PRÁCTICA 1- BACTERIOLOGÍA

7/23/2019 PRCTICA 1- BACTERIOLOGA

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PRCTICA 1: ESTAFILOCO YESTREPTOCOCO

I. STAFILOCOCCUS AUREUS

Son cocos Gram positivos, con un dimetro de 0.5 a 1.5 m, agrupados como clulasnicas, en pares, ttradas, cadenas cortas o formando racimos de uvas. Son bacteriasno mviles, no esporuladas, no poseen cpsula, aunue e!isten algunas cepas uedesarrollan una cpsula de limo, son anaerobias facultativas. "a ma#or$a de losesta%lococos producen catalasa, &'asa, coagulasa # son beta()emol$ticas.

*n los medios de cultivo tradicionales la ma#or$a de las especies crecen despus deincubarse durante 1+(- )oras, formando colonias de 0.5(1.5 mm de dimetro. "ascolonias de S. aureus se observan lisas, elevadas, brillantes # de bordes enteros,presentan consistencia cremosa # pigmentacin ue va del amarillo a dorado debido a laproduccin de carotenoides.

PROCEDIMIENTOSe reali el cultivo de la cepa de Stap)#lococcus aureus en una placa /etri conagar anitol Salado. *l cultivo se reali por agotamientoambin se cultiv en una placa con agar &'asa, en este caso el cultivo sereali por estr$a simple.

- AGAR MANITOL SALADO

edio de cultivo selectivo, por la alta concentracin de sal. *le!tracto decarne, la peptona de carne # la tripte$na, constitu#en la fuente de carbono, nitrgeno,vitaminas # minerales ue promueven el desarrollo microbiano. *l manitol es el)idrato de carbono fermentable. *l cloruro de sodio 2ue se encuentra en altaconcentracin3 es el agente selectivo ue in)ibe el desarrollo de la 4oraacompaante, el ro6o fenol es el indicador de p7 # el agar es el agente solidi%cante.

- AGAR DNASA

edio de cultivo diferencial. 8tilia la tripte$na como fuente de nitrgeno,

aminocidos, # aporte de nutrientes necesarios para el adecuado desarrollobacteriano. *l cido deso!irribonucleico 29&'3, se encuentra en grado altamentepolimeriado, # es el sustrato de la enima deso!irribonucleasa 2&'9sa3, la cual lo)idrolia. *l cloruro de sodio mantiene el balance osmtico # el agar es el agentesolidi%cante.


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RESULTADOS

*n el medio de cultivo MANITOL SALADO.Se observ el crecimiento adecuado deStap)#lococcus aureus: se observ adems lacoloracin amarilla del medio de cultivo, loue indica ue esta bacteria ferment el manitol,lo ue provoc la acidi%cacin del medio, por

lo ue el indicador ro6o fenol vir a amarillo.9dems en base a la fermentacin de manitol sedetermina ue son esta%lococos coagulasapositiva: siendo por lo tanto bacterias patgenas.

*n el medio de cultivo AGAR DNASA. 9laadir gotas de 7;l 1 ' se observ unaona de transparencia alrededor de lascolonias. "o ue signi%ca ue esta bacteriaproduce la enima &'9sa . *l cido

deso!irribonucleico )idroliado presentatransparencia, mientras ue el cidodeso!irribonucleico polimeriado, precipita #torna opacidad al medio de cultivo.

II. STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE

*s una bacteria Gram positiva de 1,(1,+


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PROCEDIMIENTOSe cultiv una muestra obtenida por )isopado far$ngeo, en 9gar Sangre # 9gar9ida.

( AGAR SANGREedio de cultivo enriuecido ue permite el cultiv de organismos fastidiosos# e!igentes. *l p7 ligeramente cido favorece reacciones )emol$ticas precisas./osee todos los componentes del comple6o =. ambin es un medio

diferencial, por las reacciones )emol$ticas ue se dan, ue permitendiferenciar entre los organismos alfa )emol$ticos de los betas )emol$ticos.

- AGAR AZIDA

edio de cultivo selectivo, en donde la pluripeptona # el e!tracto de carne aportannutrientes para el desarrollo microbiano. *l cloruro de sodio mantiene el balanceosmtico # el agar es el agente solidi%cante. 9 la concentracin empleada, la aidade sodio e6erce un efecto bacteriosttico solamente sobre los microorganismos Gramnegativos, otorgando selectividad # favoreciendo el desarrollo de los Gram positivos.

RESULTADOS

- Se observ en el medio de cultivo AGAR SANGREel crecimiento ptimo de colonias grandes

mucosas. 'o se observ la )emolisis alfa,porue lo ue se determin ue la personade la cual se obtuvo la muestra, nopresentaba infeccin porStreptococcus pneumoniae.

- Se observ en el medio de cultivo AGARAZIDA, el crecimiento de colonias mucosas.

