34 26

Min.-Max. 7-83 6-58

DS

18 13

P=0,010(3) NS. No significativo. DS, Desviación Standard 1 Evaluación cualitativa realizada por el clínico; 2 Tiempo de hospitalización necesario para lograr una lesión aséptica, con buen

tejido de granulación, listo para recibir un injerto; 3 Test de Mc Nemar, para comparar entre grupos de tratamiento.

ENFERMEDADES “APARENTEMENTE” NO RELACIONADAS

RUTA PATOGÉNICA COMÚN DIABETES

ISQUEMIA ESTRÉS OXIDATIVO

CRÓNICO

Aterosclerosis

Neurodegenerativas

“La enfermedad cardiovascular tiene el mismo peso en la salud pública hoy que las epidemias de los siglos anteriores: el

50% de la población en los países desarrollados mueren de enfermedad

cardiovascular” (Pál Kertai)

Cada 2 min alguién sufre de un

ataque al corazón

(British Heart Foundation)

“El Infarto del miocardio, la muerte súbita y la angina de pecho inestable tienen una génesis común, la trombosis coronaria, que se desarrolla como resultado de una ruptura de una placa aterosclerótica. Mientras que en la placa aterosclerótica no se erosiona no se inducen la trombosis, la enfermedad coronaria puede ser una enfermedad clínicamente silente asociada con una mortalidad mínima. Cuando las placas comienzan a romperse y el material trombogénico entra en contacto con la sangre circulante, se crea una situación que pueden conducir al síndrome coronario agudo, asociada con una alta mortalidad”.

Enfermedad Arterial Coronaria(CAD)

• Factores de riesgo: Modificables

– Elevación de los lípidos sanguíneos

– Hipertensión

– Tabaquismo

– Obesidad

– Estilos de vida sedentario

Otros factores

– Diabetes mellitus

– Estrés/ patrones de conducta

La eficacia terapéutica del ozono está asociada a:

Bajas dosis de ozono puede inducir una reorganización de las vías bioquímicas, la activación del segundos mensajeros, que origina variados efectos biológicos.

Pre-condicionamiento oxidativo con Ozono: implican la síntesis de proteínas (sobre regulación de la expresión de las enzimas antioxidantes).

El Ozono modula las vías del óxido nítrico y otras rutas bioquímicas.

El Ozono preserva la función mitocondrial y el estado redox celular.

Leon et al., Mediat Inflamm 1998; 7:289-94.

Re et al., Arch Med Res 2008; 39:17-26

LIPOFUNDIN

Lipofundin MCT/LCT 20%

(Braun Melsungen AG, Alemania)

Jellinek et al., Atherosclerosis, 1982

Componentes Cantidad

Aceite de Soya 100 g

Triglicéridos de cadena media 100 g

Gicerina 25 g

Lecitina de huevo 12 g

-tocoferol 0,1 g

Oleato de sodio/agua p inyección Q.S. 1 L

kcal (aprox.) 1908

Milliosmosis/L (aprox.) 380

pH 6,5-8,5

International Journal of Vascular Med icine

Volume 2012, Article ID 898769, 7 pagfs

doi:I0.1155/2012/898769

Researclz Article

Lipofundin-Induced Hyperlipidemia Promotes Oxidative Stress

and Atherosclerotic Lesions in New Zealand White Rabbits

livan Delgado Roche, 1 Emilio Acosta Medina, 1 Angela Fraga Perez,1

1\briaA.B quer Viart,1 Yosdel Soto Lopez,2 Viviana Falcon Carna,3 Ana M. Vazquez Lopez,2

Hreguriu Martine .-Sanche:r., 4 and f.duardullerminde.-Sanchet.1

1 Cmttr cif'tud.:tsjvr R.twrrcli muf JJiol(lgkr.l miur.tior:s, l'li!;fllftllJ r.•r.l 1-ood Sde.wr C:ol.'t!gt, UJrl ·:!:rsifJ' cif J!m'!lJf·J,

PO.Ba 136t'\J,!A Cct,lllela,kl 1 .,HMr.na 13600.Cuivt L p!;rt:r:er;t of.4..•HU)J•Ir hr lnurhJ. Ur: tr of Mofec:r.'11r b::mmhJ•'o.• :ifll'i!; j16{)0j C!;b:l

=·fkp:.rimeroi i.fEh!;o;m, }Jim.··py,Center_t.rGmeicErosimfrinwu!Bir.•. le.,,fmolag)Hi.llWli.I1060a,Cul%'1

'MdiNcll, 60021JtijCOJ:•1. /1a/y

Atherosdero is represents a major came of death in the world. It is known that Lipofundin 20% induces atherosclerotic lesions

in rabbits, but its effects on seri!Cll lipids behaviour and redox environment have not been addressed In this study, 1\ew

Zealand cabbies were treated with 2 ml.'kg of lipofundin for 8 day . Then, rtdox biomarkers and serum lipids were determined

spectrophotometrical ly. On the other hand, the development of atheroscle rotic lesions was confirmed by eosinlhemato:q1in

staining and electron microsoopy. At the end oithe experiment, total chole terol, trig mides,chole teroi·LDL. and choleste rol­

HDL levels were igni ficamly increased. Also, a high index of biomolecules damage, a disruption of both enzymatic and

nonenzymatic defenses,and a reduction of nitric oxide were oi>served.Our data demonstrated thac lifofundin 2()% induces

hyperlipidemia, which promotes an oxidative stress tate. Due to the importance of these phenomena as risk factors ior

atherogenesis, we suggest that Lipofundin induces atherosclerosis mainly through these mechanisms.

