PRUEBAS INMUNOLOGICAS DE DIAGNOSTICO CLINICOLADY YURANI RODRIGUEZ GONZALEZU.C.M.C VIII-D 2004CONTENIDO

TABLA DE CONTENIDOCULTIVO MIXTO DE LINFOCITOSLINFOCITOTOXICIDADEIA-ELISAIFIINMUNOPEROXIDASAENASANASANCAS

TABLA DE CONTENIDOANTI-DNAAMAATAMEIAAGLUTINACINELFA

CULTIVO MIXTO DE LINFOCITOSFUNDAMENTO: El CML es un procedimiento in-Vitro que mide reconocimiento y proliferacin celular. El ensayo representa la medida funcional de inmunidad celular en el cual los linfocitos ayudadores (CD4) de un individuo son inducidos a proliferar despus de estar en contacto con las clulas mononucleares de otro individuo. La seal de activacin o estimulacin es originada por los determinantes de las molculas de clase II regin HLA-D que estn expresadas en clulas B y monocitos que estn situados en en el,primer dominio en la regin hipervariable de las molculas HLA II.Cuando dos poblaciones alogenicas de linfocitos que difieren en la regin HLA-D son puestas juntas en cultivo va a ver una mutua activacin celular en un periodo de seis das.

Esta activacin es manifestada metabolicamente con incremento de protenas, sntesis de RNA y DNA y morfolgicamente por la transformacin de linfocitos pequeos en linfoblastos (blastogenesis). Clulas normales alcanzaran un pico mximo de sntesis o la rata mxima de proliferacin de DNA en u periodo de seis das. Las clulas activadas se dividen y se proliferan. Para medir esta actividad se mide la incorporacin de Timidina Tritiada al nuevo DNA sintetizado. La activacin de una poblacin celular es mediada por el tratamiento de la segunda poblacin con un inhibidor de DNA (mitomicina C) o irradiacin para bloquearla sntesis de DNA.Las clulas tratadas son llamadas poblacin estimuladora (E) y las clulas sin tratar son la poblacin respondedora( R) .Si hay compatibilidad en el locus D entre los individuos, y por supuesto si hay diferencias entre las molculas D entre las dos poblaciones celulares estimulacin fuerte ocurrir.

CULTIVO MIXTO DE LINFOCITOS

CULTIVO MIXTO DE LINFOCITOSCONTENIDO

LINFOCITOTOXICIDADFUNDAMENTO: El HLA-antisuero se liga a su membrana celular especifica de antigenos blanco de los linfocitos. El complemento es activado por el complejo Ag-Ac sobre la clula la cual conduce a lisis celular. Este es detectado por la entrada de tinte dentro de la clula muerta (=reaccin positiva), y cundo no existe complejo Ag-Ac la clula no se lisa y por lo tanto no es coloreada por el tinte (= reaccin negativa)

TEST LINFOCITOTOXICIDAD

1. SEPARACIN DE LINFOCITOS

2. TEST LINFOCITOTOXICIDADCONTENIDO

ENZIMUNOENSAYOELISAFUNDAMENTO: ENZIMUNOANALISIS O ENZIMUNOENSAYO, en este se determina la presencia de antigenos (Ag) o anticuerpos (Ac) a partir de una fase slida en la que estn fijados Ag o Ac dependiendo de lo que se determine y de la tcnica, si es en Sandwich, por competencia o por captura. Esta tcnica es basada por la presencia de una enzima como la peroxidas de rbano picante o fosfatasa alcalina que permitir la deteccin de Ag o Ac por medio de la accin sobre un sustrato.EJEMPLO: InmunoComb, Enzymun-Test

ELISA(Sandwich)+s

ELISA(Sandwich)++s

ELISA(Captura)++s

ELISA(Competitivo)CONTENIDO

InmunoCombpeineCONTENIDO+s

IFIFUNDAMENTO: El mtodo est dividido en dos etapas. En la primera se coloca en contacto la muestra del paciente con el antigeno dejndose incubar, luego se retiran los excesos de muestra no unida. En la segunda etapa se colocan en contacto el complejo inmune y el conjugado que es un anticuerpo marcado con fluorocromo, se incuba, se retira el exceso de anticuerpo no unido y se observa la preparacin al microscopio. Este mtodo es indirecto porque es necesario utilizar un anticuerpo que actuara sobre el anticuerpo unido al antigeno para la deteccin del complejo inmune.El sustrato siempre sern clulas o el parasito.