Se observ alrededor de unas colonias un )alo de color verdoso oscuro. "oue signi%ca ue se produ6o la )emolisis alfa, propia del Streptococcuspneumoniae. *ntonces se sospec)a ue la persona cursa con una infeccinpor esta bacteria. /ara comprobar la presencia de la bacteria se debe realiarla inoculacin de 0.5 ml de esta cepa aislada en CALDO BILIADO. Si despusde 15 minutos se observa la lisis de colonias de neumococos, se con%rma ueson colonias de Streptococcus pneumoniae


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PRCTICA 2: SIEMBRA DE MUESTRASBIOLGICAS PARA EL AISLAMIENTO DE

NEISSERIA"as neisserias caracter$sticas son diplococos gramnegativos inmviles de casi 0.+ m de

dimetro 2% gs. 0(1 # 0(3. "os cocos individuales tienen forma de rin: cuando losmicroorganismos estn en pares, los lados planos o cncavos estn ad#acentes.;ocobacilo Gram 'egativo. 'o forma esporas, no presenta capsula: reductor de nitratos,sin motilidad. "os gonococos o!idan slo glucosa # tienen ant$genos diferentes a los deotras neisserias. /or lo general producen colonias ms peueas ue las demsneisserias."os gonococos aislados de muestras cl$nicas o conservadas mediante subcultivo selectivotienen peueas colonias t$picas ue contienen bacterias con pilosidades. *n el subcultivono selectivo tambin se forman colonias ms grandes ue contienen gonococos sinpilosidades.Sus colonias son conve!as, brillantes mucoides, transparentes, no pigmentadas, no

)emol$ticas.

PROCEDIMIENTO

Se reali la toma de muestra de secrecin uretral. Se coloc el )isopo con la muestra enel medio de transporte Stuart. 8na ve en el laboratorio se reali la inoculacin de lamuestra en placas /etri con 9gar )a#er artin # 9gar Sangre.

- MEDIO STUART

edio utiliado para el transporte # conservacinde microorganismos patgenos. 'o posee una fuentede nitrgeno lo ue impideconsiderablemente la multiplicacin de grmenes. *lglicerofosfato sdico asegura unasupervivencia su%cientemente larga de losmicroorganismos. *ste medio goa de anaerobiosis dada por el ioglicolatosdico: la anaerobiosis es controlada por el indicador redo! 9ul de metileno.

- AGAR THAYER MARTIN

edio de cultivo selectivo. *l medio de )a#er(artin permite el correctoaislamiento # recuperacin de las neisserias patgenas dentro de las - ),con una ausencia casi total de contaminantes. *l medio de cultivo se preparaa partir del 9gar =ase G;2pluripeptona, almidn # fosfatos3, con el agregado


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de )emoglobina, un suplemento de enriuecimiento 2=ritale!3 # una meclaantimicrobiana 2>;'? >ancomicina, colistina, nistatina # trimetoprima3

RESULTADOS

- *n el agar a!gr"se observ el crecimiento ptimo de las colonias de'eisseria gonorr)oeae. ;olonias peueas conve!as, transparentes. 'o seobserva )emolisis.

- *n el agar T#a$"r Mar%&!se observ elcrecimiento ptimo de las colonias de 'eisseriagonorr)oeae. ;olonias peueasmucoides conve!as. "o ue signi%ca ue el

paciente presenta infeccin por esta bacteria.

PRCTICA ': ESTUDIO DEL G(NEROBRUCELLAE

Son cocobacilos gramnegativos pero a menudo se tien con irregularidad # son aerobios,no mviles # no formadores de esporas.

"as brucelas estn adaptadas a un )bitat intracelular # sus necesidades nutricionalesson comple6as. 9lgunas cepas se )an cultivado en medios de%nidos ue contienenaminocidos, vitaminas, sales # glucosa. "as muestras recientes de fuentes animales o)umanas suelen inocularse en agar de tripticasa(so#a # medios para )emocultivo.=.abortus necesita ;@ al 5 a 10Apara multiplicarse, en tanto ue otras especies semultiplican en el aire.

"as brucelas utilian )idratos de carbono pero no producen cido ni gas en cantidadessu%cientes para la clasi%cacin. ;uatro especies ue infectan al ser )umano son catalasa

# o!idasa positivas. *l sulfuro de )idrgeno es producido por muc)as cepas # los nitratosse reducen a nitritos. "as brucelas son moderadamente sensibles al calor # a la acide.Son destruidas en la lec)e mediante pasteuriacin.


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"as colonias son peueas, conve!as # lisas aparecen en medios enriuecidos en un lapsode dos a cinco d$as.

PROCEDIMIENTO

Se reali el )emocultivo, en donde se tom una muestra de sangre de un paciente consospec)a en fase aguda de la enfermedad.

"a sangre se inocul en la fase liuida del medio Bui ;astaeda: se inclin suavemente o C veces, se llev a incubar a CDE;. 9 intervalos de -+ )oras se inclin el frasco para uela fase l$uida inocule a la fase slida 2ransferencia3. Si las colonias aparecen despus delas F )oras 2despus de la segunda transferencia3 se sospec)a ue son colonias de=rucela.

/osteriormente se cultiv las colonias sospec)osas en agar =rucella spp, 9gar fucsina #9gar tionina.

