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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOTECNOLÓGICO “PREVALENCIA DEL ANTÍGENO D DEL FACTOR RH, COMO MARCADOR DE GENES DE ASCENDENCIA INDÍGENA MEDIANTE LA TÉCNICA DE AGLUTINACIÓN EN GEL EN DONANTES QUITO, EN EL LABORATORIO DE GENÉTICA E INMUNOLOGÍA DE LA FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS DE LA UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR” Trabajo de fin de carrera presentado previo a la obtención del Grado de Licenciada en Laboratorio Clínico e Histotecnológico. Ortiz Flores Diana Katherine TUTOR: Dr. Carlos Wladimir Torres Serrano Quito, ENERO 2016
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOTECNOLÓGICO
“PREVALENCIA DEL ANTÍGENO D DEL FACTOR RH, COMO MARCADOR
DE GENES DE ASCENDENCIA INDÍGENA MEDIANTE LA TÉCNICA DE
AGLUTINACIÓN EN GEL EN DONANTES QUITO, EN EL LABORATORIO
DE GENÉTICA E INMUNOLOGÍA DE LA FACULTAD DE CIENCIAS
MÉDICAS DE LA UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR”
Trabajo de fin de carrera presentado previo a la obtención del Grado de Licenciada
en Laboratorio Clínico e Histotecnológico.
Ortiz Flores Diana Katherine
TUTOR: Dr. Carlos Wladimir Torres Serrano
Quito, ENERO 2016
ii
DEDICATORIA
El presente trabajo va dedicado a Dios el creador de la vida, quien me ha protegido
en todo momento y me ha dado la fortaleza de seguir día a día.
A mis padres, que han sabido formarme con valores, lo cual me ha ayudado a salir
adelante en los momentos más difíciles.
A mis hijos, que son la luz de mis ojos y mi razón de vivir.
Diana Ortiz
iii
AGRADECIMIENTO
Quiero agradecer a Dios, porque ha sabido guiarme por el camino del bien, dándome
sabiduría, inteligencia para culminar con éxito una etapa más de mi vida
A mis padres, que con su apoyo incondicional, me han enseñado que nunca se debe
dejar de luchar por lo que se desea alcanzar.
A mi esposo que ha sabido apoyarme incondicionalmente.
Al Dr. Carlos Torres, por los consejos, brindados. Y demás personas que colaboraron
para este trabajo.
Diana Ortiz
iv
AUTORIZACIÓN DE AUTORÍA INTELECTUAL
Yo, ORTIZ FLORES DIANA KATHERINE, con cédula de identidad Nro.:
1720239837 en calidad de autora del trabajo de investigación sobre “PREVALENCIA
DEL ANTÍGENO D DEL FACTOR RH, COMO MARCADOR DE GENES DE
ASCENDENCIA INDÍGENA MEDIANTE LA TÉCNICA DE AGLUTINACIÓN
EN GEL EN DONANTES QUITO, EN EL LABORATORIO DE GENÉTICA E
INMUNOLOGÍA DE LA FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS DE LA
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR” Por la presente autorizo a la
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR, hacer uso de todos los contenidos que
me pertenecen o de parte de los que contienen esta obra, con fines estrictamente
académicos o de investigación.
Los derechos que como autora me corresponden, con excepción de la presente
autorización, seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los
artículos 5,6,8,19 y demás pertinentes de la ley de propiedad Intelectual y su
reglamento.
Quito, 22 de enero de 2016
(f)_____ _________________
DIANA KATHERINE ORTIZ FLORES
C.I.: 1720239837
Correo: [email protected]
v
APROBACIÓN DEL TUTOR
En mi carácter de Tutor del trabajo de grado presentado por la señorita Ortiz Flores
Diana Katherine para optar el título de Licenciada en Laboratorio Clínico e
Histotecnológico, cuyo título es “Prevalencia del antígeno D del factor Rh, como
marcador de genes de ascendencia indígena mediante la técnica de aglutinación en
gel en donantes Quito, en el Laboratorio de Genética e Inmunología de la
Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Central del Ecuador”. Considero
que dicho trabajo reúne los requisitos y méritos suficientes para ser sometido a la
presentación pública y evaluación por parte del jurado examinador que se designe.
En la ciudad de Quito a los 14 días del mes de septiembre del 2015
vi
ÍNDICE DE CONTENIDO
Contenido Pág.
DEDICATORIA ...................................................................................................... ii
AGRADECIMIENTO ............................................................................................ iii
AUTORIZACIÓN DE AUTORÍA INTELECTUAL ............................................ iv
APROBACIÓN DEL TUTOR ................................................................................ v
ÍNDICE DE CONTENIDO .................................................................................... vi
LISTADO DE ANEXOS......................................................................................... x
LISTADO DE FIGURAS ....................................................................................... xi
LISTADO DE TABLAS ....................................................................................... xii
LISTADO DE GRÁFICOS .................................................................................. xiii
RESUMEN ........................................................................................................... xiv
ABSTRACT .......................................................................................................... xv
INTRODUCCIÓN ................................................................................................... 1
CAPÍTULO I ........................................................................................................... 4
1. PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN .......................................................................... 4
1.1. Descripción del problema .......................................................................................... 4
1.2. Ubicación del problema ............................................................................................ 5
1.3. Formulación del problema ........................................................................................ 6
1.4. Objetivos .................................................................................................................... 7
1.4.1. Objetivo General..................................................................................................... 7
1.4.2. Objetivos Específicos ............................................................................................. 7
1.5. Justificación ............................................................................................................... 8
1.6. Pregunta directriz ....................................................................................................... 8
CAPÍTULO II .......................................................................................................... 9
vii
2. MARCO TEÓRICO ..................................................................................................... 9
2.1. Marco legal gubernamental ...................................................................................... 9
2.1.1. Desarrollo del Proyecto de Investigación de Fin de Carrera .................................. 9
2.1.2. En cuanto a la educación ....................................................................................... 9
2.2. Marco conceptual .................................................................................................... 12
2.2.1. El sistema Rh ........................................................................................................ 12
2.2.1.1. Historia .............................................................................................................. 12
2.2.1.2. Teorías y nomenclaturas. ................................................................................... 13
2.2.2. Antígenos del sistema Rh .................................................................................... 15
2.2.2.1. Fenotipo “D” débil............................................................................................. 15
2.2.2.2. Fenotipo “D” parcial .......................................................................................... 16
2.2.2.3. Otros Antígenos del Sistema Rh ........................................................................ 16
2.2.3. Expresión de los antígenos D ............................................................................... 17
2.2.4. Anticuerpos del sistema Rh .................................................................................. 19
2.2.5. El sistema ABO ................................................................................................... 20
2.2.5.1. Descubrimiento de los antígenos del sistema ABO........................................... 21
2.2.5.2. Distribución de los antígenos de grupo sanguíneo ABO en el cuerpo humano. 22
2.2.5.3. Fenotipos y genotipos del sistema ABO............................................................ 22
2.2.5.4. Anticuerpos del sistema ABO. .......................................................................... 23
2.2.6. El Sistema Rh como marcador evolutivo ............................................................. 24
2.2.7. Genes de ascendencia indígena ............................................................................ 26
2.2.7.1. La evolución del género homo .......................................................................... 26
2.2.7.2. Los primeros pobladores de América ................................................................ 26
2.2.7.3. El mestizaje........................................................................................................ 28
2.2.7.4. El ecuador prehispánico..................................................................................... 28
2.2.7.5. El Ecuador actual .............................................................................................. 29
viii
2.2.8. Microtécnica de aglutinación en gel ..................................................................... 30
2.2.8.1. Fundamento ....................................................................................................... 30
2.2.8.2. Principio del método .......................................................................................... 31
2.2.8.2.1. Forma de los microtubos ................................................................................ 31
2.2.8.2.2. Aspecto de la tarjeta composición del gel ...................................................... 32
2.2.8.2.3. Volúmenes a dispensar .................................................................................. 32
2.2.8.2.4. Condiciones de incubación ............................................................................. 33
2.2.8.2.5. Centrifugación ................................................................................................ 33
2.2.8.2.6. Ventajas de la Microtécnica Id-Card .............................................................. 33
2.2.8.2.7. Patrones de lectura .......................................................................................... 34
2.2.8.3. Otras consideraciones ........................................................................................ 35
2.2.8.3.1. Importancia del complemento ........................................................................ 35
2.2.8.3.2. Diluyentes ....................................................................................................... 36
CAPÍTULO III ...................................................................................................... 37
3. METODOLOGÍA ....................................................................................................... 37
3.1. Tipo de estudio ........................................................................................................ 37
3.2. Nivel de Investigación ............................................................................................ 37
3.3. Técnicas e Instrumentos de Investigación ............................................................. 37
3.4. Universo y Muestra .............................................................................................. 37
3.4.1. Universo............................................................................................................... 37
3.4.2. Muestreo .............................................................................................................. 38
3.5. Criterios de Inclusión............................................................................................... 38
3.6. Criterios de Exclusión ............................................................................................ 38
3.7. Técnica e Instrumento de recolección de datos ...................................................... 38
3.7.1. Técnica................................................................................................................. 38
3.8. Plan de Análisis ...................................................................................................... 39
ix
3.9. Consideraciones Éticas ........................................................................................... 39
2.3. Variables .................................................................................................................. 39
CAPÍTULO IV ...................................................................................................... 40
4. ANÁLISIS DE RESULTADOS ................................................................................ 40
4.1. Discusión ................................................................................................................. 50
4.2. Conclusiones ............................................................................................................ 52
4.3. Recomendaciones ................................................................................................... 53
BIBLIOGRAFÍA ................................................................................................... 54
ANEXOS ............................................................................................................... 59
Anexo A. Operacionalización de Variables ................................................................... 60
Anexo B. Fotografías ...................................................................................................... 64
Anexo B.1. Tarjeta en Gel par grupo factor ABO .......................................................... 64
Anexo B.2. Principios de la Tarjeta en Gel .................................................................... 64
Anexo D. Formulario de consentimiento informado ...................................................... 66
x
LISTADO DE ANEXOS
ANEXO Pág.
ANEXO A. OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES .......................................... 60
ANEXO B. FOTOGRAFÍAS ......................................................................................... 64
ANEXO B.1. TARJETA EN GEL PAR GRUPO FACTOR ABO................................ 64
ANEXO B.2. PRINCIPIOS DE LA TARJETA EN GEL .............................................. 64
ANEXO D. FORMULARIO DE CONSENTIMIENTO INFORMADO ...................... 66
xi
LISTADO DE FIGURAS
Contenido Pág.
Figura 1 Esquema de los genes y proteínas RHCE, RHD representan las diferencias de
aminoácidos entre éstas y las RHCE, los señalan los aminoácidos críticos para la
expresión de los antígenos C/c y E/e. ............................................................................ 12
Figura 2 Teoría de Fisher y Race................................................................................... 13
Figura 3 Teoría de Wiener .............................................................................................. 14
Figura 4. Forma de los microtubos ................................................................................. 31
Figura 5. Patrones de lectura .......................................................................................... 34
xii
LISTADO DE TABLAS
Contenido Pág.
Tabla Nº 1 Fenotipos del sistema ABO .......................................................................... 22
Tabla Nº 2. Distribución de personas donantes según sexo ........................................... 40
Tabla Nº 3. Distribución de personas donantes según edad .......................................... 41
Tabla Nº 4. Distribución de personas donantes según grupo ABO. ............................... 42
Tabla Nº 5. Distribución de personas donantes según grupo RH. .................................. 43
Tabla Nº 6. Distribución de personas donantes según antígeno D ................................. 44
Tabla Nº 7 Distribución de personas según sexo y antígeno D ................................... 45
Tabla Nº 8. Distribución de personas donantes según la etnia que refiere las personas
........................................................................................................................................ 46
Tabla Nº 9. Distribución de personas donantes según genotipo .................................... 47
Tabla Nº 10. Distribución de personas donantes según ascendencia ............................. 48
Tabla Nº 11. Distribución de personas donantes según ascendencia y presencia de
antígeno D....................................................................................................................... 49
xiii
LISTADO DE GRÁFICOS
Contenido Pág.
