UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

Facultad de Estudios Superiores CuautitlánSección de Tecnología Farmacéutica

Químico Farmacéutico Biólogo

Laboratorio de Desarrollo Analítico

“Desarrollo de un método analítico para la determinación de contenido químico de

difenhidramina en jarabe”

Equipo 3Acuña Garduño JosueEuropa Rebollo Tania

Franco Gonzalez Jose AntonioLópez Hernández JaimeVega Barcelata Edgar

Viernes 30 de Noviembre de 2012

Desarrollar un método analítico espectrofotométrico mediante la aplicación de fundamentos físicos, químicos y fisicoquímicos que permita cuantificar de manera precisa la cantidad de difenhidramina en una muestra farmacéutica líquida (Jarabe).

Objetivo General

OBJETIVOS PARTICULARES

Durante el desarrollo del método analítico, proponer procedimientos para obtener aspectos importantes en la validación del método, teniendo como objetivo principal, la precisión de este.

Al obtener la precisión, desarrollar procedimientos para la obtención de otros aspectos importantes en la validación de métodos analíticos como es: exactitud, linealidad y reproducibilidad.

Para lo anterior, preparar un placebo cargado cuya composición resulte lo más parecido a la muestra farmacéutica estudiada.

Evaluar el contenido químico de difenhidramina en muestras farmacéuticas específicas de jarabe de la marca BRUDIFEN, de laboratorios Bruluart.

• Se desconoce la cantidad de difenhidramina en una muestra farmacéutica (jarabe)

Problema analítico

• Conjunto de cambios significativos que nos indican la presencia del analito (absorbancia)

Señal analítica

• La interpretacion de las señales obtenidas

Respuesta

analítica Resultado analítico

• mg de DFH en 100mL de jarabe BRUDIFEN

Marco teórico

Difenhidramina

Peso molecular: 255.39

Pka: 8.9

La difenhidramina es una amina terciaria con un pKa de 9.0 (de Roos et al.,1970), bloquea el efecto de la histamina a nivel del receptor transmembranal H1

log Po/w: 3.16

log K:1.22

Solubilidad: Fácilmente soluble en metanol, soluble en alcohol; muy ligeramente soluble en agua y ácido acético glacial; casi insoluble en éter dietílico.

250 nm

0 2 4 6 8 10 12 14 160

20

40

60

80

100

120

BHB

pH

%

Formulación BRUDIFENCada 100 ml de JARABE contienen:Clorhidrato de difenhidramina                0.25 gVehículo, c.b.p. 100 ml.

Formulación Benadryl

Procedimiento para la separación de la muestra.

3mL

ESPECIFICIDAD DEL MÉTODO

Selectividad (o especificidad) = aptitud de un método para determinar exacta y específicamente el analito de interés en presencia de otros componentes en la matriz de la muestra bajo las condiciones establecidas del Especificidad = aptitud de un método para medir solamente lo que se busca medir Es la aptitud de un método para valorar inequívocamente el analito en presencia de componentes que se sospecha que puedan estar presentes (impurezas, degradantes, matriz, etc.) (ICH Q2A, CPMP/ICH/381/95)

190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 3100

0.5

1

1.5

2

2.5

Long de onda 220 (nm)

 Espectro de absorción de la DFH a una concentración de 46 mcg/mL en HCL 0.1 N

190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 3100

0.5

1

1.5

2

2.5

Espectro de absorción de la muestra extraída de concentración teórica 46 mcg/mL en HCl 0.1 N

Espectros de absorción de un estándar de DFH de concentración 46 mcg/mL en HCl 0.1 N (en azul), y una muestra proveniente de la extracción, con la misma concentración teórica.

DETERMINACIÓN DE LA EFICIENCIA DE LA EXTRACCIÓN.

Para determinar la eficiencia de la extracción, se preparó un placebo cargado con una cantidad conocida de DFH, en base a la reportada en el marbete. Las proporciones de excipientes y principio activo se muestran en la siguiente tabla:

DFH P. Activo 625 mg

Glicerina Cosolvente 7.5 mL

Popilenglicol Cosolvente 7.5 mL

Sacarosa Edulcorante 120

Metil Parabeno Conservador 0.25 g

Propil Parabeno Conservador 0.125

  Colorante 0.25mL

  Saborizante  

Agua destilada Solvente c.s.p 250 mL

Se prepara un estándar de concentración: 46.5 mcg/mL de DFH.