( MEDIO DE RUIZ CASTA)EDA

edio utiliado para realiar el )emocultivo. iene dos fases?Hase liuida? ;ompuesto por ;aldo riptosa: /SS 2anticoagulante, in)ibiefagocitosis3 : "iste$na, ue permite viabilidad: de!trosa # sulfato de magnesio.Hase slida? 9gar triptosa

- AGAR BRUCELLA SPPedio selectivo, usado para el aislamiento # cultivo de =rucela. ;ontienebisulfato de sodio, ue favorece el desarrollo microbiano. Se le aadenmedicamentos como la bacitracina, polimi!ina # ciclo)e!imida, ue dan laselectividad al medio.

- AGAR FUCSINA-TIONINA9gares usados para la tipi%cacin de especies de =rucella, de acuerdo alcrecimiento o in)ibicin, se logran diferenciar los tres tipos ms comunes de=rucella.

F*+&!a T&,!&!a

B. M"&%"!& I I

B. A,r%* I (

B. S*& ( I

RESULTADOS

( *n el cultivo en el medio =rucella spp se observ el adecuado crecimiento decolonias peueas # lisas de =rucela.

( *n el cultivo en los medios Hucsina( ionina, se observ el adecuadocrecimiento en ambas placas. "o ue nos indica ue estamos frente a colonias

de =rucella melitensis.


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PRCTICA /: AISLAMIENTO DE ENTERO-

PATGENOS COPROCULTI0OPROCEDIMIENTO

1. 8na ve obtenida una muestra se inocula la muestra en el medio de transporte;9BJ ="9KB.

M"&, Car$ Ba&r*l medio utiliado para el transporte ;ar# # =lair se utilia para el transporte de

muestras fecales. iene un ba6o contenido de nutrientes, un ba6o potencial deo!idoreduccin # un alto p7. *l medio de transporte ;ar#(=lair, es semislido debidoa la ba6a concentracin de agar. iene un m$nimo aporte de nutrientes ue permitela recuperacin de los microorganismos sin ue )a#a replicacin. *l tioglicolato desodio se inclu#e para proveer un ba6o potencial redo!: # el p7 relativamente altominimia la destruccin bacteriana por acidi%cacin.

. 8na ve en laboratorio se inocula la muestra por estria por agotamiento en agarac ;onLe#.

Agar Ma+ C,!"$*ste medio se utilia para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcildesarrollo, aerobios # anaerobios facultativos. /ermite diferenciar bacterias ueutilian o no, lactosa en muestras cl$nicas, de agua # alimentos. odas las especiesde la familia *nterobacteriaceae se desarrollan en el mismo.

C. 8na ve obtenido el aislamiento en 9gar ac ;onLe#, se realian los siguientespasos.

( Si e!iste sospec)a de Salmonella(S)iguella se obtiene una muestra # sesiembra por puntura en el Ca, S""!&%,.

Ca, ""!&%,edio ue permite el enriuecimiento selectivo de Salmonella spp. a partir demuestras cl$nicas, especialmente )eces # orinas. *n el medio de cultivo, la peptonaaporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la lactosa es


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el )idrato de carbono fermentable, el selenito de sodio in)ibe la 4ora Gram positiva #la ma#or$a de la 4ora entrica e!cepto Salmonella spp. durante las primeras +(1)oras de incubacin.

( Se siembran en 9gar SK # 9gar "K9, las muestras, con sospec)a de *sc)eric)ia ;oli,Salmonella, S)iguella # Mlebsiella: para su estudio biou$mico.

AGAR LIA*n el medio de cultivo, la peptona # el e!tracto de levadura aportan los nutrientespara el desarrollo bacteriano. "a glucosa es el )idrato de carbono fermentable # lalisina es el sustrato utiliado para detectar la presencia de las enimas decarbo!ilasa# deaminasa. *l citrato de )ierro # amonio # el tiosulfato de sodio son los indicadoresde la produccin de cido sulf)$drico. *l purpura de bromocresol, es el indicador dep7 2su color es amarillo a p7 igual o menor a 5. # violeta a p7 igual o ma#or a .+3 #el agar es el agente solidi%cante.

-. "as muestras obtenidas en el caldo Selenito, se sembraran en el 9gar Salmonella(

s)iguella: para despus realiar su estudio biou$mico en 9gar SK # "K9.

Agar Sa3,!"a S#&g*"a*s un medio de cultivo selectivo # diferencial. "a selectividad, est dada por la salesbiliares # el verde brillante, ue in)iben el desarrollo de bacterias Gram positivas,de la ma#or$a de los coliformes # el desarrollo invasor del /roteus spp.*s diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, # a la formacin de cidosulf)$drico a partir del tiosulfato de sodio.

RESULTADOS

*&K@ &* ;8"K>@ 9; ;@'M*J

*n el medio de cultivo ac ;onLe#, se observ la coloracin ro6a intensa, ue nos indica lapresencia de *sc)eric)ia ;oli. "a coloracin ro6a signi%ca ue esta bacteria es lactosapositiva, #a ue al degradar la lactosa, acidi%car el medio, ue ser neutraliado por elindicador ro6o neutro. ambin se observaron onas rosadas, ue nos indica la presenciade Mlebsiella, ue tambin es una lactosa positiva.

ambien se observaron onas transparentes, lo ue indica la presencia de S)iguella, uees una bacteria lactosa negativa, por lo ue no )a# vira6e de color. 9dems se observarononas transparentes con puntos negros , lo ue indica la presencia de Salmonella, #a ueesta bacteria es lactosa negativa # tambin produce 7S.