Gráfico Nº 1. Distribución de personas según sexo ..................................................... 40
Gráfico Nº 2. Distribución de personas donantes según edad ........................................ 41
Gráfico Nº 3. Distribución de personas según grupo ABO. ........................................... 42
Gráfico Nº 4. Distribución de personas según grupo RH ............................................... 43
Gráfico Nº 5. Distribución de personas según antígeno D ............................................ 44
Gráfico Nº 6 Distribución de personas según sexo y antígeno D ................................ 45
Gráfico Nº 7. Distribución de personas según etnia que refiere las personas ............. 46
Gráfico Nº 8. Distribución de personas según genotipo ................................................ 47
Gráfico Nº 9. Distribución de personas según tipo de ascendencia ............................... 48
xiv
“Prevalencia del antígeno D del factor Rh, como marcador de genes de ascendencia
indígena mediante la técnica de aglutinación en gel en donantes Quito, en el
Laboratorio de Genética e Inmunología de la Facultad de Ciencias Médicas de la
Universidad Central del Ecuador”
Autor: Ortiz Flores Diana Katherine
Tutor: Dr. Carlos Wladimir Torres Serrano
RESUMEN
El Rh es una proteína integral de los glóbulos rojos se expresa en los mismos alrededor
de la sexta semana de gestación, tiene una gran importancia médica, antropológica y
evolutiva.
El Rh tiene más de 48 antígenos y de todos ellos los más frecuentes son D, C, E, c, e, la
herencia de estos antígenos está determinada por un complejo de dos genes, el RHD
que codifica la proteína transportadora de antígeno D y el otro gen RHCE que codifica
la proteína transportadora de antígeno C o c, E o e. Las personas Rh negativas tienen
únicamente el gen RHCE.
El presente trabajo es un estudio descriptivo de corte transversal, realizado en 161
personas. A los cuales se realizó encuestas y se extrajo 5 cc de sangre para obtener
suero para realizar determinación de antígeno D, Grupo ABO, RH, la muestra se
trasladó conservando la cadena de frio al laboratorio de Genética de la Facultad de
ciencias Médicas donde se procesó las muestra mediante técnica de Aglutinación en Gel
La prevalencia de antígeno D en donantes de Quito es de 3,7 por 100000 habitantes
El 45% de individuos Rh positivos son homocigotos al factor D, mientras que el 55% de
los individuos Rh negativos son heterocigotos por haber heredado un factor D positivo y
otro negativo de sus progenitores. El gen Rh positivo es dominante, mientras que el gen
Rh negativo es recesivo.
La mayoría de personas donantes tienen ascendencia indígena presentan antígeno D 92
de 161 personas y según la información resultante de la presencia de antígeno D la
ascendencia indígena de la población estudiada es de 57.14%, siendo Mestizos solo el
31.06% de las personas, el 6,21 % tiene ascendencia caucásica y 5,59 tiene ascendencia
Afro descendientes.
PALABRAS CLAVE: PREVALENCIA/ ANTÍGENO D/ GENES/ ASCENDENCIA
ÉTNICA/ AGLUTINACIÓN GEL.
xv
“Prevalence of Rh D antigen as a marker gene indigenous descent by gel agglutination
technique donors Quito, in the Laboratory of Genetics and Immunology at the Faculty
of Medical Sciences of the Central University of Ecuador"
Author : Ortiz Flores Diana Katherine
Tutor : Dr. Carlos Wladimir Torres Serrano
ABSTRACT
Rh is an integral protein of red blood cells that appear around the sixth week of
pregnancy and has great medical, anthropological, and evolutionary significance.
Rh has more than 48 antigens and the most frequent are D, C, E, c, e. This antigen
inheritance is determined by a complex of two genes – RHD that codifies the transfer
protein and of D antigen and of the other gene RHCE that codifies the transfer protein
of antigen C or c, E or e. Rh negative people only have RHCE gene.
This work is a descriptive cross-cut study performed on 161 people who underwent
surveys and were extracted 5 cc of blood to determine antigen D, ABO Group, RH. The
sample was transported by observing the cold chain to the Genetics Laboratory of the
School of Medical Sciences where the sample was processed through the gel
agglutination technology.
D antigen prevalence in donors in Quito is 3.7 per 100000 inhabitants; 45% of Rh
positive individuals are homozygous for factor D, while 55% of Rh negative individuals
are heterozygotes after having inherited a positive D factor and another negative factor
from the parents. Gen Rh positive prevails, while gen Rh negative is recessive.
Most donors among the 161 individuals were of indigenous ancestry and present
antigen D 92; according to the information resulting from the presence of D antigen,
indigenous ancestry of the target population is 57.14%, of which Mestizos are only
31.06%; 6.21%; have Caucasian ancestry; and 5.59 have African ancestry.
KEYWORDS: PREVALENCE/ ANTIGEN D/ GENES/ ETHNIC ANCESTRY/ GEL
AGGLUTINATION.
1
INTRODUCCIÓN
Los grupos sanguíneos se definen a partir de una serie de antígenos presentes en las
diversas células sanguíneas, organizadas a su vez en sistemas. Los sistemas son un
conjunto de antígenos de la membrana eritrocitaria con un único cromosoma asignado,
cuya expresión es controlada por un único gen polimórfico o por genes contiguos
homólogos que comparten la misma estructura bioquímica y presentan distribución
variada entre individuos de la misma especie. (Baptista,H. 2004)
El conocimiento sobre la estructura genética de los grupos sanguíneos, ha dado un salto
cualitativo en los últimos 10 años. Los eventos moleculares que dan lugar a los
antígenos eritrocitarios son diversos y complejos. Pueden ocurrir fenómenos de
conversión o recombinación de genes, duplicación de un exón, deleción de un gen, exón
o nucleótido o inserción o substitución de un nucleótido. (Baptista,H. 2004)
Aproximadamente se conocen 26 sistemas de grupos sanguíneos y los que adquieren
mayor interés en su tipificación debido a que juegan un importante papel en la
obstetricia y la medicina transfusional son el Sistema ABO y Rh. (Wagner, F.F. &
Flegel, W.A., 2004)
El sistema Rh es uno de los sistemas eritrocitarios más complejos, pues a la fecha se han
identificado al menos 48 antígenos. Esta variabilidad antigénica no está representada
por la diversidad serológica. Existen únicamente dos genes, aquel que codifica para la
proteína RhD, llamado gen RHD y el gen RhCE, que se encarga de codificar a las
proteínas C, c, E y e. (Wagner, F.F. & Flegel, W.A., 2004)
La identificación del conjunto de antígenos detectados en los eritrocitos constituye el
fenotipo, el cual expresa el genotipo más probable del individuo según las frecuencias
génicas de la población, de esta manera su determinación es importante en caso de
estudios sobre el origen étnico.
2
Es así que la determinación de los grupos sanguíneos tiene importancia en varias
ciencias:
En Hemoterapia, se vuelve necesario estudiar al menos alguno de estos sistemas
en cada individuo para garantizar el éxito de las transfusiones. Así, antes de toda
transfusión, es necesario determinar, al menos el tipo ABO y Rh del donador y
del receptor.
En ginecología/obstetricia, se puede diagnosticar EHRN a través de su estudio,
adoptándose medidas preventivas y curativas.
En Antropología, se puede estudiar diversas razas y sus interrelaciones
evolutivas, a través del análisis de la distribución poblacional de los diversos
antígenos, determinando su predominancia en cada raza humana y haciéndose
comparaciones.
El estudio de marcadores genéticos como lo son los grupos sanguíneos de los sistemas
ABO y Rh, reviste gran interés para la Antropología Física, puesto que puede contribuir
a un mayor conocimiento de las relaciones biológicas existentes entre distintas
poblaciones humanas. (Aspillaga, E. 1988).
La distribución de los grupos sanguíneos en la población humana no es uniforme. El
más común es el grupo “O” y factor Rh positivo, mientras que el más infrecuente es el
grupo “AB” y factor Rh negativo, además hay variaciones en la distribución en las
distintas subpoblaciones humanas como se demuestra en estudios en otros países como:
En Bolivia, ciudad de la Paz, se analizaron 720 muestras sanguíneas, encontrándose la
siguiente frecuencia del grupo y factor Rh: ORh+ 369 (51.25%), ARh+ 215 (29.90%),
BRh+ 70 (9.72%), ABRh+ 8(1.1%), ORh- 33 (4.58%), ARh- 19 (2.62%), BRh- 6
(0.83%), ABRh- 0 (0%). (Guamán, M. & Quinde, M. 2009)
En Argentina, los grupos sanguíneos y Factor Rh tiene la siguiente distribución: ORh+
58.8%, ARh+ 34.7%, BRh+ 8.8%, ABRh+ 2.7%, ORh- 8.4%, ARh- 0.44%, BRh-
0.21%.
3
En Ecuador en Cruz Roja Ecuatoriana de Quito y Ambato: Quito ORh+ = 68%, ARh+ =
22%, BRh+ = 8%, ABRh+ = 2%. En el sistema Rh negativo es de 5% distribuidos de la
siguiente manera: ORh- = 3.4%, ARh- = 1.1%, BRh- = 0.4%, ABRh- =0.1%. En
Ambato ORh+ = 72%, ARh+ = 18%, BRh+ = 5%, ABRh+ = 1%.
Es muy interesante el poder reunir antecedentes sobre los grupos sanguíneos de
poblaciones indígenas que han permanecido relativamente aisladas, por largo tiempo, ya
sea por razones geográficas o de índole cultural, por lo que ellas aportan antecedentes
que permiten deducir la frecuencia original de los grupos estudiados. Esto contribuye
a la comprensión de los fenómenos evolutivos que han afectado a estas poblaciones,
especialmente cuando se realizan comparaciones con otros grupos y existe
la posibilidad de ampliar el espectro de marcadores genéticos a utilizar. (Aspillaga, E.
1988)
4
CAPÍTULO I
1. PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN
1.1. Descripción del problema
La clasificación sanguínea se basa en el principio, de que las células contienen
antígenos que reaccionan en forma de aglutinación con el antisuero que posee el
anticuerpo correspondiente.
El sistema Rh es el grupo sanguíneo más complejo y polimórfico de la membrana del
glóbulo rojo. Este sistema presenta un gran interés clínico debido a que sus antígenos
son sumamente inmunogénicos, existen cuarenta y ocho antígenos de los cuales el de
mayor poder sensibilizante es el D, le siguen en importancia el c y el E, los cuales
pueden causar reacciones hemolíticas post-transfusionales, originar la enfermedad
hemolítica del recién nacido y aumentar el riesgo de rechazo en trasplante de órganos en
personas politransfundidas debido a la sensibilización. (Cotorruelo, C. et al, 2003).
Todas las personas son clasificadas como Rh positivas o Rh negativas, dependiendo de
la presencia o ausencia del antígeno Rh “D” en la membrana celular. La presencia o
ausencia del antígeno Rh “D” se determina haciendo reaccionar las células con el anti-
D. Sí las células aglutinan significa que la persona tiene el antígeno “D”, sí por el
contrario no son aglutinadas la persona carece de dicho antígeno. (Martinez, C. 1993).
La prevalencia del fenotipo Rh negativo entre los indígenas mesoamericanos y
sudamericanos es baja y se explica por las ramificaciones de los grupos humanos
contemporáneos. La mayor prevalencia del fenotipo Rh negativo en los grupos
caucásicos es alrededor del 12-15 %, contrasta con la frecuencia menor al 1 % o nula en
los grupos indígenas americanos. Los indígenas americanos tienen mayor relación
génica con grupos étnicos, por una rama del sur del pacífico y por otra de los grupos
mongólicos del norte del continente asiático, en estos grupos étnicos, la prevalencia de
sujetos Rh negativo es muy baja. (Martinez, C. 1993).
5
Una de las características importantes de las poblaciones nativas indígenas de
Sudamérica, es que son monomorficas presentan el fenotipo O y Rh (D) con una
frecuencia del 100 % por lo que esta población es considerada homogénea en la
distribución de los antígenos ABO y D. (Martinez, C. 1993).
1.2. Ubicación del problema
Hace aproximadamente 60 000 años, alrededor de 10 000 individuos vivían recluidos en
África, hoy día cerca de 6 000 millones de personas son sus descendientes directos
distribuidos en todo el planeta. Según el investigador inglés Dr. Spencer Wells, el
hombre primitivo partió de África en 2 oleadas. La primera comenzó entre 50 000 y
60 000 años atrás y recorrió la costa sur de Asia, para llegar por último al norte de
Australia. La segunda salida se produjo hace 45 000 años. Estos hombres partieron a lo
que es hoy Medio Oriente, un grupo siguió hasta la India, mientras que otro llegó a
China. (Gershowitz, H. 1959).
Finalmente, hace 20 000 o 15 000 años, un grupo de solo 10 a 20 individuos que
habitaban en tierras árticas, lograron cruzar al continente americano a través del
estrecho de Behring y colonizaron las Islas de Oceanía. En la medida en que la era
glacial finalizaba y los casquetes polares retrocedían, aumentaba el nivel del mar y
aislaba a los pobladores americanos, que comenzaron a desplazarse hacia el sur. El
ascenso del nivel del mar como resultado del fin de la era glacial, les cerró el contacto
con el continente asiático. (Wells, S. 2002).