HISTOPATOLOGIA

(Tinción Eosina/HematoxiIlina

Estudio histológico de aortas de conejo. Tinción Eosina/hematoxilina, morfología normal (A y C),

grupo tratado con Lipofundin (A y D) muestra engrosamiento de la intima, distorsión de la

arquitectura vascular, amplios espacios intercelulares probablemente ocupados por lípidos

(asteriscos) Amplificación 10x (A y B) y 40x (C y D). Barra de escala 20 µm.

(A) (B)

ESTUDIO

ULTRAESTRUCTURAL

Microscopía electrónica

N

EC EC

VSMC

FC LV (C) (D) EC

Fig. A y B grupo control, fig. B, C, D y E

Lipofundin (formación de lesiones

ateroscleróticas). EC: células endoteliales,

EL: lípidos extracelulares, VSMC: células del

musculo liso vascular, N: núcleo, FC: células

espumosas, LV: vacuolas lipídicas, CF: fibras

de colágeno, M: microfibroblastos. Escala1

µm (A, B, C, D), 500 nm (E, F).

N

N N CF

LV

(E) (F)

EL

N EL

LV

M

FC

INDUCCIÓN DE HIPERLIPIDEMIA POR LIPOFUNDIN EN

CONEJOS NZW

Delgado-Roche et al., Pharmacologyonline 2010

Delgado-Roche et al., Int J Vasc Med 2011

II LIPOFUNDIN-INDUCED OXIDATIVE STRESS

Control Lipofundin

Systemic redox biomarkers

MDA, pM 2.69 + 0.07

AOPP, pM of chlorarnines 11.50 + 0.73

PP, pM of MDA 4.63 + 0.18

CAT, U/L!min 351.13 + 19.03

SOD, U/mL/min 22.03 + 26.44

N02,pM 179.18 + 11.44

GSH, flM 309.03 + 26.44

Aortic redox biomarkers

6.24 ... 0.28*

16.22 + 0.47'"

9.13 ... 0.34*

477.50 + 30.46*

32.00 + 1.60"'

134.33 ... 5.09*

191.21 ... 8.26*

MDA,pM/mgPr 18.49 ... 2.04 27.42 + 2.55"'

AOPP,pM of chloramines/mgPr

12.45 ... 1.21 24.25 + 1.86"'

PP, pM of JvlDNmgPr

13.81 ... 1.83

25.26 4- 2.29"'

CAT, U/L!min/mgPr 1023.60 ... 26.89 1609.68 ... 84.37"'

SOD, U/mL/min/mgPr 62.37 ... 3.93 105.39 ... 9.82*

N02,pM/mgPr 95.29 ... 2.54 43.96 + 6.03"'

GSH, flM/mgPr 166.70 ... 12.82 71.59 ... 10.89*

Delgado-Roche et al, lnt J Vase Med 2011

Efecto antia-aterogénico del pre-

condicionamiento con ozono

Livan Delgado-Roche, Gregorio Martínez-Sánchez, Lamberto Re. Ozone Oxidative Preconditioning Prevents Atherosclerosis Development in New Zealand White Rabbits. JCVP- 12-335. 2012. Journal of Cardiovascular Pharmacology. In press.

Diseño experimental

Ozono (OZOMED, CIO, La Habana, Cuba) a partir de oxígeno médico. El Ozono era el 3% de la mezcla de gases (O3+O2). La concentración se midió

mediante un método espectrofotométrico a 254 nm.

Los animales se trataron con 20 mL O3/O2 concentración 50 µg/mL de O3 (1

mg) vía rectal en días alternos (15 seciones).

OZONO LIPOFUNDIN

1 30 38 Tiempo (días)

Efectos del ozono en la formación de la lesión aterosclerótica

A B

C D

Tinción Eosina/hematoxilina. Loa corchetes representan la amplitud de la íntima,

características de la lesión aterosclerótica. A: Lipofundin, B: O2 + Lipofundin, C: control,

y D: O3 + Lipofundin®. Ampliación 20X, escala: 50 µm.