9G9B S9"@'*""9 S7KG8*""9

*n este medio de cultivo se observ el crecimiento de colonias transparentes, ue nosindican la presencia de S)iguella # el crecimiento de colonias con puntos negros, ue nosindica la presencia de Salmonella.

*S8&K@ =K@NOKK;@


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( *sc)eric)ia coli?

*n el agar SK, se observa el tubo completamenteamarillo, debido a la degradacin de los tres aucares 2lactosa,sacarosa # glucosa3, tambin se observa la presencia de gas.*n el agar "K9, se observa el tubo completamentevioleta, debido a la descarbo!ilacin de lisina

( Mlebsiella

*n el agar SK, se observa el tubo completamenteamarillo, debido a la degradacin de los tres aucares 2lactosa,sacarosa # glucosa3, tambin se observa el pico ro6o, debido ala degradacin de peptona.*n el agar "K9, se observa el tubo completamente

violeta, debido a la descarbo!ilacin de lisina.

( S)iguella

*n el agar SK se observa el pico alcalino ro6o, por ladegradacin de la peptona, # el fondo amarillo debido a lafermentacin de la glucosa.*n el agar "K9 se observa coloracin ro6a, con el fondo cidoamarillo por la fermentacin de glucos. *l "K9 es negativo,debido a ue no descarbo!ila ni desamina.

( Salmonella

*n el agar SK se observa el pico alcalino ro6o, por la

degradacin de la peptona, # el fondo amarillo debido a lafermentacin de la glucosa. Se observa adems lacoloracin negra, ue evidencia la produccin de 7S*n el agar "K9 se observa la descarbo!ilacin de lisina, porlo ue la coloracin es violeta, adems el color negroevidencia la produccin de 7S


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PRCTICA 4: ESTUDIO DE LOS G(NEROSHAEMOPHILUS Y BORDETELLAI. HAEMOPHILUS

*ste es un grupo de peueas bacterias polimorfas gramnegativas ue necesitanmedios enriuecidos, ue por lo general contienen sangre o sus derivados, parasu aislamiento. *n las muestras de infecciones agudas, los microorganismos sonbacilos cocoides cortos 21.5 m3, ue a veces se encuentran en pares o cadenas

cortas. *n los cultivos, la morfolog$a depende de la edad # del medio. 9 las a +) en un medio enriuecido, predominan las formas cocobacilares peueas. starde )a# bacilos ms largos, bacterias ue e!perimentan lisis # muc)asvariantes polimorfas. "os microorganismos en cultivos 6venes 2 a 1+ )3 en unmedio enriuecido tienen una cpsula de%nida. "a cpsula es el ant$geno ue seutilia para la Ptipi%cacinQ de 7. in4uenae.


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PROCEDIMIENTO( Se inocul una muestra obtenida por )isopado far$ngeo, en una placa /etri

con 9gar ;)ocolate. Se utili la tcnica de estr$a por agotamiento. Se llev aanaerobiosis # se incub a CDE; por - )oras.

( Se inoculo una muestra obtenida por )isopado far$ngeo en una placa /etri con

9gar sangre. Se utili la tcnica de estr$a por agotamiento. Se reali lainoculacin por puntura de Stap)#lococcus aureus. Se llev a anaerobiosis #se incub a CDE; por - )oras.

- AGAR CHOCOLATEedio enriuecido, es ampliamente nutritivo por la presencia de peptona, tripte$na,e!tracto de levadura, e!tracto de coran # almidn. *l agregado de sangre #suplemento =ritale! con solvente aporta nutrientes, vitaminas # mineralesadicionales. *l cloruro de sodio mantiene el balance osmtico # el agar es el agentesolidi%cante. *ste agar contiene los factores > # R, necesarios para el crecimiento #

de desarrollo de bacterias e!igentes, como el 7aemop)ilus

RESULTADOS

- *n el caso del 9gar sangre. Se observ el crecimiento de colonias peueastransparentes alrededor del crecimiento de las colonias mucoides grandes deStap)#lococcus aureus. *ste crecimiento se da por el fenmeno deSatelitismo, ue se da debido a ue el S. 9ureus lisa los glbulos ro6os,presentes en el agar sangre: liberando as$ a los factores > # R, necesariospara el crecimiento de 7aemop)ilus.

- *n el caso de del 9gar c)ocolate. Se observ el crecimiento de coloniaspeueas transparentes, lo ue indica el crecimiento de colonias de7aemop)ilus.

II. BORDETELLA PERTUSIS"os microorganismos son cocobacilos gramnegativos diminutos ue se parecen a7. in4uenae. *n la tincin con aul de toluidina, se pueden demostrar grnulos

metacromticos bipolares. ;ontienen una cpsula.*l microorganismo es un aerobio estricto # forma cido pero no gas a partir deglucosa # lactosa. 'o necesita factores R # > en el subcultivo. "a )emlisis delmedio ue contiene sangre se relaciona con =. pertussis virulento.