Resultados obtenidos de la extracción de difenhidramina a placebo cargado.

Solución

Absorbancia

Conc. (mcg/mL)

mg extraídos

mg teóricos

% extraído

1 1.4724 41.34206872 34.4517239 38.45 89.6013626

2 1.4547 40.84508786 34.0375732 38.45 88.5242476

3 1.4674 41.20167864 34.3347322 38.45 89.2970929

4 1.4653 41.14271481 34.2855957 38.45 89.1692995

5 1.4645 41.1202524 34.266877 38.45 89.1206164

6 1.5206 42.69542902 35.5795242 38.45 92.5345232

Promedio 89.70%Std 46.5 mcg/mL 1.6561 Desvest 0.014296843

C.V1.59261557

2Se puede observar, que la extracción tiene una eficiencia del 89.70%, la cual será considerada en las extracciones a la muestra.

VALIDACION DEL METODO ANALITICO

La validación de un método analítico es un proceso de evaluación sistemático para demostrar que el método cumple con los requisitos necesarios para el uso que se le va a dar.

¿QUÉ SE NECESITA PARA UNA VALIDACION?

•instrumentos calificados y calibrados

*Métodos documentados

*Estándares de Referencia confiables

*buenas técnicas de muestreo

* Analistas calificados

Precisión

Es el grado de concordancia entre resultados analíticos individuales, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra homogénea de producto o de una referencia.

Un analista debe preparar 6 soluciones a la concentración del analito que represente la concentración de referencia utilizada. Preparadas por dilución o por pesadas independientes.

Resultados

Solución Absorbancia1 1.4724

2 1.4547

3 1.4674

4 1.4653

5 1.4645

6 1.5206

n=6Promedio= 1.47415Desvest= 0.02347754 % C.V= 1.59261557

Criterios de aceptación: El % C.V no debe exceder del 2%

OPTIMIZACIÓN DE LA EXTRACCIÓN.

A pesar de haber obtenido la precisión del método satisfactoriamente, la eficiencia de la extracción era del 89.70%, por lo cual se efectuaron modificaciones a la metodología de la extracción para evitar la pérdida del principio activo durante la misma. Entre las cuales se incluyeron.

• Uso de tapones de plástico herméticos.• Cambio de llaves y empaques en embudos.• Aumentar el tiempo de agitación de 1 a 2.5 minutos para

favorecer las reacciones ácido base, y la separación de fases.• Empleo de perlas de ebullición durante el desecado (se evita que

haya salpicaduras fuera del vaso)

NOTA: SE REALIZÓ EN PLACEBO CARGADO.

Se preparó un std de 43mcg/mL

EXACTITUD

CUALIDAD DE UN MÉTODO PARA PROPORCIONAR RESULTADOS ANALÍTICOS ACORDES AL CONTENIDO REAL DE LA MUESTRA.

DETERMINACIÓN: A)SE CONOCEN LOS COMPONENTES DE LA MUESTRA Y ES POSIBLE PREPARAR UN PLACEBO ANALÍTICO.

B)NO SE CONOCEN LOS COMPONENTES DE LA MUESTRA. SE DEBEN PREPARAR 6 MUESTRAS ADICIONADAS.

Placebo analítico

adicionado

Cantidad adicionada (g)

Cantidad recuperada (g)

% recobro (y) (y)2

1

38.54 37.56 97.44438199 9495.40758

2

38.53 37.58 97.52367685 9510.86755

3

38.61 37.64 97.49617009 9505.50318

4

38.54 37.75 97.95104638 9594.40749

5

38.70 37.72 97.47370213 9501.12261

6

38.74 37.55 96.92134306 9393.74674

Prom recobro 97.46838675Desvesta 0.327612731

C.V 0.336122041suma 584.8103205

suma y2 57001.055n 6

IC 97.81225116

IC- 97.12452235

El intervalo de confianza incluye al 97%.

El IC (u) debe incluir el 100% o que el promedio aritmético del porcentaje de recobro se incluya en el intervalo:

97-103% si el método es espectrofotométrico

El CV del % de recobro:

No mayor a 3% si es químico o espectrofotométrico.

LINEALIDAD DEL SISTEMA.

* Es la cualidad que tiene el método para cuantificar confiablemente al analito sin importar la proporción en la que se encuentre con respecto al resto de los componentes de la mezcla.

* Se debe aleatorizar su preparación y su lectura.