Análisis morfométrico

(Tinción Verhoeff-Van Giesson´s)

Grupos Relación Intima/media

(IMR)

Control 0.015 ± 0.004

O2 + Lipofundin 1.750 ± 0.341

O2 + Lipofundin 0.080 ± 0.011*

Kruskal-Wallis and Dunns * p<0,001, respecto a grupo O2

Asteriscos representas diferencias significativas p<0.001. T-student´s test

Efectos del O3 en el daño a bio moléculas

** **

**

Asteriscos representan diferencias estadísticas p<0.001. T-student´s test

Efectos del O3 en el sistema antioxidante y en

indicadores de funcionamiento endotelial

** **

** **

CONCLUSIONES

o El Pre-condicionamiento oxidativo con ozono reduce la

formación de lesiones ateroscleróticas en el modelo de aterosclerosis inducido con lipofundin.

o El Ozono no tuvo efectos sobre el perfil de lípidos séricos

en las condiciones experimentales.

o El tratamiento con una dosis baja de ozono conserva el

estado redox sistémica.

o Los resultados refuerzan las propiedades farmacológicas del

ozono y los criterios para considerarlo como una terapia integradora en el tratamiento de las enfermedades cardiovasculares.

Objetivo

Este estudio se dirigió a investigar la eficacia

terapéutica del ozono en pacientes con CAD,

tratados con terapia antitrombótica (AT): Aspirina®

y policosanol.

Diseño

Se realizó

aleatorizado

grupos:

un

con

estudio clínico controlado

53 pacientes divididos en dos

1) (n=27) AT (Aspirina 125 mg/ Polic. 5 mg)

2) (n=26) AT + O3rectal. (8 mg, 200 mL- 40 µg/mL)

3) Grupo paralelo (n=50) referencia

La eficacia de los tratamientos se evaluó

comparando índices hemostáticas y marcadores

bioquímicos del estrés oxidativo en ambos

grupos después de 20 días de tratamiento.

Datos base de los pacientes

AT AT + O3

Índice hemostaticos, durante el estudio

AT

End

AT + O3

End

*

** * Comparado con el incio

* Comparado con grupo AT

Start Start

AT AT + O3

Start End Start End

Biomarcadores del estado redox

Normal Reference

AT AT + O3 START

AT AT + O3 END

Biomarkers of oxidative damage and antioxidant-pro/oxidant balance

Normal Reference

AT AT + O3 START

AT AT + O3 END

Biomarkers of oxidative damage and antioxidant-pro/oxidant balance

Normal Reference

AT AT + O3 START

AT AT + O3 END

La justificación para el uso de 2 o + tipos de agentes antiplaquetarios

Las plaquetas pueden ser activadas por diferentes vías

Aspirina® redujo significativamente la agregación plaquetaria inducida

por colágeno (61,4%) y epinefrina (21,9%) pero no la inducida por

ADP.

Aspirina® + Policosanol significativamente inhibe la agregación

inducida por todos los agonistas, sin embargo sólo modifica algunos

marcadores del sistema de estrés oxidativo.

Aspirina® + Policosanol + O3 Significativamente inhibida agregación

inducida por todos los agonistas y modifica los marcadores del

sistema oxidativo.

Conclusiones

• El tratamiento con ozono significativamente (p < 0.001) reduce el tiempo de protrombina en comparación con el grupo AT, sin modificar el tiempo de sangrado.

• La combinación AT + O3 mejora el estado antioxidante de los pacientes reduciendo los biomarcadores de la oxidación de proteínas y lípidos

Conclusiones

• Combinación AT + O3 mejora el estado antioxidante total y modula el nivel de SOD y CAT con una reducción de 57% y 32% en las actividades SOD y CAT respectivamente, moviendo el ambiente redox a una condición de baja producción de O2•- con un aumento en la desintoxicación de H2O2.

• No se observaron efectos secundarios.

• Estos resultados muestran que el tratamiento de ozono médico podría ser una terapia complementaria en el tratamiento de la CAD y sus complicaciones.

CONCLUSIONES Generales

EL OZONO MÉDICO ES UN BIOMODULADOR. ES CAPAZ DE REGULAR LOS

PROCESOS DE OXIDACIÓN/REDUCCIÓN, LO QUE EXPLICA SU EFICACIA

TERAPÉUTICA EN ENFERMEDADES VASCULARES, ENDOCRINAS, HEPÁTICAS, DEL

SISTEMA NERVIOSO CENTRAL, INMUNE Y OTRAS.

LA OZONOTERAPIA REGULA LA ACTIVIDAD DE LA SOD, UNA IMPORTANTE ENZIMA

DEL SISTEMA DE DEFENSA ANTIOXIDANTE, CONTRIBUYENDO A LA PROTECCIÓN DE

LAS CÉLULAS , LA LIBERACIÓN DE INSULINA, EL REESTABLECIMIENTO DE LOS

NIVELES DE GLUCOSA Y PREVINIENE LAS COMPLICACIONES MICRO Y

MACROANGIOPÁTICAS DEL DIABÉTICO.

EL TRATAMIENTO CON OZONO REGULA LAS CONCENTRACIONES DE ÓXIDO

NÍTRICO, LO QUE CONTRIBUYE A UNA ADECUADA VASODILATACIÓN, MEJORA EL

FLUJO SANGUÍNEO Y HACE DEL OZONO UNA TERAPIA ESPECIALMENTE ÚTIL EN LA

HIPERTENSIÓN, ATEROESCLEROSIS Y ANGINAS.

El ozono es fuente de vida

Evidencias clínicas, preclínicas, y toxicológicas

Gregorio Martínez Sánchez, Pharm.D, Ph.D.

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