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PROCEDIMIENTO

Se obtendr la muestra de un paciente con sospec)a de tos compulsiva. Se le)ar toser en la placa con agar =ordet Gengou. Se incubar la placa a CDE; por- )oras.

- AGAR BORDET-GENGOU"a base agar =ordet Gengou es una modi%cacin del medio originalmentedescrito por =ordet # Gengou para el cultivo de =ordetella pertussis . *n estemedio, la infusin de patata proporciona nitrgeno # vitaminas. uc)oscompuestos pueden in)ibir el crecimiento de =. pertussis, incluidos los cidosgrasos presentes en las secreciones nasales o el algodn de la torunda derecogida. *l almidn, presente en la infusin de patata, absorbe los cidos

grasos. *l glicerol es una fuente de carbono. *l cloruro de sodio conserva eleuilibrio osmtico del medio. "a adicin de sangre de carnero al 15Aproporciona factores de crecimiento comple6o esenciales. ambin se le aadecefa!ilina # penicilina para in)ibir el crecimiento de Gram positivos.

RESULTADOS

*n este caso, no se pudo encontrar una muestra de =ordetella pertussis, sinembargo los resultados esperado son el crecimiento de coloniaspeueas, de colorblanco # con forma de cpula, brillantes # similares a perlas divididas en dos.


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PRCTICA 5: ESTUDIO DE BACILOSAEROBIOS ESPORULADOS: BACILLUS Y

CORYNEBACTERIUMI. BACILLUS

*l gnero =acillus comprende grandes bacilos aerobios grampositivos ue seorganian en cadenas. "a ma#or parte de los miembros de este gnero essapr%ta # vive en la tierra, agua # aire, # en la vegetacin, como =acillus cereus# =acillus subtilis. 9lgunos son patgenos para los insectos. =. cereus puedecrecer en los alimentos # producir una endoto!ina o una to!ina emtica uegenera into!icacin alimentaria. *stos microorganismos algunas veces producen

enfermedades en las personas inmunodeprimidas 2p. e6., meningitis,endocarditis, endoftalmitis, con6untivitis o gastroenteritis aguda3. =. ant)racis,ue causa el carbunco, es el principal microorganismo patgeno del gnero.

PROCEDIMIENTO

Se sembr por estr$a las cepas de =acillus en una placa de 9gar Sangre # en

9gar almidn.Se sembr por puntura en edio SK # en tubos con gelatinaSe incub a CDE; por - )oras las placas # tubos.

( *&K@ SK*s un medio semislido destinado a veri%car la movilidad, produccin de indol# de sulfuro de )idrgeno en un mismo tubo.*s til para diferenciar miembros de la familia *nterobacteriaceae.

( *&K@ G*"9K'9*st compuesto por peptona, gelatina # e!tracto de carne. "a gelatina es unaprote$na ue tiene la propiedad de formar gel. /uede ser atacada por algunasbacterias ue la priven de su propiedad geli%cante.


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( 9G9B 9"K&'*l medio de agar(almidn es utiliado en la seleccin de microorganismosproductores de amilasas # tambin en los cultivos de )ongos. "a actividad amilol$ticaes revelada colocando al medio unos gotas de solucin de "ugol, ue tie el almidnde aul # de6a un )alo claro en el lugar donde el almidn fue digeridoenimticamente.

RESULTADOSSe observaron los siguientes resultados.

( *n el agar sangre se observ un )alo blanuecino, ue evidencia la ocurrenciade beta()emlisis.

( *l agar almidn es )idroliado.( "a gelatina fue licuada, debido a ue la bacteria produce enima gelatinasa.( Se observ la movilidad en el medio SK. Ja ue el crecimiento se reali a lo

largo de la puntura # por deba6o de esta.

*n base a todos estos resultados, se determin ue la bacteria es =acillussubtilis.

II. CORYNOBACTERIUM"as corinebacterias tienen un dimetro de 0.5 a 1 m # de varios micrmetros delongitud. *s caracter$stico ue posean tumefacciones irregulares en un e!tremoue les da el aspecto de Pforma en palillo de tamborQ 2% g. 1(13. ;on unadistribucin irregulardentro del bacilo 2a menudo cerca de los polos3 seencuentran los grnulos ue se tien profundamente con colorantes de anilina

2grnulos metacromticos3 ue le con%eren al bacilo un aspecto de abalorio. "ascorinebacterias individuales en frotis teidos tienden a acomodarse en formaparalela o en ngulos agudos entre s$. /ocas veces se observan verdaderasrami%caciones en los cultivos.

PROCEDIMIENTO

Se sembr por estr$a por agotamiento en placa con 9gar elurito de /otasio. Seincub por - )oras a CDE;.

- AGAR TELURITO DE POTASIO


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edio de cultivo diferencial para bacterias reductoras del telurito de potasio.*ste medio de cultivo adems puede ser utiliado para el diagnsticodiferencial de otras bacterias tolerantes al telurito, # capaces de reducirlo,tales como Stap)#lococcus aureus # ;or#nebacterium dip)t)eriae. "asbacterias capaces de tolerar # reducir telurito de potasio producen colonias decolor negro, en tanto ue el desarrollo de la ma#or$a de los Gram negativosresulta in)ibido por el efecto to!ico de este aditivo.