* Se preparan a partir de un stock (una sola pesada) y se realiza el mismo numero de diluciones para los 5 niveles de concentración.

* Criterios de aceptacion:

r2≥ 0.98 b= 0 IC (m) no debe incluir el cero

Linealidad del sistema:

Se prepararon 5 niveles de concentración por triplicado de la solución de referencia, a partir de un stock. La concentración central representa al 100% en la muestra procesada para su medición.

mcg/ml (X) abs (y) x2 y2 xy x/Y

16 0.5566 256 0.30980356 8.9056 28.745957616 0.5294 256 0.28026436 8.4704 30.222893816 0.5227 256 0.27321529 8.3632 30.610292732 1.0469 1024 1.09599961 33.5008 30.566434232 1.0337 1024 1.06853569 33.0784 30.956757332 1.042 1024 1.085764 33.344 30.710172748 1.5502 2304 2.40312004 74.4096 30.963746648 1.554 2304 2.414916 74.592 30.888030948 1.5336 2304 2.35192896 73.6128 31.298904564 2.0218 4096 4.08767524 129.3952 31.654960964 2.0248 4096 4.09981504 129.5872 31.608060164 2.0458 4096 4.18529764 130.9312 31.283605480 2.4314 6400 5.91170596 194.512 32.902854380 2.4312 6400 5.91073344 194.496 32.90556180 2.421 6400 5.861241 193.68 33.0441966

suma 22.7451 42240 41.3400158 1320.8784 468.362429desv std 1.12661595cv 3.60815432promedio 31.2241619r 0.99885498r2 0.99771127

10 20 30 40 50 60 70 80 900

0.5

1

1.5

2

2.5

3

f(x) = 0.0298325 x + 0.0843800000000001R² = 0.997711270518049

Sum Y2-(b1Sum xy) 4.35542063b0*SumY 2.7066669

4.147215484

sy/x2.03647133

1(SUM X/N) 2 2304

1/SUM x22.36742E-

05

Sb14.82119E-

05

IC +0.02510413

8

IC-0.02789586

2

La r2 resultó mayor a .98, sin embargo la ordenada al origen no fue de 0, y el intervalo de confianza incluye al cero.

CUANTIFICACIÓN EN JARABE COMERCIAL

. Para la cuantificación, se consideró que la eficiencia de la extracción es de 97.46%..

solucion absorbancia Concentración (mcg/mL)

mg reales

mL mta

mg por cada

100mL%

1 1.6046 44.9742 38.455215.662

6 245.5231 98.21

2 1.5686 43.9651 37.592515.497

0 242.5787 97.03

3 1.6046 44.9742 38.455215.646

4 245.7769 98.31

4 1.6039 44.9545 38.438515.623

3 246.0329 98.41

5 1.6043 44.9658 38.448015.632

5 245.9488 98.38

6 1.5476 43.3766 37.089215.639

5 237.1512 94.86

std 1.6412 46

promedio 97.53

243.83 DFH mg por cada 100 mL de jarabe97.53% contenido químico.

CONCLUSIONES

*Se presentaron buenos porcentajes de precisión (DFH 1.59%), y exactitud (96.74%)

* A pesar de haber obtenido la precisión del método satisfactoriamente, la eficiencia de la extracción era del 89.70%, por lo cual se efectuaron modificaciones a la metodología de la extracción para evitar la pérdida del principio activo durante la misma.

* En cuanto a la linealidad del sistema la r2 resultó mayor a .98, sin embargo la ordenada al origen no fue de 0, y el intervalo de confianza incluye al cero.

* Se realizó una cuantificación de DFH en una muestra farmaceutica comercial, tomando en cuenta que para la cuantificación, se consideró que la eficiencia de la extracción es de 97.46% dando como resultado un 97.53 % ó 243.83 mg/dL lo cual está dentro de las especificaciones marcadas para este principio activo en jarabes.

El método propuesto para la determinación de DFH

en jarabe demostró ser adecuado ya que presentan una

precisión y exactitud apropiadas, por lo que podria

ser adecuado para el análisis de DFH en proyectos posteriores.

BIBLIOGRAFÍA:

-FEUM Décima edición, México (2011) Vol. 1 y vol. 2.-Colegio nacional de quimicos farmaceuticos biologos mexico a.c. guia de validacion de metodos analiticos.-http://www.drugbank.ca/drugs/DB01075

-USP 35 NF 30 Formulario Nacional Vol. 2 (2012)