La composición genética de una población depende directamente de la mezcla genética
de esa población, que está determinada por su migración y mestizaje. La población
ecuatoriana se cree que se originó principalmente por españoles caucásicos y negros
africanos. (Guerra, R. 1971) (Ustáriz, C. et al 2011).
La distribución de los grupos sanguíneos ABO es diferente entre los diversos grupos
étnicos. Entre los caucásicos y los africanos, la diferencia fundamental radica en que el
grupo A es más frecuente en los caucásicos y el grupo B en los africanos; la secuencia
en el orden de frecuencia es O, B y AB. (González, R. et al; 1998)
6
Es muy raro encontrar al antígeno D en caucásicos, negros, polinesios y esquimales,
pero se encuentra presente en alta frecuencia en etnias autóctonas de Latinoamérica y
población en Asia. Como hemos relatado anterior mente el anticuerpo anti-D es
clínicamente significativo porque se ha asociado con reacciones hemolíticas
postransfusionales y la Enfermedad Hemolítica del Recién Nacido. (Gutierrez, D. 2013)
Algunos estudios han demostrado que la población hispana tiene una frecuencia
de antígeno D, de 1%, y poblaciones indígenas de América Latina han mostrado
variaciones de frecuencia de D entre 3 a 45%, de acuerdo a su origen étnico.
(Gutierrez, D. 2013).
Por todo esto el estudio del antígeno D es importante para ver la composición genética
de la población ecuatoriana y como está influida por los ancestros indígenas.
1.3. Formulación del problema
¿Cuál es la prevalencia de antígeno D del factor Rh, como marcador de genes de
ascendencia indígena, mediante la técnica de aglutinación en gel, en la población que
acude al laboratorio de Genética e Inmunología de la Facultad de Ciencias Médicas de
la Universidad Central del Ecuador?
7
1.4. Objetivos
1.4.1. Objetivo General
Examinar la prevalencia fenotípica del antígeno D del sistema sanguíneo Rh, como
marcador de genes de ascendencia indígena aplicando el método de aglutinación en gel.
1.4.2. Objetivos Específicos
Describir la prevalencia de distribución del antígeno D del Sistema Rh
Establecer el porcentaje de población de ascendencia indígena mediante la
identificación del antígeno D del sistema Rh.
Determinar la prevalencia del antígeno D del sistema Rh en varones y mujeres
que asisten al laboratorio de Genética e Inmunología de la Facultad de Ciencias
Médicas de la Universidad Central del Ecuador.
8
1.5. Justificación
El presente estudio permitirá conocer datos sobre la frecuencia de distribución del
antígeno más importante del Sistema Rh, el antígeno D, la presencia de este antígeno
es muy importante sobre todo clínicamente bebido a que es sumamente inmunogénico
y puede causar reacciones hemolíticas post-transfusionales, originar la enfermedad
hemolítica del recién nacido y aumentar el riesgo de rechazo en trasplante de órganos en
personas politransfundidas.
Además y en este caso, el estudio y seguimiento del antígeno D nos sirve como
marcador antropológico de la población indígena en el Ecuador puesto que la población
indígena al ser monomorfica y presentar el fenotipo O y Rh D con una frecuencia del
100% conservara su frecuencia génica.
También este trabajo puede convertirse en un estudio de línea para futuras
investigaciones con el propósito de conocer la distribución característica de nuestra
región.
1.6. Pregunta directriz
¿Cuál es la frecuencia de distribución del antígeno D en la población estudiada?
9
CAPÍTULO II
2. MARCO TEÓRICO
2.1. Marco legal gubernamental
2.1.1. Desarrollo del Proyecto de Investigación de Fin de Carrera
El desarrollo del Proyecto de Investigación de Fin de Carrera, se halla debidamente
sustentado por las leyes ecuatorianas las cuales promueven el desarrollo de la
investigación y la adquisición de nuevos conocimientos. Además, como parte de su
función, el Estado asegura el bienestar de sus pobladores, de tal manera que contempla
en sus leyes el incentivo a la promoción de nuevos conocimientos en beneficio de
aquellos.
Constitución de la República del Ecuador
2.1.2. En cuanto a la educación
Art. 343: El sistema nacional de educación tendrá como finalidad el desarrollo de
capacidades y potencialidades individuales y colectivas de la población, que posibiliten
el aprendizaje, y la generación y utilización de conocimientos, técnicas, saberes, artes y
cultura. El sistema tendrá como centro al sujeto que aprende, y funcionará de manera
flexible y dinámica, incluyente, eficaz y eficiente. (República del Ecuador. Constitución
2008).
Art. 350: El sistema de educación superior tiene como finalidad la formación
académica y profesional con visión científica y humanista; la investigación científica y
tecnológica; la innovación, promoción, desarrollo y difusión de los saberes y las
culturas; la construcción de soluciones para los problemas del país, en relación con los
objetivos del régimen de desarrollo. (República del Ecuador. Constitución 2008).
Art 360: El sistema garantizará, a través de las instituciones que lo conforman, la
promoción de la salud, prevención y atención integral, familiar y comunitaria, con base
en la atención primaria de salud; articulará los diferentes niveles de atención; y
10
promoverá la complementariedad con las medicinas ancestrales y alternativas.
(República del Ecuador. Constitución 2008).
Art. 385: El sistema nacional de ciencia, tecnología, innovación y saberes ancestrales,
en el marco del respeto al ambiente, la naturaleza, la vida, las culturas y la soberanía,
tendrá como finalidad: 1. Generar, adaptar y difundir conocimientos científicos y
tecnológicos. 2. Recuperar, fortalecer y potenciar los saberes ancestrales. 3. Desarrollar
tecnologías e innovaciones que impulsen la producción nacional, eleven la eficiencia y
productividad, mejoren la calidad de vida y contribuyan a la realización del buen vivir.
(República del Ecuador. Constitución 2008).
El estatuto de la Universidad Central del Ecuador también contempla y ampara la
realización del Proyecto de Investigación de Fin de Carrera, como medio para fomentar
la investigación científica y como requisito para la obtención del título al que aspira el
estudiante al finalizar la carrera.
Art. 212: El trabajo de graduación o titulación constituye un requisito obligatorio para
la obtención del título o grado para cualquiera de los niveles de formación. Dichos
trabajos pueden ser estructurados de manera independiente o como consecuencia de un
seminario de fin de carrera.
Para la obtención del grado académico de licenciado o del título profesional
universitario de pre o posgrado, el estudiante debe realizar y defender un proyecto de
investigación conducente a una propuesta que resolverá un problema o situación
práctica, con característica de viabilidad, rentabilidad y originalidad en los aspectos de
aplicación, recursos, tiempos y resultados esperados.
Art. 32.- La salud es un derecho que garantiza el Estado, cuya realización se vincula al
ejercicio de otros derechos, entre ellos el derecho al agua, la alimentación, la educación,
la cultura física, el trabajo, la seguridad social, los ambientes sanos y otros que
sustentan el buen vivir.
11
En la Sección segunda de salud dice:
Art. 358.- El sistema nacional de salud tendrá por finalidad el desarrollo, protección y
recuperación de las capacidades y potencialidades para una vida saludable e integral,
tanto individual como colectiva, y reconocerá la diversidad social y cultural.
Art. 359.- El sistema nacional de salud comprenderá las instituciones, programas,
políticas, recursos, acciones y actores en salud; abarcará todas las dimensiones del
derecho a la salud; garantizará la promoción, prevención, recuperación y rehabilitación
en todos los niveles; y propiciará la participación ciudadana y el control social.
Art. 360.- El sistema garantizará, a través de las instituciones que lo conforman, la
promoción de la salud, prevención y atención integral, familiar y comunitaria, con base
en la atención primaria de salud; articulará los diferentes niveles de atención; y
promoverá la complementariedad con las medicinas ancestrales y alternativas.
La red pública integral de salud será parte del sistema nacional de salud y estará
conformada por el conjunto articulado de establecimientos estatales, de la seguridad
social y con otros proveedores que pertenecen al Estado, con vínculos jurídicos,
operativos y de complementariedad.
Art. 361.- El Estado ejercerá la rectoría del sistema a través de la autoridad sanitaria
nacional, será responsable de formular la política nacional de salud, y normará, regulará
y controlará todas las actividades relacionadas con la salud, así como el funcionamiento
de las entidades del sector.
Art. 362.- La atención de salud como servicio público se prestará a través de las
entidades estatales, privadas, autónomas, comunitarias y aquellas que ejerzan las
medicinas ancestrales alternativas y complementarias.
Los servicios de salud serán seguros, de calidad y calidez, y garantizarán el
consentimiento informado, el acceso a la información y la confidencialidad de la
información de los pacientes. Los servicios públicos estatales de salud serán universales
y gratuitos en todos los niveles de atención y comprenderán los procedimientos de
diagnóstico, tratamiento, medicamentos y rehabilitación necesarios. Constitución de la
Republica del Ecuador (2008).
12
2.2. Marco conceptual
2.2.1. El sistema Rh
Es una agrupación de varios antígenos productos de dos genes adyacentes y homólogos
del brazo corto del cromosoma 1, ubicados en la región p 36.13-p34.3 que codifican los
polipéptidos no glucosilados, denominados RHD y RHCE.
El gen RHD determina la presencia de una proteína de membrana que confiere actividad
D a los glóbulos rojos, el otro gen RHCE determina los antígenos C,c, E y e; sus alelos
son RHCe, RHCE, RhcE y Rhce.
Los productos de estos genes son proteínas que contienen 417 aminoácidos, estos
atraviesan la membrana eritrocitaria doce veces y solo exhiben ramas aminoacídicas
cortas en el exterior, en la cual se expresan los respectivos antígenos, estos polipéptidos
son ácidos grasos acetilados y no contienen carbohidratos. (Coppo & Baez, 2010)
Figura 1 Esquema de los genes y proteínas RHCE, RHD representan las diferencias de aminoácidos
entre éstas y las RHCE, los señalan los aminoácidos críticos para la expresión de los antígenos
C/c y E/e.
2.2.1.1. Historia
En 1939 Levine y Stetson, luego de que una mujer diera a luz un feto muerto, hallan en
el suero de la misma un anticuerpo que aglutinaba a los glóbulos rojos del esposo y a los
del 80% de la población ABO compatible. (Factor Rh/Du, 2012)
En 1940 Landsteiner y Wiener inyectan hematíes de Macaco Rhesus a un conejo y
observan que éste desarrolla un anticuerpo que aglutina no solo a los eritrocitos del
mono sino que también, a los eritrocitos, del 85% de la población caucásica de Nueva
13
York. Quienes suponen que se trata del mismo anticuerpo descubierto el año anterior,
por lo tanto, proponen como nombre “Sistema Rh” por analogía con el antisuero
producido por el conejo luego de la sensibilización con el Rhesus.
Se necesitaron casi 20 años para demostrar que los anticuerpos humanos y los animales
no reaccionaban con el mismo antígeno (Rho), reasignándole a este nuevo sistema el
nombre de LW en honor a sus descubridores; los antígenos de éste sistema son más
frecuentes en individuos Rh-positivos que en Rh-negativos.
El anticuerpo humano descubierto por Levine y Stetson está dirigido entonces hacia
el antígeno “D” (Rho) del sistema.
2.2.1.2. Teorías y nomenclaturas.
Fisher y Race en 1943 postulan que en el cromosoma 1 existen 3 locus
estrechamente relacionados “D”, “C” y “E” con dos pares de alelos “C” “c” y
“E” “e”; y el alelo del “D” que no produce antígeno, por lo tanto aceptan
colocar “d” para significar la ausencia del mismo. El grupo de alelos del
complejo génico es denominado haplotipo. (Coppo & Baez, 2010)
Figura 2 Teoría de Fisher y Race.
Fuente: http://es.slideshare.net/NaniXX/grupos-sanguneos-factor-rh?next_slideshow=1.
Wiener, en el mismo año sugería que hay múltiples alelos en un solo loci y que
cada alelo codifica un antígeno distinto. Los productos del gen (haplotipo) son
designados “R”, para los que codifican D y “r” para los que no codifican, se les
agregan subíndices o supraíndices para indicar los distintos haplotipos que
desarrollan. (Coppo & Baez, 2010)
14
Para el lenguaje hablado es esta notación la que más se utiliza, por lo abreviada
Ejs.:
R1 expresa 3 antígenos Rho (D) – rh´(C) – hr´´(e)
r” expresa 2 antígenos [hr0 (d)] – hr´(c) – rh´´(E)
Figura 3 Teoría de Wiener
Fuente: http://es.slideshare.net/NaniXX/grupos-sanguneos-factor-rh?next_slideshow=1.