RESULTADOS

Se observaron el crecimiento de colonias decolor negrobrillante. "o ue indica elcrecimiento adecuado de colonias de;or#nebacterium dip)t)eriae.

PRCTICA 6: G(NERO CLOSTRIDIUM"os clostridios son grandes bacilos anaerobios, grampositivos, mviles. uc)os de ellosdescomponen prote$nas o forman to!inas # algunos llevan a cabo ambas acciones. Su)bitat es la tierra o el intestino de animales # seres )umanos, donde viven comosapr%tos. 9lgunos de los clostridios patgenos son los ue generan botulismo, ttanos,gangrena gaseosa # colitis seudomembranosa.

"as esporas de los clostridios por lo general son ms amplias ue el dimetro de los bacilos apartir de los cuales se forman. *n las diversas especies, la espora tiene una ubicacin central,subterminal o terminal. "a ma#or parte de las especies de clostridios es mvil # posee 4 agelosperitricos.

PROCEDIMIENTO


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Se inocula la muestra de cepa de ;lostridium en tubo con caldo carne, se incub por -)oras a CDE;.

CALDO CARNE

edio de cultivo utiliado para el crecimiento de bacterias anaerobias.

RESULTADOS

Se observ el crecimiento de bacterias por deba6o de la super%cie del medio de cultivo,

debido a ue esta bacteria es anaerobia # el o!$geno es to!ica para ella.


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PRCTICA 7: FAMILIAPSEUDOMONADACEAE"as pseudomonas son bacilos gramnegativos, mviles # aerobios, algunos de los cualesproducen pigmentos )idrosolubles. "as pseudomonas tienen una amplia distribucin en elsuelo, el agua, las plantas # los animales. /seudomonas aeruginosa a menudo estpresente en peueas cantidades en la micro4ora intestinal normal # en la piel del ser)umano # es el principal microorganismo patgeno del grupo. @tras pseudomonas pocasveces producen enfermedad. "a clasi%cacin de las pseudomonas se basa en la

)omolog$a de rB'9T&'9 # en las caracter$sticas de cultivo comunes.

/. aeruginosa es mvil, tiene forma de bastn, mide casi 0. U m. *s gramnegativo #muestra una disposicin en bacterias individuales, en pares # a veces en cadenas cortas.

PROCEDIMIENTO

Se reali el cultivo de cepa de /seudomona 9eruginosa por estr$a por agotamiento, en el9gar ;etrimida.

AGAR CETRIMIDASu formulacin permite el crecimiento selectivo de /seudomonas aeruginosa # estimula laformacin de pigmentos. *s ste un medio mu# seme6ante al Ming 9, en el cual la peptonade gelatina aporta los nutrientes para el desarrollo microbiano. el cloruro de magnesio # elsulfato de potasio promueven la formacin de piocianina, pioverdina, piomelanina #4uoresce$na de /. aeruginosa. "a cetrimida es un detergente catinico ue acta comoagente in)ibidor, libera el nitrgeno # el fsforo de las clulas de casi toda la 4oraacompaante, aunue in)ibe tambin algunas especies de /seudomonas. *l agar es elagente solidi%cante.

RESULTADOS

Se observ el crecimiento ptimo de la cepa de/seudomona 9eruginosa. Se observa adems "a presenciade un color verde(aulado ue corresponde a la produccin depiocianina, mientras ue un color verde corresponde ala produccin de pioverdina.


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PRCTICA 8: FAMILIASPIROCHAETACEAE"as espirouetas componen un gran grupo )eterogneo de bacterias mviles espirilares.8na familia 2Spiroc)aetaceae3 de la orden Spiroc)aetales consiste en tres gneros degrandes microorganismos espirilares de vida libre. "a otra familia 2reponemataceae3

inclu#e tres gneros, cu#os miembros son patgenos para el )ombre? 13 treponemas, 3borrelias # C3 leptospiras.

"as espirouetas poseen muc)as caracter$sticas estructurales en comn, como loe6empli%ca Treponema pallidum. Son bacilos gramnegativos, largos, %nos, )elicoidales,espirilares o a manera de Psacacorc)oQ. "os bacilos de este orden poseen una 9a&!a"%"r!a o una cubierta de glucosaminoglucanos. *n el interior de la cubierta est lamembrana e!terna ue contiene peptidoglucano # ue conserva la integridad estructuraldel microorganismo. "os "!,;ag", 2%lamentos a!iales3 son los organelos a manerade 4agelos en el espacio periplsmico, rodeados por la membrana e!terna. "osendo4agelos comienan en cada e!tremo del microorganismo # describen una curva a sualrededor ue se e!tiende )asta un punto medio, # lo cubren. *n el interior de losendo4agelos est la membrana interna 2citoplsmica3 ue con% ere estabilidad osmtica #cubre el cilindro protoplsmico. &entro de la clula, cerca de la membrana interna seencuentra una serie de tubos citoplsmicos 2%brillas corporales3.

;@"@B9;K' 8K"KV9&9

Se reali la tincin con coloracin Gram # colorante 9ul de etileno. Se observaron leptospiras# borrelia.