IFICONTENIDO

INMUNOPEROXIDASA(PEROXISET)FUNDAMENTO: Utiliza en mtodo indirecto, este procedimiento se basa en tres reacciones. El primer paso el suero del paciente se pone en contacto con el sustrato antignico. Si los Ac estn presentes, stos se unirn al Ag, formando un complejo Ag-Ac. El segundo paso se agrega una antigamma-globulina humana marcada con peroxidasa y si esta el complejo presente sta se unir. En el tercer paso, se revela con una reaccin colorimetrica en presencia de un cromgeno y agua oxigenada, dando un complejo insoluble y estable en el que se pueda visualizar al microscopio ptico.

INMUNOPEROXIDASA(PEROXISET)+CONTENIDO

ENAS (Prueba inmunoenzimatica para la determinacin de antigenos extractables)FUNDAMENTO: Prueba inmunoenzimatica para la determinacin de antigenos extractables (ENAS) detecta anticuerpos IgG, IgM y IgA para los antigenos ya identificados Smith (Sm), Sm/RNP (ribonucleoproteina), SS-A (Ro), SS-B (La), Scl-70 y Jo-1. Los antigenos purificados se encuentran en la superficie del pozo. Se realiza una dilucin a la muestra del paciente y se agrega a los pozos, all se formara un complejo Ag-Ac si el paciente posee un Ac para los Ag mencionados anteriormente, agrega un conjugado anti- IgG, IgM o IgA marcado con peroxidasa, este reacciona con el complejo, se adiciona cromgeno/sustrato (TMB/H2O2). Lee la absorbancia a 450 nm es directamente proporcional a la concentracin de Ac.

ENAS

ELISA

ENAS

IDR+

ENAS

CONTRAINMUNOELECTROFORESISCONTENIDO

ANAS(anticuerpos antinucleares)Sustrato: Clulas tumoralesTcnica: ELISA, IFI, PeroxisetELISA, IFI, PeroxisetCONTENIDO

ANCAS(anticuerpos anticitoplasmaticos)Sustrato: Mieloperoxidasa del neutrfiloTcnica: ELISA, IFI, PeroxisetCONTENIDOELISA, IFI, Peroxiset

ANTI-DNA(anticuerpos anti-DNA)Sustrato: Crithidia luciliaeTcnica: ELISA, IFI, PeroxisetCONTENIDOELISA, IFI, Peroxiset

AMA(anticuerpos antimitocondriales)Sustrato: Clulas con su mitocondriaTcnica: ELISA, IFI, PeroxisetCONTENIDOELISA, IFI, Peroxiset

ATA(anticuerpos antitiroideos)Sustrato: Cortes de tiroidesTcnica: IFICONTENIDO

MEIA(enzimunoensayo de micropartculas)FUNDAMENTO: Es la tecnologa de enzimunoensayo de micropartculas recubiertas de Ag o Ac (MEIA). Se basa en la determinacin de Ag o Ac en la muestra comparando la tasa de formacin de fluorescencia y la tasa de punto de corte determinada a partir de una calibracin index del ensayoEjemplo: AxSYM

MEIA(Ac pte.)++s

MEIA(Ag pte.)+++++sssCONTENIDO

AGLUTINACINFUNDAMENTO:Aglutinacin indirecta: Es aquella en la que un antgeno celular o de partculas insolubles es aglutinado directamente por al Ac presente en el suero; los eritrocitos, una gran variedad bacteriana y de hongos, pueden aglutinar directamente los anticuerpos sricos.Aglutinacin directa: existen otras sustancias para ser utilizadas como la Bentonita, el ltex, el carbn activadoEjemplo: Serodia

AGLUTINACINCONTENIDO

ELFA(Reaccin inmunoenzimatica a una deteccin final en fluorescencia)Reaccin 1Reaccin 2+FA

ELFAReaccin finalCONTENIDOEjemplo: VIDAS DUO