ROSENFIELD, en 1973 propuso un modelo genético con genes estructurales y
genes operadores y utilizó la terminología numérica, (tal vez pensando que podía
ser utilizada en un futuro cercano para informatizar al sistema), muy complicada
cayó en desuso. (Coppo & Baez, 2010)
La práctica demostró que la teoría de Fisher/Race parecía de por sí más probable, por tal
motivo en 1977 el Comité de Estandarización de la OMS recomendó unificar criterios y
que se adoptara universalmente esta nomenclatura, aunque los símbolos de Wiener
resultaban más prácticos: Dce/dce = R1/r (Coppo & Baez, 2010)
Patricia Tippett, en 1986 enunció una nueva teoría, que parecería ser más exacta
que las anteriores, dice que en realidad existen 2 genes:
Un gen RHD que codifica al antígeno D, la ausencia de este gen no produciría
antígeno.
Un segundo gen RHCE que codifica a los antígenos “C”, “c”, “E”, y “e”, (cuyo
complejo génico sería “ce” – “cE” – “Ce” – “CE”) (Coppo & Baez, 2010)
15
A su vez existiría un tercer gen RHAG que produciría una proteína de membrana, que
actuaría como sustancia precursora, sólo habrá expresión de los antígenos del sistema
Rh si se ha expresado el gen RHAG. (Coppo & Baez, 2010)
En la anotación cotidiana se suele usar, D mayúscula para denotar la presencia del
antígeno D y d minúscula para denotar su ausencia.
Independientemente de las teorías expuestas, los genes, están tan estrechamente
relacionados, que forman complejos génicos o haplotipos, expresándose así en la
membrana del hematíe.
2.2.2. Antígenos del sistema Rh
Después de los antígenos A y B el antígeno D es el más importante, porque produce
severas reacciones hemolíticas; por lo tanto su identificación es imprescindible y su
presencia define a los individuos como Rh positivos.- Investigaciones realizadas con
anticuerpos monoclonales demostraron que el antígeno D es un mosaico compuesto por
varios epítopes diferentes, según algunos autores serian alrededor de 37, lo que ocasiona
variables antigénicas de tipo cuantitativas y cualitativas que dan origen a los fenotipos
D débiles y D parcial respectivamente. (Coppo & Baez, 2010)
2.2.2.1. Fenotipo “D” débil
Los eritrocitos de fenotipo D débil poseen un número menor de sitios antigénicos,
puede deberse a un gen que produce menor cantidad de antígeno, antiguamente
llamado Du de alto grado, o ser resultado del efecto supresor del haplotipo “Ce” en
posición “trans”, D u d e bajo grado. (Gargiulo, D.S. s.f.) (Grispan,S. 1983).
Como en estos casos no se trata de una diferencia cualitativa sino debido puramente a
una menor cantidad de sitios antigénicos, el términoDu propuesto por Stratton en 1949,
debe ser abolido y reemplazado por el de D débil. (Gargiulo, D.S. s.f.) (Grispan,S.
1983).
Algunos fenotipos D parcial pueden presentar una disminución cuantitativa del antígeno
D, pudiendo ser erróneamente clasificados como D débil, debido a que la identificación
de éste fenotipo depende fundamentalmente del reactivo “anti D (Rho)” y del método
utilizado para su investigación. (Gargiulo, D.S. s.f.) (Grispan,S. 1983).
16
2.2.2.2. Fenotipo “D” parcial
Se descubrieron algunos raros casos en que individuos, que habían sido fenotipados
cómo Rh positivos, es decir son portadores del antígeno D igual se sensibilizaban
(producían anticuerpos anti-D) al ser estimulados con glóbulos rojos portadores de
dicho antígeno (transfusiones – embarazos). (Bencomo, A. et al 2005)
Estudios posteriores demostraron que los eritrocitos con este fenotipo se caracterizan
por la ausencia de uno o más epítopes del mosaico que componen el antígeno “D”, de
ahí la capacidad de producir aloanticuerpos específicos hacia él o los epítopes faltantes,
al ser inmunizados con glóbulos rojos Rh D positivo. (Bencomo, A. et al 2005)
De acuerdo con lo anterior inferimos que la identificación del fenotipo DVI (Carece de
la mayoría de los epítopes del antígeno D; la mayor parte de los individuos producen
anti-D de significación clínica (EHFN – RHT) y sus eritrocitos no reaccionan en las
pruebas directas con los reactivos anti-D comunes) En la población es importante ya
que al ser considerados D-negativos podrían, sus eritrocitos producir aloanticuerpos
anti-D en los receptores negativos, por lo tanto, parecería ser necesario la utilización de
dos antisueros distintos, uno para tipificar a pacientes y otro para tipificar donantes.
(Bencomo, A. et al 2005)
2.2.2.3. Otros Antígenos del Sistema Rh
Después del “D” los antígenos C, c, E y e son los de mayor importancia en el Sistema,
estos 5 antígenos son los responsables de más del 99% de los problemas clínicos
relacionados con dicho sistema; ya que algunos individuos que carecen de la expresión
de alguno de ellos, pueden cuando son inmunizados, producir anticuerpos contra el
antígeno faltante. (Gargiulo, D.S. s.f.) (Grispan,S. 1983).
Algunos de los efectos de posición determinan la producción de compuestos
antigénicos, debido a que contienen los mismos antígenos Rhesus, pero dispuestos en
posiciones diferentes. Cuando dos genes se encuentran en el mismo cromosoma se
denomina posición cis, y cuando se encuentran en distintos cromosomas se denomina
posición trans. (Gargiulo, D.S. s.f.) (Grispan,S. 1983).
17
Antígenos “C” y “c”
El antígeno “C” tiene una frecuencia aproximada del 68% en la población general,
frente a una frecuencia del 81% del antígeno “c”, este último es el más inmunógeno
luego del D y como tal es causante de riesgo en la E.H.F.N. (Gargiulo, D.S. s.f.)
(Grispan,S. 1983).
Antígenos “E” y “e”
El antígeno “E” tiene una frecuencia del 27% en la población general mientras que el
“e” ronda cercano al 98%. (Gargiulo, D.S. s.f.) (Grispan,S. 1983).
2.2.3. Expresión de los antígenos D
En los últimos diez años se ha desarrollado diversas hipótesis acerca de los mecanismos
moleculares para explicar la ausencia del antígeno D, en las personas Rh negativo, esta
ausencia se debe a la deleción del RHD, es una condición homocigoto con la ausencia
del gen RHD, es el mecanismo dominante en per+sonas de raza blanca. La pérdida de la
expresión de la proteína D se presenta por un gen RHD inactivo o parcial, este
mecanismo es común en sujetos de raza negra. (Valdés, A. et al. 1997).
Cuando los eritrocitos D positivos requieren de una incubación prolongada con anti-D y
un suero antiglobulinico se los clasifica como Du o D débil, este antígeno se descubrió
en 1946 y difiere de las células D positivas normales por la reducción de los sitios D.
(Valdés, A. et al. 1997).
La presencia del antígeno D débil en el eritrocito puede tener diversas explicaciones
genéticas, algunas no del todo conocidas; algunos RHD codifican la expresión débil de
los antígenos D, debido a que son genes transmisibles, también se pueden presentar
antígenos D débil como efecto de posición, cuando el antígeno C se encuentra en
posición tras con respecto al D, este reprime al D y da lugar a un D débil, mayormente
se presenta en personas con genotipo Dce/Cde. (Bencomo, et al, 1997). (Valdés, A. et
al. 1997).
18
Existen eritrocitos que carecen de una o más partes del complejo antigénico D normal, y
se los denomina D parciales. Las personas que presentan este tipo de antígeno que le
falta alguna parte del complejo antigénico puede inmunizarse contra la parte ausente; el
anticuerpo producido reaccionara con los eritrocitos de las personas Rh positivas
completas, dando la falsa impresión de un autoanticuerpo anti –D en un sujeto Rh
positivo. (Bencomo, et al, 1997).
Los estudios moleculares dilucidaron el mecanismo causal de muchos fenotipos D
parciales y demostraron que en la mayoría de los casos los fenotipos resultan del
intercambio de nucleótidos entre los genes RhCE y RhD. (Bencomo, et al, 1997).
Se ha encontrado algunos tipos muy raros de sangre en las que falta una parte o todos
los antígenos Rhesus conocidos. (Bencomo, et al, 1997).
En 1951 Race y colaboradores, descubrieron un tipo de sangre que carecía de los
antígenos C, c, e y E, y solo poseía el antígeno D, estas personas que tienen el fenotipo
– D -- ya sea homo y heterocigoto tiene más D que las personas que presentan todos los
antígenos Rhesus, para su determinación se puede utilizar anti-D incompleto, porque D
esta aumentado, estos individuos pueden producir anticuerpos anti-C, anti-c, anti-E y
anti-e. (Bencomo, et al, 1997).
Este fenotipo excepcional parece provenir de la duplicación de porciones grandes del
RHD y la perdida concomitante de la secuencia RHCE.
En 1961 Vos y colaboradores descubrieron que una mujer aborigen australiana carecía
de los antígenos Rhesus, y el fenotipo dio - - - / - - -y se lo denomino Rhnull (nulo),
también se observó en los Estados Unidos este tipo de sangre, mediante estudios se
determinó que es el resultado de un gen silencioso o amorfo en el locus Rh o que es
causado por la acción de un gen regulador que no forma parte de los genes Rhesus
impidiendo la expresión de los antígenos. Los anticuerpos encontrados en los individuos
Rhnull son de varios tipos y aparecen por inmunización. (Bencomo, A. et al 1997)
19
2.2.4. Anticuerpos del sistema Rh
Los anticuerpos del sistema Rh suelen ser inmunes, es decir, que no existen en los
individuos que carecen del antígeno correspondiente a no ser que se haya producido una
sensibilización previa por gestación o transfusión sanguínea.
Estos anticuerpos son inmunológicos, generalmente son de tipo IgG, por lo que
atraviesan la placenta de forma activa a través de un dominio del fragmento Fc, en
general los anticuerpos persisten durante muchos años y no suelen aglutinar con el
antígeno correspondiente en medio salino, por lo que se utiliza para su detección en este
medio diferentes procedimientos capaces de aumentar la aglutinabilidad de los
eritrocitos adicionando macromoléculas (albúmina, antiglobulina) o enzimas. (Coppo &
Baez, 2010)
Se identifican mediante la prueba indirecta de la antiglobulina (Coombs) o por otros
potenciadores con alto contenido de proteínas (albúmina) o baja fuerza iónica (LISS) o
polietilenglicol (PEG). (Coppo & Baez, 2010)
Los anticuerpos anti-Rh usualmente reaccionan a 37 ºC y están presentes cerca del 80%
en los pacientes con anemia hemolítica autoinmune, reaccionando contra los eritrocitos
del paciente y los transfundidos. (Coppo & Baez, 2010)
Los inmunógenos más potentes son los antígenos D, seguidos de los c y E.
Los anticuerpos anti-D inmunológicos aparecen en personas Rh negativas como
respuesta a la estimulación del antígeno D, esto puede ocurrir por la incompatibilidad
fetal o en transfusiones.
Los anticuerpos anti – E puro se presentan con más frecuencia que los de más, debido
a que este antígeno no está presente en todos los eritrocitos.
Los anticuerpos Anti – C son raros debido a que este antígeno casi siempre está
presente en la mayoría de los eritrocitos.
20
Los anticuerpos anti-c son raros debido a que este antígeno casi siempre está presente
en la mayoría de los eritrocitos, se presentan en personas D positivas porque es raro que
los D negativos carezcan de c, la sensibilización puede ocurrir en personas de genotipo
CDe/CDe o CDe/Cde. (Coppo & Baez, 2010)
Los anticuerpos anti-e son muy raros porque son muy pocas las personas que carecen
del antígeno e, si se presentan son autoanticuerpos.
Algunos anticuerpos Rh tienden aparecer en concierto, por eso se los denomina
Anticuerpos concomitantes, por ejemplo las personas DCe/Dce que manifiestan anti-E
inmunes, casi con certeza estuvieron expuestas a antígenos c y E. (Coppo & Baez,
2010)
Los anti-c podrían coexistir con los anti-E aunque en forma más débil o indetectable
cuando se identifican los anti-E y la transfusión de sangre al parecer E-c+ compatible,
podría desencadenar una reacción hemolítica inmediata o algo más tardía.
Algunos profesionales creen que estos receptores con anti-E detectables, constituyen
casos especiales como en las personas inmunizadas cuyos eritrocitos son E y c
negativos, los anti-c suelen acompañarse de anti-E, se prefiere transfundir sangre del
fenotipo Rh del paciente, aun cuando los acti-c son indetectables en los procedimientos
de rutina. (Coppo & Baez, 2010)
2.2.5. El sistema ABO
El sistema ABO está compuesto por los antígenos A y B que están presentes en la
membrana del eritrocito, también se pueden encontrar en otras células y secreciones.