PRCTICA 1


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Mycobacterium tuberculosiscausa tuberculosis # es un patgeno de e!traordinariaimportancia para los seres )umanos. Mycobacterium leprae causa la lepra.Mycobacterium avium-intracellulare (comple6o de M. avium, o 9; WM. avium comple!X3 #otras micobacterias no tuberculosas suelen infectar personas con SK&9, son patgenosoportunistas en otros individuos inmunode%cientes # a veces causan enfermedad enpersonas con sistemas inmunitarios normales. Se conocen ms de 15 especies deMycobacterium, incluidas muc)as formas sapr%tas.

MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS*n los te6idos, los bacilos tuberculosos son fKnas estructuras rectas cil$ndricas ue miden0.- U C m, apro!imadamente *n medios artificiales se les identifica por ser formascocoides # %lamentosas, cu#a morfolog$a var$a con la especie. *s imposible clasi%carlasmicobacterias en grampositivas o gramnegativas. 8na ve ue captan los colorantesbsicos el alco)ol no las decolora, independientemente del tratamiento con #odo.

"os bacilos tuberculosos verdaderos se caracterian por su resistencia a la decoloracin,es decir, la mecla de alco)ol et$lico al F5A # cido clor)$drico al CA 2cido(alco)ol3,decolora rpidamente todas las bacterias, e!cepto las micobacterias. al resistenciadepende de la integridad de la cubierta crea.

T(CNICA DE ZIEHL NEELSEN

Se emplea para la tincin # la identi%cacin de las bacterias acidorresistentes:*n la ue se utilian los siguientes reactivos?

( Solucin de fucsina fenicada( Solucin de alco)ol acido( Solucin de 9ul de etileno o Solucin saturada de cido p$crico.

"os microorganismos ue retienen el calor ro6o a pesar de la decoloracin son los

llamados alco)ol cido resistentes # destacando en un fondo de color aul.

"os medios para el cultivo primario de micobacterias deben incluir uno de tipo noselectivo # otro selectivo. "os de este ltimotipo contienen antibiticos para evitar laproliferacin e!cesiva de bacterias # )ongos contaminantes. Se conocen tres frmulasgenerales ue pueden utiliarse para los dos tipos mencionados de medios.

1. M"&, " agar "3&&!%=%&+,.

"os medios de esta categor$a 2como iddlebrooL D710 # D7113 contienen salesde%nidas, vitaminas, cofactores, cido oleico, albmina, catalasa # glicerol: el medioD711 contiene tambin )idroliado de case$na. "a albmina neutralia los efectost!icos e in)ibidores de los cidos grasos en la muestra o el medio de cultivo. "osmedios de agar semisintticos se utilian para observar la morfolog$a de las


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colonias para evaluar la susceptibilidad # si se les agrega antibiticos # verde demalauita, sirven como medios selectivos.

2. M"&, " #*"9, ">"a,."os medios en cuestin 2como el de "YZenstein([ensen3 contienen sales de%nidas,glicerol # sustancias orgnicas comple6as 2como ser$an )uevos frescos o #emas de)uevo, )arina de papa # otros ingredientes en combinaciones3. Se inclu#e el verdede malauita para in)ibir la proliferacin de otras bacterias. "os inculos peueos

en muestras teidas de los pacientes proliferarn en dic)os medios en un lapso detres a seis semanas. "os medios en cuestin, con la adicin de antibiticos, seutilian como medios selectivos.

C. Ca, ?+,3, 3"&,@."os caldos sealados 2iddlebrooL D7F # D713 permiten la proliferacin deinculos peueos. /or lo comn, las micobacterias proliferan en cmulos o masas,dado el carcter )idrfobo de la super%cie celular. Si se agregan steres)idrosolubles de cidos grasos 2tZeens3, )umedecen la super% cie # permiten laproliferacin dispersa en el medio l$uido. *n ellos es ms rpida la multiplicacinde los microorganismos ue en medios comple6os.

PRCTICA 11: OBSER0ACIN DELMINAS COLOREADAS CON

RICETTSIA. COLORACIN DE

MACHIA0ELLO"as ricLettsias son cocobacilos pleomr% cos con aspecto de varillas cortas 20.C U 1 a m3 o de cocos 20.C m de dimetro3. 'o se tien bien con colorante de Gram pero seobservan fcilmenteba6o el microscopio de lu cuando se tien con colorante de Giemsa, colorante deGimene, naran6a acridina # otras tinciones.

"as ricLettsias crecen fcilmente en sacos vitelinos de )uevos con embrin. *s posibleobtener preparaciones puras de ricLettsias para emplearlas en pruebas de laboratorio pormedio de la centrifugacin diferencial de suspensiones de saco vitelino.

uc)as cepas de ricLettsia tambin crecen en cultivo celular, donde el intervalo degeneracin es de + a 10 ) a C-E;. /or raones de bioseguridad, las ricLettsias slo sedeben aislar en laboratorios de referencia.

"as ricLettsias poseen paredes celulares gramnegativas con cido murmico ue contienepeptidoglucano # cido diaminopimlico. "os grupos del tifus # las %ebres e!antemticascontienen lipopolisacrido. *n las paredes celulares contienen prote$nas de super% cie@mp9 # @mp=, ue son importantes para la respuesta inmunitaria )umoral #

proporcionan la base para laserotipi%cacin.

