El diagnstico microscpico de malaria se realiza a partir de muestras sanguneas en dos tipos de extendidos: uno grueso (gota gruesa) y uno delgado (frotis o frote).

La gota gruesa est conformada por numerosas capas de clulas sanguneas principalmente glbulos rojos, los cuales son deshemoglobinizados durante la coloracin de Giemsa. Esta concentracin de glbulos rojos facilita la deteccin de los parsitos que pudieran estar presentes.

El frotis consiste en una capa delgada nica de clulas sanguneas. Esto facilita la observacin de las caractersticas morfolgicas de los parsitos presentes dentro de los glbulos rojos, por lo que facilita la determinacin de la especie de Plasmodium.

PREPARACION DEL MATERIAL

Se debe contar con el siguiente material:

Alcohol Etlico al 70% para desinfeccinAlgodn o gasa para limpiar el rea.Lancetas estriles nuevas.Lpiz para rotulas las muestras.Lminas porta objetos nuevas, previamente tratadas.Guantes desechables para evitar contacto con la sangre.Material para descarte de material utilizado (caja de bioseguridad, (guardin), bolsa roja)Boleta de solicitud de examen (una por cada paciente)

PREPARACION DEL PACIENTE

Explicar al paciente lo que se le va a realizar y por qu se le realizar de esa manera.Sentar al paciente en una silla y colocarle el brazo sobre una mesa o escritorio.Colocarse los guantes desechables para evitar el contacto con la sangre.

PROCEDIMIENTO

Sostener la mano izquierda del paciente, con la palma hacia arriba.

Seleccione el dedo anular (dedo No. 4), para ello haga que el paciente extienda el dedo seleccionado y flexione los dems. En nios pequeos puede usarse el dedo gordo del pie o el taln, tambin puede usarse el lbulo de la oreja.

Limpiar el dedo con una torunda de algodn, ligeramente humedecida en alcohol para limpiar y desinfectar el rea.

Dejar secar el alcohol del dedo.

Sostener el dedo del paciente con la mano izquierda manteniendo una suave presin para favorecer la salida de la sangre.

Pinchar con la lanceta estril, el costado del dedo elegido. Hacerlo con un movimiento rpido y firme. NOTA: Se elige el costado del dedo ya que es donde la sensibilidad es menor.

g) Dejar salir las primeras tres (3) gotas de sangre, limpindolas con una torunda de algodn seca, retirando cualquier fibra de algodn que pueda permanecer en el dedo para que esta no se mezcle con la sangre.

Limpieza de las primeras tres gotas

Colectar una a dos gotitas de sangre. Colocarla en contacto con el primer tercio de la superficie de una lmina porta objetos, la cual servir para la gota gruesa.

i)Luego colocar una segunda gotita de sangre (ms pequea que la del inciso anterior) en el segundo tercio de la lmina, la cual servir para preparar un frotis en el cual se rotulara la muestra.Toma de muestra

PREPARACION DE LA GOTA GRUESA Y DEL FROTIS

Preparacin del frotis

Sobre la segunda gota de sangre, colocar otra lmina porta objeto (lmina auxiliar) en un ngulo de 45. Asegurarse que se disperse sangre en todo el borde la lmina auxiliar. Extender rpidamente a lo largo de la lmina porta objeto que tiene las muestras. La gota se debe dispersar en 1/3 del portaobjetos.

GOTA GRUESA

Utilizando uno de los ngulos de la lmina auxiliar, esparcir rpidamente la gota de sangre y extenderla uniformemente hasta formar una gota gruesa de 1 cm de lado o de dimetro. La sangre no debe ser excesivamente revuelta, es suficiente con 3 a 4 movimientos. De preferencia, realizar el homogenizado de la muestra en una sola direccin.

La lmina auxiliar para preparar la gota gruesa y el frotis se debe limpiar con alcohol etlico para poderla utilizar para colocar sobre ella la siguiente muestra. Nunca utilice la misma lmina auxiliar para preparar ms de una muestra.

Lmina con gota gruesa y frote

SECADO DE LA MUESTRA

Deje secar sus frotes y gotas gruesas a temperatura ambiente, protegidas del polvo, la luz solar directa y de los insectos. El tiempo para secado del frote es de 5 a 10 minutos a temperatura ambiente.

El calor fija la gota gruesa por lo que no se debe acelerarse el proceso de secado por mtodos mecnicos (hornos, lmparas, etc.)

En climas clidos y hmedos la autofijacin de las muestras ocurre muy rpidamente, por ello deben ser coloreadas lo ms pronto posible. Cuando un tiempo largo de almacenamiento es inevitable, las muestras debern ser deshemoglobinizadas.

Identificacin de la muestra y la boleta de solicitud de examen:

Se debe tener un cuidado especial para la identificacin de la muestra, siendo necesario cumplir con este requisito antes de tomar una nueva muestra. El frote o la gota gruesa debe tener la clave del que refiere la muestra.

Los datos que van en la boleta de solicitud deben coincidir con los datos que aparecen en la lmina. Este dato debe anotarse con un lpiz de grafito (nunca con bolgrafo o pluma) y debe colocarse en la base del frotis.Lamina con gota gruesa y frote

ERRORES MAS COMUNES AL PREPARAR LAS MUESTRAS

Muestra mal colocada: Si se deposita la muestra cerca de los extremos de la lmina, ser difcil su examen microscpico. Adems una proporcin de la muestra puede rayarse y hasta desaparecer durante el proceso de coloracin.

Exceso de muestra:

Al colorear la lmina con mucha sangre, la gota gruesa se observa demasiado azul ya que no se deshemoglobinizan todos los glbulos rojos, habr numerosas clulas blancas por campo y estos factores pueden oscurecer los campos o cubrir algunos parsito presentes. Adems, los glbulos rojos pueden estar unos encima de otros imposibilitando el examen.

Poca muestra:

Si se coloca poca sangre en la preparacin, no habr suficientes clulas blancas por campo y no se examinar suficiente cantidad de sangre, disminuyendo la probabilidad de encontrar parsitos.

Lminas con poca muestra

Guardar las muestras en condiciones inadecuadas.

Preparar las muestras sobre lminas mal lavadas o en lminas rayadas: lo que causar que el extendido presente un patrn irregular.

Laminas mal lavadas

Formulario E-1

GRACIAS POR SU ATENCIN