Los antígenos A y B empiezan a formarse en las primeras semanas del desarrollo fetal y
su potencia aumenta hasta la adolescencia, esto es debido a que el número de veces que
se repite el antígeno en la membrana del eritrocito al principio es reducido y va
aumentando su potencia de forma paulatina.
El grupo sanguíneo ABO lo determina un locus situado en el extremo del brazo largo
del cromosoma 9, la localización de estos antígenos es extramembranosa y en su
21
composición se puede diferenciar dos partes, una formada por oligosacaridos donde
están presentes las variaciones antigénicas y la otra parte formada por glucoproteínas
que llega ser el soporte. Estos antígenos proceden de sustancias precursoras muy
similares, existen dos tipos de sustancia, Tipo I y Tipo II. La sustancia de Tipo II da
origen a los antígenos eritrocitarios en cambio la sustancia de tipo I da origen a los
antígenos que se encuentran en secreciones. (Arbeláez, C.A. 2009)
2.2.5.1. Descubrimiento de los antígenos del sistema ABO.
En 1900 Karl Landsteiner, demostró que el suero de algunos de sus colaboradores
aglutinaba los hematíes de otros, de esta manera se reconoció la existencia de tres tipos
diferentes de grupos sanguíneos, según la aglutinación que presentaban los hematíes
con el suero de otras personas. (Arbeláez, C.A. 2009)
Treinta años más tarde esta investigación recibía el premio Nóbel, por su
descubrimiento de los grupos ABO, hasta su muerte en 1942, Landsteiner fue la figura
más brillante en la rama de biología y su fundador. (Arbeláez, C.A. 2009)
El interés biológico en los grupos sanguíneos aumentó considerablemente al saberse que
se trataba de caracteres heredados, en 1910 por Dungern y Hirszfeld probaron que la
herencia de los grupos sanguíneos se heredaba por las Leyes de Mendel. (Arbeláez,
C.A. 2009)
El conocimiento de los grupos sanguíneos adquirió importancia a través de las
investigaciones de Ruben Ottenberg que correlaciono los trabajos de Landsteiner con
las trasfusiones de sangre, fue el primero en 1908 en enfrentar la sangre del receptor con
la del dador antes de realizar la transfusión y sentó las bases de la hoy denominada regla
de Ottenberg:”La transfusión es compatible cuando la sangre del receptor no aglutina
los hematíes del dador”. (Miriam, U. Herrera, H. & Diaz, D. 2010)
22
2.2.5.2. Distribución de los antígenos de grupo sanguíneo ABO en el cuerpo
humano.
Los antígenos del sistema ABO no solo existen en los hematíes, sino que están
distribuidos en todo el organismo, la explicación de Friedenreich y G. Hartmann indica
que los antígenos de este sistema pueden existir bajo dos formas:
Forma hidrosoluble, ausente en los hematíes y en el plasma, pero presente en la
mayor parte de los líquidos corporales (suero, saliva, jugo gástrico, semen,
líquido amniótico, y en menor cantidad en sudor, lágrimas, orina, leche) del
organismo y en los órganos de los individuos secretores, y cuya existencia está
condicionada por un gen secretor.
Forma no soluble, presente en todos los tejidos, con excepción del cerebro y las
células adiposas. (Bloodbanksandbeyond 2012)
2.2.5.3. Fenotipos y genotipos del sistema ABO
El fenotipo ABO corresponde a los antígenos de este sistema expresados sobre la
superficie eritrocitaria, se determinan la existencia de seis fenotipos.
Tabla Nº 1 Fenotipos del sistema ABO
FENOTIPO GENOTIPO
POSIBLE
ANTÍGENOS EN
LOS ERITROCITOS
ANTICUERPOS EN
SUERO
A1
A1A1
A1A2
A1O
A Anti-B
A2 A2A2
A20 A Anti-B
B BB
BO B Anti-B
O OO NINGUNO Anti-A y Anti-B
A1B A1B A y B Ninguno
A2B A2B A y B Ninguno
Fuente: Vives. J. Aguilar J. Manual de técnicas de Laboratorio en
Hematología. Barcelona. Masson 2001 2001, pág. 457.
23
Fenotipos del sistema ABO
Existen dos alelos para el fenotipo A, denominados A1 y A2 respectivamente, ambos
reaccionan igualmente con el anticuerpo anti-A, pero se diferencian por su aglutinación
con las lectinas.
Las personas con sangre del tipo A tienen glóbulos rojos que expresan antígenos de tipo
A en su superficie y anticuerpos contra los antígenos B en el suero de su sangre.
Análogamente, las personas con sangre del tipo B tienen la combinación contraria,
glóbulos rojos con antígenos de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los
antígenos A en el suero de su sangre. (Maroto, R. 2007)
Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguno de los dos antígenos (A o B)
en la superficie de sus glóbulos rojos pero pueden sintetizar anticuerpos contra ambos
tipos, mientras que las personas con tipo AB expresan ambos antígenos en su superficie
y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos. (Maroto, R. 2007)
2.2.5.4. Anticuerpos del sistema ABO.
Al nacer una persona no presenta ningún tipo de anticuerpos respecto a los antígenos A
y B, pero en forma paulatina se inicia la formación de anticuerpos contra estos
antígenos, esto se debe a que el individuo tiene contacto con la membrana de
determinadas bacterias, neumococos que presentan en su estructura antígenos similares
a los antígenos hemáticos, solo se pueden detectar estos anticuerpos cuando el individuo
llega a los tres meses de vida y al principio son débiles. (Arbeláez, C.A. 2009)
Los anticuerpos del Sistema ABO son de naturaleza Ig M siendo su temperatura óptima
de reacción 4ºC, fijan complemento y no atraviesan la placenta. Los anticuerpos
inmunes producidos por un estímulo antigénico evidente, son generalmente IgG, su
temperatura óptima de reacción es 37 º C y atraviesan la placenta, produciendo
hemólisis. (Arbeláez, C.A. 2009)
Las personas que poseen en sus eritrocitos un tipo de antígeno carecen del anticuerpo
respectivo, pero este último está presente en el suero de las personas que carecen de
24
dicho antígeno. Por lo tanto, en una transfusión se producirá reacción de aglutinación
antígeno-anticuerpo o no según los casos
Las personas con sangre del tipo A tienen glóbulos rojos que expresan antígenos de tipo
A en su superficie y anticuerpos contra los antígenos B en el suero de su sangre.
(Arbeláez, C.A. 2009)
Análogamente, las personas con sangre del tipo B tienen la combinación contraria,
glóbulos rojos con antígenos de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los
antígenos A en el suero de su sangre. (Coppo & Baez, 2010)
Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antígenos (A o B)
en la superficie de sus glóbulos rojos pero pueden sintetizar anticuerpos contra ambos
tipos, mientras que las personas con tipo AB expresan ambos antígenos en su superficie
y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos.
La presencia de anticuerpos contra los antígenos de la sangre determina las
compatibilidades e incompatibilidades de los grupos sanguíneos. La transfusión de
sangre entre grupos compatibles generalmente no causa ningún problema; mientras que
la transfusión de sangre entre grupos incompatibles causa una respuesta inmune contra
las células que portan el antígeno y produce una reacción a la transfusión. (Coppo &
Baez, 2010)
2.2.6. El Sistema Rh como marcador evolutivo
La evolución de la familia de los genes del Rh presenta dos eventos mayores de
duplicación. El primero ocurrió hace aproximadamente 250-346 millones de años, y
origino los genes RH50 y RH30, mientras que el segundo ocurrió hace más o menos 8.5
millones de años y fue la generación de los genes RHD y RHCE. (Baptista, H. 2005).
El gen RH expresa las proteínas del sistema Rh, pero no la proteína Rh50, la tasa
evolucionaria de este gen es de 2.5 veces más lenta que el gen Rh30. (Baptista, H.
2005).
25
El gen Rh50 humano presenta una homología del 46 y 39% con sus antecesores RHAG
de los nematodos y esponja marina, respectivamente.
Las proteínas del Rh son homologas a las proteínas transportadoras de amonio (Amt).
El RH se separó del Amt mediante un salto que ocurrió en especies arcaicas, que las
llevo a funciones distintas. La duplicación del antecesor del Rh es una señal de
especialización que conduce a nuevas funciones y subfunciones de la familia del Rh.
(Baptista, H. 2005).
Las proteínas Rh y Amt coexisten en microorganismos y otros invertebrados, pero no en
los hongos, plantas vasculares o vertebrados. En términos evolutivos, solo tres especies
de primates contienen más de un gen del Rh: chimpancé, gorila y el humano. (Baptista,
H. 2005).
Los genes del RH experimentaron una serie de eventos complejos de recombinación en
un ancestro común al humano, el chimpancé, gorila, monos del viejo y nuevo mundo. El
evento más significativo es la inserción del elemento Alu-Sx en el intron 4 de los genes
RH. El elemnto Alu-Sx esta presente en los humanos en el gen RHCE intron 4. El gen
RHD humano difiere del gen RHCE por la ausencia del Alu-Sx. Adicionalmente el
exón 7 presenta una tasa evolucionaria de sustitución en el humano, que fue introducida
después de la duplicación. (Baptista, H. 2005).
Las proteínas del Rh se expresan exclusivamente en la superficie del eritrocito en
vertebrados superiores y son un tetrámero con dos moléculas de RhAG y dos de Rh (CE
o D). La proteína RhD expresa el antígeno D, mientras que la proteína RhCE expresa
tanto a los antígenos C o c (que involucran la segunda asa extracelular), junto con los
antígenos E y e (que involucran la cuarta asa extracelular) de la misma proteína.
(Baptista, H. 2005).
Los antígenos de la familia Rh aparecen en las etapas tempranas de la diferenciación
eritropoyética. Los antígenos del Rh se expresan a partir de la sexta semana de vida
intrauterina. La función de las proteínas del Rh en el humano aún se desconoce, sin
embargo, se sabe que tienen 20 % de homología con los transportadores de amonio
(Amt) presentes en levaduras, bacterias y algunas plantas. El Rh se encuentra
26
relacionado con otras enfermedades, la enfermedad por Rhnull presenta estomatocitosis,
esferocitosis, aumento de la fragilidad globular y anemia hemolítica moderada. Los
pacientes con leucemia mieloide crónica, metaplasia mieloide, policitemia vera o
mielofibrosis, ocasionalmente presentan doble población de eritrocitos con diferente Rh,
en algunos casos asociados con aberraciones cromosómicas. (Baptista, H. 2005).
2.2.7. Genes de ascendencia indígena
2.2.7.1. La evolución del género homo
El origen del hombre ocurrió en África, presentando características de desarrollo distin-
tivas que le permitieron adaptarse al medio ambiente. De los primates prehumanos Aus-
tralopitecus, se tiene registro fósil de su existencia desde hace más de 4 millones de años;
éstos fueron evolucionando en etapas sucesivas hasta hace aproximadamente un millón
de años, cuando apareció una de sus últimas especies: el Australopitecus/Paranthropus ro-
bustus. Los antecesores de los primates humanos, a la fecha identificados en el Homo ru-
dolfensis, vivieron hace aproximadamente 2.5 millones de años y el último pariente
evolutivo, pero no directo del hombre fue el H. nean-derthalensis, que existió hace
aproximadamente 330-100,000 años. Nuestra especie, Homo sapiens se dispersó en los
últimos 50-100 mil años, como resultado de la acelerada evolución en la complejidad
tecnológica, económica, social y conducta cognitiva de ciertos grupos H. sapiens
africano que permitieron la expansión demográfica favorable.7 El análisis filogenético
sugiere que los alelos de los grupos sanguíneos A y B son antiguos, con divergencia de al
menos 3 millones de años, mucho antes del establecimiento de la agricultura, como
pregonan la teoría de grupos sanguíneos y tipo de alimentación. (Salinas & Suarez ,
2015)
2.2.7.2. Los primeros pobladores de América
El conocimiento de cuándo y cómo llegaron los primeros pobladores americanos es
un tema de teorías variadas, que incluye las migraciones sucesivas de tribus del norte de
Asia por el estrecho de Bering, desde hace más de 30,000 años; también aquéllas a tra-
vés de la costa de Alaska, de migrantes del sudeste asiático e inclusive de las islas del
norte del continente australiano, hace más de 10,000 años, pero también de grupos
27
que abordaron directamente la costa oeste del hemisferio norte del continente y de los
grupos polinesios que llegaron hacia la costa atlántica de Sudamérica e inclusive hay
evidencias de emigración negra en Sudamérica de hace aproximadamente 1 1,500 años.
Esto sin dejar de mencionar el acceso de grupos nórdicos por la Península del Labrador.
(Salazar, C.E. 2002).