"as ricLettsias crecen en distintas partes de las clulas. "as del grupo del tifus suelenencontrarse en el citoplasma: las del grupo de %ebres e!antemticas en el ncleo.Coxiella crece slo


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en vacuolas citoplasmticas. "a proliferacin de las ricLettsias aumenta en presencia desulfonamidas # las ricLettsiosis son ms graves con estos frmacos. "a tetraciclina # elcloranfenicol in)iben la proliferacin de las ricLettsias # en ocasiones son e%caces desdeel punto de vista teraputico.

COLORACIN DE MACHIA0ELLO

8tiliado para la observacin de ricLettsias. "as bacterias se colorearan de ro6o(rosado, enun fondo aul

Se utilian C soluciones?

( Solucin 9?Hucsina bsica al 0.5A en agua destilada( Solucin =? \cido c$trico fresco al 0.-A en agua destilada( Solucin ;? 9ul de metileno al 1A en agua destilada

;lulas infectadas con BicLettsia ricLettsii


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PRCTICA 12: OBSER0ACIN DELMINAS CON BARTONELLA"as tres especies mdicamente importantes del gnero =artonella son =. bacilliformis, uecausa la %ebre de @ro#a # la verruga peruana: =. uintana, la causa de la %ebre uintanade la /rimera Guerra undial # algunos casos de angiomatosis bacilar, # =. )enselae, ueorigina la linforreticulosis benigna # se )a vinculado con la angiomatosis bacilar. "oscuadros en cuestin poseen muc)as caracter$sticas en comn. Se conoce un con6untoadicional peueo de especies # subespecies de =artonella ue rara ve )an causado

enfermedades de seres )umanos, # tambin un grupo muc)o ma#or ue son propias deanimales, # ue posiblemente no se )an transmitido a personas.

"as especies de =artonella son bacilos gramnegativos pleomr%cos, de proliferacinlenta, # dif$ciles de aislar en el laboratorio. Se les identi%ca en los te6idos infectadosteidos con la tcnica de impregnacin argntica de ]art)in(Starr#

*n el laboratorio se utili la coloracin de "eis)man.

COLORACIN DE LEISHMAN

Colorante preparado para la tincin de parsitos sanguneos formado por una mezcla al 50 % de eosina y azul de metileno

en metanol con 0,25 grs/100 ml.


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PRCTICA 1': MYCOPLASMASe )an identi%cado ms de 150 especies de bacterias sin pared 2pared defectuosa3, #como m$nimo, 15 de ellas, segn e!pertos, son de origen )umano, en tanto ue las otrasse )an aislado de animales # plantas. *n los seres )umanos, cuatro especies son deimportancia primordial? #coplasma pneumoniae causa neumon$a # se le )a vinculadocon infecciones articulares # de otros sitios. #coplasma )ominis a veces causa %ebre

puerperal # se le )a identi%cado 6unto con otras bacterias en infecciones de trompasuterinas. 8reaplasma ureal#ticum es causa de uretritis no gonoccica en varones # puedeocasionar neumopat$as en prematuros de ba6o peso. #coplasma genitalium tiene granseme6ana con . pneumoniae # se )a dic)o ue causa infecciones uretrales # de otrotipo. @tros miembros del gnero #coplasma son patgenos de aparatos respiratorio #urogenital # de articulaciones de animales.

"os micoplasmas son los microorganismos de menor tamao ue pueden vivir libres en lanaturalea # replicarse por s$ mismos en medios de laboratorio.

/oseen las caracter$sticas siguientes?

( "os ms peueos tienen 15 a 50 nm de tamao( Son mu# pleomr% cos porue no tienen una pared r$gida # en ve de ella

estn circundados por una Pmembrana unitariaQ trilaminar ue contiene unesterol 2se necesita la adicin de suero o colesterol a medios de cultivo paraue los micoplasmas generen esteroles # proliferen3

( "os micoplasmas son absolutamente resistentes a la penicilina porue notienen estructuras de la pared en las cuales acte dic)o antibitico, pero sonin)ibidos por tetraciclinas o eritromicina.

( "os micoplasmas se reproducen en medios acelulares: en el agar, el centro detoda la colonia est situado de manera caracter$stica por deba6o de lasuper%cie

( "a proliferacin de micoplasmas es in)ibida por anticuerpos espec$%cos.( "os micoplasmas muestran a%nidad por membranas de clulas de mam$feros.

CULTI0O

*l cultivo de micoplasmas patgenos para los )umanos obliga a usar medios con suero ol$uido de ascitis, factores de crecimiento, e!tracto de levadura o un sustrato metablicocomo la glucosa o la urea. 'o e!iste un solo medio ptimo para todas las especies poruemuestran propiedades # necesidades de sustrato diferentes.

"os medios de cultivo especiales utiliados son ?

( ;aldo #coplasma base( 9gar #coplasma base

Se reconocen por la formacin de colonias en )uevo frito, estas colonias son visibles conaumento por ser mu# peueas.


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PRÁCTICA 1- BACTERIOLOGÍA

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