Previo Fraccionamiento Celular

Universidad Nacional Autónoma de MéxicoFacultad de Estudios Superiores Cuautitlán

Licenciatura en Bioquímica Diagnóstica

Previo: Fraccionamiento celular

HOMOGENIZACIÓN La homogeneización consiste en romper las células y liberar sus organelos usando una variedad de mecanismos (moler, picar, triturar, cambios de presión, choque osmótico, congelación y descongelación, homogeneización con ultrasonidos…). Las células se




homogeneízan en una solución isotónica, lo cual previene que se rompa su membrana por ósmosis, con el pH regulado y a temperaturas bajas para prevenir daños enzimáticos.

2. La homogeneización es un paso muy común en la preparación de muestras biológicas antes del análisis de ácidos nucleicos y proteínas, o del estudio de células, metabolismo, agentes patógenos y otros muchos objetivos. Como resultado, queda una pasta fina que consiste de las células y sus organelos por separado. Se refiere al rompimiento de las células o el tejido del cual se pretende extraer la organela o la molécula de interés biológico.

CENTRIFUGACION DIFERENCIAL En la centrifugación diferencial, el homogenado es centrifugado repetidas veces a altas velocidades ,sedimentándolo progresivamente en pequeñas partículas. El método está ilustrado en la fig. 2. La primera centrifugación es a 600g por 10 minutos, el cual sedimenta la fracción nuclear. Este “pellet” contiene el núcleo, células intactas y tejido..L próxima separación es el sobrenadante postnuclear ó partículas suspendidas en líquido sobre el “pellet” nuclear, el cual es tranferido a otro tubo de centrífuga y se centrífuga a 10,000 g por 30 minutos en una centrífuga refrigerada. El material sedimentado se conoce como fracción mitocondrial ; éste contiene mitocondria y micro cuerpos.




1. Calcula el RCF utilizando la siguiente fórmula: RCF = r w ^ 2 / g, donde: RCF = relativo al campo centrífugo, o la relación de la aceleración centrífuga causada por el giro a la aceleración gravitacional de la Tierra r = el radio de giro del rotor w = la velocidad angular en radianes por segundo g = la gravedad de la Tierra (9807 mm/s^2)2. La RCF es una función de velocidad de centrifugación en

revoluciones por minutos (rpm) y la distancia de partículas desde el eje de rotación. Conociendo esta distancia (x) y el (rpm), se puede determinar el RCF de la ecuación : RCF = 1.19 x 10-5 (rpm)2x, donde x se toma como la distancia




(en cm) desde el eje de rotación hasta el margen de afuera del tubo de centrífuga.




PREGUNTA 6 (LA CONTESTE CON MIS PALABRAS PORQUE NO ENCUENTRO COMO PONERLA)

Si se puede realizar fraccionamiento celular de este orgánulo teniendo los cuidados necesarios mediante una homogeneización mécanica o una centrifugación, lo que se puede obtener es el ADN de la célula, este método es muy sencillo y rápido, los materiales son de uso común y es de los métodos principalmente enseñados en el área de la bioquímica




Los colorantes vitales permiten observar movilidad, así como algunos de sus organelos o inclusiones teñidas, sin daño aparente; estos se preparan en soluciones acuosas o alcohólicas muy diluidas. En tanto que los colorantes supravitales, aun cuando tienen la ventaja de hacer más evidentes algunos organelos, presentan el inconveniente de afectar la viabilidad de los organismos. Estos colorantes varían en su composición y consisten en mezclas de reactivos que incluyen el colorante, ácidos, aldehídos, alcoholes y agua. Los primeros se aplican directamente en la muestra, en tanto que para los supravitales se recomienda aplicar una pequeña cantidad del colorante al portaobjetos y dejar secar y posteriormente colocar la muestra. Para que la aplicación del colorante sea uniforme, se recomienda extenderlo con la ayuda de otro portaobjetos.

En la presente práctica se utiliza el ácido carmínico como agente de tinción del material genético de células vegetales y embriones somáticos en sus primeras etapas. Este pigmento es necesario utilizarlo en forma precipitada con un metal, que da como origen un carmín, mismo que al unirlo al ácido acético produce acetocarmín. La nueva polaridad de este compuesto permite que se una con los ácidos del núcleo presentes en cromosomas y cabezas embriogénicas. Para determinar la presencia de callo embriogénico en diversos experimentos




de inducción de embriogénesis somática, a menudo es necesario llevar a cabo un proceso de tinción doble o diferencial que permita hacer visible al microscopio las estructuras de interés. Los embriones somáticos pueden ser detectados con facilidad al microscopio si son teñidos diferencialmente, esto es posible gracias a que las células embriogénicas tienen altas concentraciones de proteínas y ácido ribonucleico, pero también a la presencia de células

basales que poseen material principalmente básico.

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