Mediante el estudio del DNA mitocondrial se sabe que los indígenas americanos
provienen de una reserva genética común dominante, con combinación de intensidad
variable de más de una mezcla migración asiática. (Baptista, H. A. Rosenfeld, F. &
Trueba, G. 2009)
Diversos estudios de morfología craneofacial han demostrado claras diferencias entre los
modernos indígenas americanos y los pobladores del Este de Asia, donde supuestamente
son descendientes los primeros americanos. (Baptista, H. A. et al 2009)
Los resultados iniciales tienden a demostrar la asociación entre los primeros pobladores de
México, con los paleoamericanos de Brasil o Colombia, pero sin semejanza con los
indígenas americanos modernos, generando la hipótesis de que los paleoamericanos (no
descendientes de las tribus migrantes del noreste asiático) entraron inicialmente a
América por el continente y luego se dispersaron de Norte a Sudamérica. (Baptista, H. A.
et al 2009).
El origen de la humanidad residió en el continente africano y de ahí, mediante una
serie de eventos moleculares, de recombinaciones y mutaciones puntuales, se generaron
evolutivamente los demás fenotipos. Así, el fenotipo ancestral es cDe (Ro) y por ende
más frecuente en la población negroide (> 60%), que en la asiática, europea o
mesoamericana. Mediante un evento de recombinación no recíproca de secuencias del
exón 2 de RHD hacia el alelo ce del gen RHCE se formó el haplotipo CDe (Rl),
frecuente en la población asiática, pero también en la mesoamericana. Mediante un
evento de mutación puntual en el alelo ce, se generó el haplotipo cDE (R2), frecuente en
Mesoamérica y en menor medida en el resto de poblaciones. Finalmente está el fenotipo
CDE (Rz), común en población asiática, seguido de la mesoamericana y
extremadamente raro en europeos y negros. (Baptista, H. A. et al 2009).
28
2.2.7.3. El mestizaje
Durante los últimos 5 siglos, tres poblaciones más o menos diversas: amerindios (un
grupo relativamente homogéneo derivado de la población asiática), europeos
(mayormente españoles y portugueses) y africanos (que fueron traídos como esclavos),
entraron en contacto, interactuaron y se mezclaron. Los datos muestran que casi toda la
población mestiza es dihíbrida o trihíbrida. Esto significa que el mestizaje es el principal
agente microevolucionario en la mezcla de genes. (Baptista, H. A. et al 2009)
Los indígenas actuales presentan características generales predominantes en términos de
grupos sanguíneos: son ABO, predominantemente O, RhD.
Es difícil estudiar a grupos indígenas sin intercambio de genes con grupos mestizos. Sin
embargo, se tiene la experiencia de diferentes autores que han estudiado el fenotipo del
sistema Rh en poblaciones indígenas contemporáneas. De ello resaltan la extremadamente
baja prevalencia de la condición Rh negativo, invariablemente menor a la unidad
porcentual. Los fenotipos CCDee, CcDEe, CcDee, ccDEe, ccDEE, están incluidos dentro de
los cinco más frecuentes en la población indígena y en la mestiza. Los fenotipos que
presentan una frecuencia global menor al 5%, denominado de baja frecuencia, muestran
una amplia variabilidad para cada grupo indígena como una evidencia de mestizaje.
(Baptista, H. A. et al 2009)
2.2.7.4. El ecuador prehispánico
Aquellos hombres primitivos, nómadas que pasando el Estrecho de Bering llegaron a
América, se extendieron por todo el continente. Algunos de esos hombres y mujeres
llegaron hasta lo que hoy es el Ecuador. En aquella época no existían los países como
los conocemos ahora delimitados por fronteras, todo el continente era un solo territorio.
Basándonos en los datos que tenemos respecto al hecho de que los hombres primitivos
eran nómadas, es posible suponer que recorrían largos trechos en busca de lugares
óptimos para su supervivencia. Seguramente preferían las zonas con buen clima y
mucha caza o pesca para asentarse. (Mora, E.2008)
29
Aunque no se conoce con exactitud en que momento llegaron los primeros pobladores a
nuestro territorio, varios estudios e investigaciones realizados hacen suponer que fue
entre 10000 y 15000 años antes de Cristo y que ingresaron por la región andina que une
Colombia con el Ecuador, ya que esta zona ofrecía mejores condiciones climáticas y
abundancia de especies animales y vegetales. Los restos arqueológicos encontrados en
nuestro país han permitido conocer algunos datos sobre las formas de vida de aquellos
hombres. (Mora, E.2008)
2.2.7.5. El Ecuador actual
El Ecuador es un país rico por sus variadas culturas y étnicas, aspectos a los cuales muy
poca o ninguna importancia se los ha dado; por esta razón es un país carente de una
identidad. Debemos diferenciar la cultura de la educación. La educación tiene un
estancamiento tan absurdo en el que no se enseña a diferenciar, respetar y querer las
diferencias étnico-culturales. (Rios, L. 2014).
Somos una sociedad muy influenciable la que con mucha facilidad propuestas culturales
extranjeras. No somos orgullosos de lo nuestro a pesar de que nuestra creación cultural
es muy apreciada en el exterior .Dueños de un país rico en recursos naturales no bien
aprovechados.
Actualmente reconocemos tres tipos de habitantes dentro del país con muchas
semejanzas entre sí pero así mismo con grandes diferencias. Estas son: el costeño, el
serrano del norte y el serrano del sur, los cuales tienen un desarrollo socio-cultural
propio. Es tan evidente la diferencia que, simplemente, al escuchar su forma de hablar
se los puede identificar. Esto, añadido a la distribución político- geográfico, da origen a
un sentido regionalista. (Rios, L. 2014).
El ecuatoriano ama sobre todas las cosas a su familia a tal punto que el trabajo y la
producción pasa a un segundo plano.
30
2.2.8. Microtécnica de aglutinación en gel
2.2.8.1. Fundamento
En la década de los ´80, el Dr. Yves Lapierre desarrolla y patenta el método de
hemaglutinación en gel, el cual fue comercializado por la empresa Diamed-Suiza a
partir del año 1988. (Golffed, J. 2014).
DiaMed Suiza fue fundada en 1977 por un pequeño grupo de expertos en diagnóstico de
laboratorio para el desarrollo y fabricación de sistemas de prueba destinada a
proporcionar a los laboratorios la facilidad de uso, seguridad y fiabilidad. En el año
2007 Bio-Rad Laboratories, una empresa multinacional vinculada a la investigación
biológica fundada en 1952, adquiere el paquete accionario de DiaMed Holding AG. En
el Uruguay DiaMed hizo su arribo en el año 1995 a través de su representante Saiden
S.A. (Golffed, J. 2014).
El Sistema DiaMed de Micro Tipificación en Gel revolucionó el trabajo en los
laboratorios de inmunohematología de los grupos sanguíneos. Ha sido desarrollado
tanto para la determinación de grupo sanguíneo, investigación, identificación, titulación
de anticuerpos irregulares y pruebas de compatibilidad sanguínea pretransfusionales en
un nuevo formato cuya lectura no admite dudas de interpretación y más aún permite
nuevas lecturas hasta 48 horas después de la ejecución de la prueba. (Golffed, J. 2014).
El catálogo ID-System de Bio-Rad reúne 65 variedades de tarjetas de gel con una gama
que abarca la determinación de grupos sanguíneos ABO y Rh D para donantes,
pacientes y recién nacidos, prueba inversa, fenotipo Rh, Kell, antígenos simples, test de
coombs directo, investigación e identificación de anticuerpos irregulares, pruebas de
compatibilidad y estudios en medio enzimático entre otras aplicaciones. (Golffed, J.
2014).
31
2.2.8.2. Principio del método
La prueba se basa en la exclusión en base al tamaño de los elementos reactantes que
tiene lugar en el seno de una matriz inmunológicamente inerte.
El ID MICROTYPING SYSTEM DE DIAMED incorpora dentro de la columna de gel
el reactivo conteniendo: un anticuerpo específico, NaCl o suero antiglobulina humana.
Los hematíes sensibilizados reaccionan con el antisuero específico durante la
centrifugación dejando los líquidos reactantes (incluyendo cualquier globulina no
fijada) en la cámara de reacción. (Golffed, J. 2014).
Solamente los hematíes ingresan en la matriz de gel. Los hematíes no sensibilizados, en
la fase de centrifugación de la prueba, forman un “punto” o “botón” en la base del
microtubo en tanto que aquellos que hayan sido aglutinados se distribuirán a lo largo de
la columna de gel. (Golffed, J. 2014).
Según sea la intensidad de la reacción, los hematíes podrán ocupar la parte superior de
la columna de gel o dispersarse a lo largo de la misma. (Golffed, J. 2014).
2.2.8.2.1. Forma de los microtubos
Figura 4. Forma de los microtubos
Fuente: http://www.donasangre.uy/wp-
content/uploads/2014/07/Microtecnica_de_Aglutinacion_en_Gel.pdf
32
Los microtubos están incorporados en una pieza integral de 70 milímetros de largo por
53 milímetros de alto, denominada “tarjeta” (ID-Card). La extremidad superior de los
mismos es ancha (4 milímetros de diámetro) de manera tal de permitir en él la
incubación de los reactantes. (Golffed, J. 2014).
Al extremo superior se lo conoce también como “CÁMARA DE REACCIÓN”.
La parte intermedia o “COLUMNA”, es larga y estrecha, lo cual permite en la fase de
centrifugación un contacto prolongado de los hematíes con el gel. (Golffed, J. 2014).
El fondo del microtubo tiene aspecto “CÓNICO”. Cuando los hematíes atraviesan la
columna de gel durante la fase de centrifugación forman un punto en el fondo del
mismo según sea el gradiente de aglutinación. (Golffed, J. 2014).
2.2.8.2.2. Aspecto de la tarjeta composición del gel
El gel utilizado es el SEPADEX G ultra fino y se presenta en tres modalidades básicas:
Gel neutro. Sin antisuero específico. Contiene NaCl.
Gel específico. Mezcla del gel y antisuero especifico.
Gel Antiglobulina Humana. Mezcla de gel y suero antiglobulina humana. (Golffed, J.
2014).
2.2.8.2.3. Volúmenes a dispensar
Se trata de volúmenes de suspensiones de hematíes y plasma (o suero) muy pequeños
dispensados por pipetas que descargan volúmenes prefijados. 50 µl de suspensión de
hematíes y 25 µl de suero o plasma. (Golffed, J. 2014).
En el sistema ID es importante la máxima precisión en el pipeteo. Se respetará
rigurosamente el orden para dispensar los reactantes: En primer lugar sosteniendo la
pipeta en un ángulo de 45° y con el puntero apuntando a la pared lateral del microtubo;
Se verterán 50µl de la suspensión de hematíes (previamente preparada en el diluyente
que corresponda) y en segundo lugar, manteniendo la pipeta en posición vertical y
33
próxima a la boca del microtubo, se verterán 25 µl del suero o plasma en estudio.
(Golffed, J. 2014).
2.2.8.2.4. Condiciones de incubación
Las tarjetas se colocan en el incubador seco de tarjetas, en el cual las ubicamos cuando
la temperatura requerida de la reacción sea de 37° Celsius. (Golffed, J. 2014).
El tiempo de incubación es de 15 minutos.
2.2.8.2.5. Centrifugación
La centrifugación debe ser constante a 85g durante 10 minutos, siendo éste un paso
crítico en la técnica.
Una vez finalizada la misma, la lectura macroscópica permite distinguir todo el rango de
aglutinaciones: desde los resultados negativos (-) hasta toda la variedad de resultados
positivos que se expresan en forma de cruces según su intensidad en: 1+,2+,3+,4+ y dp
(doble población).
Un exceso o un defecto en la fuerza g aplicada arrojará resultados falso negativo o falso
positivo respectivamente.
Dado que la fuerza “g” se expresa en “rpm” (revoluciones por minuto) y que
disponemos de centrífugas con cabezales para 6,12 y 24 tarjetas, las “rpm” varían para
cada equipo. (Golffed, J. 2014).
2.2.8.2.6. Ventajas de la Microtécnica Id-Card
Se trata de una técnica estandarizada en sus procedimientos lo cual conduce a
reacciones e interpretación de los resultados en forma OBJETIVA. La prueba de
Coombs, sin necesidad de realizar los lavados (que si requiere si se hiciera en la clásica
prueba en “tubo”) disminuye las posibilidades de errores técnicos y aumenta la
sensibilidad de la prueba.
34
La técnica de gel tiene la capacidad de separar los hematíes del fluido que lo rodea.
Durante la centrifugación de la tarjeta, los hematíes son removidos fuera de la
suspensión por acción de la fuerza centrífuga e ingresan al gel, en tanto que las
inmunoglobulinas no conjugadas permanecen sobre el gel. (Golffed, J. 2014).
En forma simultánea se pueden procesar gran cantidad de muestras y por tratarse de una
microtécnica se utilizan pequeños volúmenes de reactantes. La lectura de las pruebas se
realiza en forma MACROSCÓPICA y también pueden ser leídas por lectores
automáticos. (Golffed, J. 2014).
2.2.8.2.7. Patrones de lectura
Figura 5. Patrones de lectura
Fuente: Diana Ortiz
REACCIÓN 4+ Las células rojas aglutinadas forman una banda sólida
en la parte superior del gel.
REACCIÓN 3+ Las células rojas aglutinadas comienzan a dispersarse por la columna
de gel y se concentran en el tercio superior de la columna de gel.
35
REACCIÓN 2+ Las células rojas aglutinadas comienzan a dispersarse por la columna
de gel y se las observa ocupando toda su longitud.
REACCIÓN 1+ Las células rojas aglutinadas se dispersan por el gel y se concentran en
el tercio inferior del microtubo.
REACCIÓN NEGATIVA Todas las células rojas atraviesan el gel y forman un botón
celular bien definido en la base del microtubo. DOBLE POBLACIÓN. La reacción de
doble población también conocida como campo mixto se caracteriza por una banda de
células rojas aglutinadas en la parte superior de la columna de gel en tanto que las
células no aglutinadas se depositan en el fondo del microtubo.
2.2.8.3. Otras consideraciones
Coágulos, fibrina, detritus y otros artefactos pueden atrapar hematíes en la parte
superior del gel, induciendo a lecturas e interpretaciones erróneas. Por tal motivo se
solicita que las muestras a analizar sean extraídas mediante una correcta técnica (exenta
de hemólisis) en tubos con EDTA (de preferencia). El EDTA es una solución de sales
sódicas y potásicas que se comportan como poderosos anticoagulantes ya que inhiben la
participación del ión Ca++ en la cascada de la coagulación de la sangre. También se lo
conoce como “secuestreno” dado que actúa secuestrando al ión Ca++ (Golffed, J. 2014).
2.2.8.3.1. Importancia del complemento
Si bien las instrucciones de trabajo impartidas en los insertos de las diferentes “ID-
Cards” dan por indistinto el uso de suero o plasma, sabido es que el Complemento es
necesario para la reacción de algunos anticuerpos poco frecuentes. El Complemento se
conserva en cantidades suficientes cuando la muestra de suero es mantenida a 4°C
durante dos semanas, pero en pacientes, la conservación es variable y debe considerarse
siempre inferior. Por lo general se recomienda un tiempo que no exceda las 72 horas de
extraída la muestra (habiendo separado hematíes del suero por centrifugación) y si el
estudio se realizare más allá de ese tiempo, la muestra de suero debe congelarse en
alícuotas a -30°C durante un plazo no superior a los tres meses. Se debe utilizar suero en
lugar de plasma por el hecho de que se requieren iones Ca++ y Mg++ para que
intervengan como catalizadores de la cascada de activación del Complemento. La lisis
inmunológica de los hematíes es signo de la presencia de aloanticuerpos, por lo tanto el
36
suero a analizar ha de estar libre de hemoglobina. En caso de que la presencia de
hemoglobina libre en el suero en estudio sea inevitable, se debe comparar el color
sobrenadante de la prueba con el color presente en el suero problema separado
inicialmente de los hematíes. 21 Se desaconseja la congelación y descongelación de
sueros, dado que durante esa práctica, se destruyen proteínas e inmunoglobulinas. Por
tal motivo, se sugiere conservar los sueros en estudio en forma de alícuotas congeladas.
(Golffed, J. 2014).
2.2.8.3.2. Diluyentes
Diluyente 1: “ID-Diluent 1” es una solución de bromelina modificada, con actividad
enzimática estabilizada por un prolongado período. Se la utiliza para preparar
suspensiones de hematíes destinadas a la determinación de grupos sanguíneos en
tarjetas de gel con reactivo de origen humano y como aditivo para pruebas enzimáticas
con hematíes no tratados para detección de anticuerpos y pruebas de compatibilidad.
Las enzimas proteolíticas modifican los antígenos eritrocitarios con lo que aumentan la
reactividad de algunos sistemas de grupo sanguíneo (en especial los del sistema Rh),
aunque suprimen otros como los antígenos de los sistemas MNSs, Duffy y Xg.
(Golffed, J. 2014).
Las enzimas más utilizadas en la serología de grupos sanguíneos son la papaína y la
bromelina. La papaína suele emplearse para el tratamiento enzimático de los hematíes
antes de su uso, en tanto que la bromelina se utiliza además como reactivo aditivo.
(Golffed, J. 2014).
Diluyente 2: Liss modificada para suspensiones de hematíes. La solución de baja fuerza
iónica (Liss) aumenta la tasa de asociación de anticuerpos, con lo que potencia las
reacciones antígeno – anticuerpo. (Golffed, J. 2014).
“ID-Diluent 2” es una solución modificada de baja fuerza iónica destinada a preparar
suspensiones de hematíes al 5% para determinación de grupos sanguíneos en tarjetas de
gel con reactivo de origen monoclonal así como suspensiones de hematíes al 0,8% para
pruebas de compatibilidad, pruebas de la antiglobulina humana, y hematíes de prueba
preparados en el laboratorio. (Golffed, J. 2014).
37
CAPÍTULO III
3. METODOLOGÍA
3.1. Tipo de estudio
El diseño de este estudio es descriptivo de corte transversal, realizado en 161 personas.
A los cuales se realizó encuestas y se extrajo 5 cc de sangre para obtener suero para
realizar determinación de antígeno D, Grupo ABO, RH, la muestra se trasladó
conservando la cadena de frio al laboratorio de Genética de la Facultad de ciencias
Médicas donde se procesó las muestra mediante técnica de Aglutinación en Gel.
3.2. Nivel de Investigación
Estudio tendrá un nivel descriptivo de corte transversal
3.3. Técnicas e Instrumentos de Investigación
La técnica de toma de muestra y determinación de se realizó aplicando antígeno D,
Grupo ABO normas Bioéticas, controles de calidad, calibraciones para determinar el
nivel de antígeno D mediante Sistema DiaMed de Micro Tipificación en Gel, el
laboratorio de Genética de la Facultad de Ciencias Médicas.
3.4. Universo y Muestra
3.4.1. Universo
Para la realización de la investigación sobre “Prevalencia del antígeno D del factor
Rh, como marcador de genes de ascendencia indígena mediante la técnica de
aglutinación en gel en donantes Quito, en el laboratorio de Genética e
Inmunología de la Facultada de Ciencias Médicas de la Universidad Central del
Ecuador.” se tomó como universo a todas las personas que donaron sangre en el
cantón Quito.
38
3.4.2. Muestreo
La muestra fue de 161 personas donantes.
3.5. Criterios de Inclusión
Ser donantes de sangre
Ser residente del cantón Quito
3.6. Criterios de Exclusión
Haber recibido trasfusión sanguínea
3.7. Técnica e Instrumento de recolección de datos
3.7.1. Técnica
Se utilizó Kit comercial Sistema DiaMed de Micro Tipificación en Gel para la
determinación de grupos sanguíneos ABO y Rh D-
Se obtuvieron por venopunción de la vena periférica 5 mL de sangre y se depositaron en
tubos con EDTA.
Se realizaron prueba de autoaglutinación a todas las muestras (10 μL de sangre entera
con 50 μL de solución salina fisiológica mezcladas sobre un portaobjetos).
Las muestras fueron centrifugadas a 3.500 r.p.m. durante 10 minutos.
Del precipitado del tubo (eritrocitos) se tomó una muestra de 10 μL que fue diluida en
90 μL de una solución de Liss (ID-Diluent 2 Diamed®).
De la dilución resultante, se tomaron 3 muestras de 10 μL cada una y se depositaron en
3 pocillos de la tarjeta de salina de gel (NaCl, enzyme test and cold agglutinins
Diamed®) para ID-Micro Typing System.
39
Al primer pocillo se añadieron y mezclaron 10 μL del anticuerpo anti D 1.2 (KABB
Korea animal Blood Bank),
En el segundo se añadió anticuerpo con control positivo (DMS Laboratories, Inc)
En el tercero no se añadió nada actuando como control negativo.
Las tarjetas salinas fueron incubadas a 37 ºC durante 15 minutos y se centrifugaron a
1.050 r.p.m. durante 10 minutos.
Se procedió a la lectura de cada columna de la tarjeta de gel, otorgando valores de 0 a
+4 según corresponda.
3.8. Plan de Análisis
El análisis que se utilizara para la elaboración de esta investigación será de tipo
cuantitativo mediante estadística descriptiva con tablas, gráficos medidas de tendencia
central promedios, medianas, porcentajes y medidas de dispersión con desvíos estándar,
análisis de Chi cuadrado.
3.9. Consideraciones Éticas
Para la recolección de datos se contó con consentimiento informado de personas
donadoras de sangre, bajo normas de manejo ético, moral y profesional. Siguiendo lo
estipulado en la cuarta carta de Helsinki.
2.3. Variables
Variables
Independiente:
Antígeno D
Dependiente:
Ascendencia
Indígena
Intervinientes:
Sistema
ABO
Sexo
Etnia
Edad
Grupo
Rh
40
CAPÍTULO IV
4. ANÁLISIS DE RESULTADOS
La prevalencia de antígeno D en donantes de Quito es de 3,7 por 100000 habitantes
Tabla Nº 2. Distribución de personas donantes según sexo
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado Por: Diana Ortiz Flores
Gráfico Nº 1. Distribución de personas según sexo
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado por: Diana Ortiz Flores
Análisis e interpretación
Se visualiza que el sexo más frecuente fue el masculino con 58,39% y femenino con el
41,61%, aunque no hubo diferencia estadísticamente significativa p=0,44.
58,39%
41,61% FEMENINO
MASCULINO
SEXO FRECUENCIA PORCENTAJE
FEMENINO 94 58,39
MASCULINO 67 41,61
Total general 161 100,00
41
Tabla Nº 3. Distribución de personas donantes según edad
EDAD FRECUENCIA PORCENTAJE
5-9. 3 1,86
10-19. 7 4,35
20-29 21 13,04
30-39 54 33,54
40-49 13 8,07
50-59 17 10,56
60-69 23 14,29
70-79 10 6,21
>80 13 8,07
TOTAL 161 100,00
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado Por: Diana Ortiz Flores
PROMEDIO 46,11 ± 18,57 AÑOS
Gráfico Nº 2. Distribución de personas donantes según edad
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado por: Diana Ortiz Flores
Análisis e interpretación
Que un 33.54 % de personas tienen 30 a 39 años siendo el grupo etario más frecuente
seguido de los de 60 a 69 años con el 14,29 % y seguido de los de 20-29 años con
13,04 %. No se encontró diferencia estadísticamente significativa entre los grupos
etarios p=0,23.
1,86
4,35
13,04
33,54
8,07
10,56
14,29
6,21
8,07
0 5 10 15 20 25 30 35 40
5-9.
10-19.
20-29
30-39
40-49
50-59
60-69
70-79
>80
PORCENTAJE
AÑ
OS
DISTRIBUCION DE PERSONAS POR EDAD
42
Tabla Nº 4. Distribución de personas donantes según grupo ABO.
GRUPO ABO FRECUENCIA PORCENTAJE
A 49 30,43
AB 1 0,62
B 18 11,18
O 93 57,76
Total general 161 100,00
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado Por: Diana Ortiz Flores
Gráfico Nº 3. Distribución de personas según grupo ABO.
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado por: Diana Ortiz Flores
Análisis e interpretación
Se observa que 57,76% de las personas donantes presentan grupo O, el 30,43% son
grupo A, el 11,18% grupo B y el 0,62% grupo AB.
30,43%
0,62% 11,18%
57,76%
A
AB
B
O
43
Tabla Nº 5. Distribución de personas donantes según grupo RH.
GRUPORH FRECUENCIA PORCENTAJE
NEGATIVO 9 5,59
POSITIVO 152 94,41
Total general 161 100,00
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado Por: Diana Ortiz Flores
Gráfico Nº 4. Distribución de personas según grupo RH
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado por: Diana Ortiz Flores
Análisis e interpretación
Se reporta que el 94,41 % tiene grupo RH positivo y el 5,59 % son RH negativo.
5,59%
94,41%
NEGATIVO
POSITIVO
44
Tabla Nº 6. Distribución de personas donantes según antígeno D
ANTIGENO D FRECUENCIA PORCENTAJE
AUSENTE 9 5,59
PRESENTE 152 94,41
Total general 161 100,00
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado Por: Diana Ortiz Flores
Gráfico Nº 5. Distribución de personas según antígeno D
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado por: Diana Ortiz Flores
Análisis e interpretación
Se reporta que el 94,41 % tiene antígeno D pero el 5,59 % no lo tiene, lo que
demuestra que la mayoría de personas donantes tiene antígeno D en la ciudad de Quito.
5,59
94,41
0,00 20,00 40,00 60,00 80,00 100,00
AUSENTE
PRESENTE
45
Tabla Nº 7 Distribución de personas según sexo y antígeno D
Cuenta de sexo
Antígeno D
NEGATIVO POSITIVO Total
general
FEMENINO 3 91 94
MASCULINO 6 61 67
Total general 9 152 161
Xi 2p no estadísticamente significativa p=0,22
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado Por: Diana Ortiz Flores
Gráfico Nº 6 Distribución de personas según sexo y antígeno D
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado por: Diana Ortiz Flores
Análisis e interpretación
Se observa que aunque numéricamente hay más presencia del antígeno D en las mujeres
que en los hombres, esta diferencia no es estadísticamente significativa.
3 6
91
61
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
FEMENINO MASCULINO
NEGATIVO POSITIVO
46
Tabla Nº 8. Distribución de personas donantes según la etnia que refiere las personas
ETNIA FRECUENCIA PORCENTAJE
Afro descendiente 7 4,35
Caucásica 12 7,45
Indígena 7 4,35
Mestiza 135 83,85
Total general 161 100,00
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado Por: Diana Ortiz Flores
Gráfico Nº 7. Distribución de personas según etnia que refiere las personas
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado por: Diana Ortiz Flores
Análisis e interpretación
Se reportó que el 83,85% de personas donantes refieren ser de etnia Mestiza mientras
que el 7,45% se consideran caucásicos, el 4,35% se consideran Indígena y afro
descendientes.
4,35
7,45
4,35
83,85
0 20 40 60 80 100
AFRO DESENDIENTE
CAUCASICA
INDIGENA
MESTIZA
PORCENTAJE
47
Tabla Nº 9. Distribución de personas donantes según genotipo
GENOTIPO FRECUENCIA PORCENTAJE
Dominante homocigoto 92 57,14
HETEROCIGOTO 60 37,27
Homocigoto recesivo 9 5,59
Total general 161 100,00
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado Por: Diana Ortiz Flores
Gráfico Nº 8. Distribución de personas según genotipo
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado por: Diana Ortiz Flores
Análisis e interpretación
Se aprecia que el 57,14 % de las personas donantes tienen genotipo Homocigoto
Dominante, el 5,59 % son Homocigotos recesivos y el 37,27 % son Heterocigotos.
57,14
37,27
5,59
Homocigoto Dominante HETEROCIGOTO Homocigoto Recesivo
48
Tabla Nº 10. Distribución de personas donantes según ascendencia
ASCENDENCIA FRECUENCIA PORCENTAJE
Afro descendiente 9 5,59
Caucásica 10 6,21
Indígena 92 57,14
Mestizos 50 31,06
Total general 161 100,00
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado Por: Diana Ortiz Flores
Gráfico Nº 9. Distribución de personas según tipo de ascendencia
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado por: Diana Ortiz Flores
Análisis e interpretación
Según la información resultante de la presencia de antígeno D, la ascendencia de la
mayoría de la población estudiada es indígena, con el 57.14%, siendo Mestizos solo el
31.06% de las personas, el 6,21 % tiene ascendencia caucásica y 5,59 tiene ascendencia
Afro descendientes.
5,59 6,21
57,14
31,06
afro desendiente Caucasica Indigena Mestizos
49
Tabla Nº 11. Distribución de personas donantes según ascendencia y presencia de
antígeno D
Ascendencia
Antígeno D Total
general
AUSENTE PRESENTE
afro descendiente 0 9 9
Caucásica 9 0 9
Indígena 0 92 92
Mestizos 0 51 51
Total general 9 152 161
Fuente: Instrumento de evaluación
Elaborado Por: Diana Ortiz Flores
Análisis e interpretación
Se Observa que la mayoría de personas donantes con ascendencia indígena presentan
antígeno D 92 de 161 personas.
50
4.1. Discusión
El presente trabajo describe los resultados obtenidos durante un estudio transversal
llevado a cabo en 161 personas donantes tendiente a conocer la ascendencia indígenas
de las personas.
Se visualiza que el sexo más frecuente fue el masculino con 58% y femenino con el
42%, aunque no hubo diferencia estadísticamente significativa p=0,44
Que un 33.54 % de personas tienen 30 a 39 años siendo el grupo etario más frecuente
seguido de los de 60 a 69 años con el 14,29 % y seguido de los de 20-29 años con
13,04 %. No se encontró diferencia estadísticamente significativa entre los grupos
etarios p=0,23.
Se observa que 58% de las personas donantes presentan grupo O, el 30 % son grupo A,
el 11% grupo B y el 1 % grupo AB.
Se reporta que el 94 % tiene grupo RH positivo y el 6 % son RH negativo. Parecido a
lo reportado por Bencomo A 2005 en otro estudio, en 8 434 donantes de sangre que
incluía los 3 grupos poblacionales, se encontró que el Rh D positivo resultó el más
frecuente con 91,19 %; el menos frecuente el Rh D débil con 0,30 %; y el resto (8,80 %)
fue Rh D negativo, similar a lo reportado en otras poblaciones.
Se reporta que el 94,4 % tiene antígeno D pero el 5,59 % no lo tiene, lo que demuestra
que la mayoría de personas donantes tiene antígeno D en la ciudad de Quito. El antígeno
D negativos se ha encontrado en todas las poblaciones probadas. El antígeno D, sin
embargo, se ha encontrado sólo en las poblaciones de los pueblos indígenas de las
Américas y Asia oriental y la gente con alguna ascendencia en esas poblaciones
reportado por Wei 2013. Algunos grupos en América del sur tienen una frecuencia
relativamente alta de antígeno D positivo. Una muestra del Pueblo Kaingang y de
Brasil fue del 49% antígeno D positivo. Muestras de otros grupos de Brasil y
Venezuela tenían el 14% al 36% antígeno D positivo reportado por Poole, J 1999.
51
Similar a lo reportado por Junqueira, P en 2002 en los grupos en Guatemala y México
tienen 20% a 22% antígeno D positivo en muestras de grupos nativos americanos en los
Estados Unidos y Primeras Naciones los grupos en Canadá tienen 4% a 11% antígeno
D y Gershowitz, H 1959 indica aunque la incidencia de antígeno D positivo es
relativamente alto en Esquimales siberianos 38% y Gente aleut (la incidencia de
antígeno d positivo 49 % en aleutas es comparable a los niveles de América del sur), se
produce en una frecuencia mucho más baja (menos de 0.5%) entre los Esquimales de
Alaska y no se ha encontrado en los Inuit de Canadá.
Se reportó que el 83,85% de personas donantes refieren ser de etnia Mestiza mientras
que el 7,45% se consideran caucásico, el 4,35% se consideran Indígena y afro
descendientes, aunque se ve que el 57,14 % de las personas donantes tienen genotipo
Homocigoto Dominante, el 5,59 % son Homocigotos recesivos y el 37,27 % son
Heterocigotos.
Se Observa que la mayoría de personas donantes con ascendencia indígena presentan
antígeno D 92 de 152 personas y según la información resultante de la presencia de
antígeno D la ascendencia la mayoría de la población es indígena con el 57.14%,
siendo Mestizos solo el 31.06% de las personas, el 6,21 % tiene ascendencia caucásica y
5,59 tiene ascendencia Afro descendientes. Similar a lo dicho por González R 1998 La
distribución de los grupos sanguíneos ABO es diferente entre los diversos grupos
étnicos. Entre los caucásicos y los africanos, la diferencia fundamental radica en que el
grupo A es más frecuente en los caucásicos y el grupo B en los africanos; la secuencia
en el orden de frecuencia es O, B y AB. Las frecuencias de los grupos A2 y A2B en las
poblaciones africanas y en la población negra cubana, resultaron similares. Las
observaciones realizadas en estos estudios son parecidas a las comunicadas previamente
entre caucásicos y africanos.
52
4.2. Conclusiones
Se examinó que la prevalencia fenotípica del antígeno D del sistema sanguíneo
Rh determinado con una tipificación ABO y RH en Gel, en donantes quito, es
de 3.7 por 100000 habitantes con lo que podemos concluir que la mayoría de la
población tiene ascendencia indígena y que los grandes cambios en la población
tanto físicos como culturales se han producido por las grandes oleadas
migratorias a nivel mundial.
Se pudo describir que la prevalencia de distribución del antígeno D del sistema
sanguíneo Rh, es de 94,4% y solamente el 5.5% no lo tienen, lo que demuestra
que la mayoría de personas tienen antígeno D en la ciudad de quito.
Se estable que la mayoría de personas donantes con ascendencia indígena
presentan antígeno D 92 de 161 personas y según la información resultante de la
presencia de antígeno D la ascendencia de la mayoría de la población
ecuatoriana es indígena con el 57.14%, siendo Mestizos solo el 31.06% de las
personas, el 6,21 % tiene ascendencia caucásica y 5,59 tiene ascendencia Afro
descendientes.
Se determinó que el sexo más frecuente en donantes voluntarios fue el
masculino con 58% y femenino con 42%, aunque la diferencia estadística no es
significativa, puesto que los dos grupos presentan antígeno D con una
distribución semejante.
53
4.3. Recomendaciones
Realizar más investigaciones de la ascendencia indígena utilizando el antígeno D en el
resto del país.
Realizar determinaciones de los genotipos de antígeno D para tener un mejor
entendimiento de las migraciones ocurridas en el país.
Integrar en una cultura a la población en la no discriminación por razas ya que solo
existen etnias porque la humanidad es el 99.9% genéticamente idéntico.
54
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59
ANEXOS
60
Anexo A. Operacionalización de Variables
VARIABLE DEFINICIÓN
CONCEPTUAL
DEFINICIÓN
OPERACIONAL
INDICADORES RANGO TÉCNICA
INDEPENDIENTE
ANTÍGENO D
Proteína integral de la
membrana
aglutinógena de los
glóbulos rojos.
Tiene una gran
importancia
antropológica, se puede
estudiar diversas razas y
sus interrelaciones
evolutivas, a través del
análisis de la distribución
poblacional de los
diversos antígenos,
determinando su
predominancia en cada
raza humana y haciéndose
comparaciones.
Su importancia clínica
Presencia de
aglutinación.
Positivo
Negativo
Método de
aglutinación en
gel
61
radica en su gran
inmunogenicidad, en las
transfusiones de sangre,
en los trasplantes y en los
embarazos.
DEPENDIENTE
ASCENDENCIA
INDÍGENA
Población
descendiente de la
población originaria
del continente.
Familias de pueblos, que
comparten una ubicación
geográfica, algunos
rasgos culturales y en
ciertos casos, una lengua
y una historia común.
Antígeno D y
grupo ABO
Caucásico.
Mestizo.
Indígena.
Afrodescendiente.
Método de
aglutinación en
gel
62
INTERVINIENTES
SISTEMA ABO
Glicolípidos y
glicoproteínas que
tienen capacidad
antigénica y dan
características propias
al glóbulo rojo
Garantizar el éxito de las
transfusiones.
Presencia de
aglutinacion.
A+/-
B+/-
AB+/-
O+/-
Método de
aglutinación en
gel
4. SEXO
Característica sexual
genética que diferencia
a hombres de mujeres.
Conjunto de
características físicas,
biológicas, anatómicas y
fisiológicas de los seres
humanos que los definen
como hombre o mujer.
Órganos sexuales
externos.
Masculino
Femenino
Registro
63
5. ETNIA. Sinónimo de nación,
entendida como el lazo
cultural que une a una
población o grupo
humano.
La etnia implica
compartir tradiciones,
lengua, religión, historia,
y costumbres, haciendo a
sus integrantes, partícipes
de una comunidad de
vida, con proyección
hacia el futuro y valores
en común.
Autodeterminación.
Caucásico.
Mestizo.
Indígena.
Afrodescendiente
Registro
6. Edad Vocablo que permite
hacer mención al
tiempo que ha
transcurrido desde el
nacimiento de un ser
vivo.
Tiempo de existencia
desde el nacimiento.
Años
Desde 5 años a 90
años.
Registro
64
Anexo B. Fotografías
Anexo B.1. Tarjeta en Gel par grupo factor ABO
Anexo B.2. Principios de la Tarjeta en Gel
65
Anexo C. Instrumento de Recolección de datos
DE TESIS: PREVALENCIA DEL ANTÍGENO D, COMO MARCADOR DE
ASCENDENCIA INDÍGENA
Fecha:_____________________________
Nombre Código:
Edad _______
MARCAR CON UNA X LA RESPUESTA:
1). SEXO: Masculino___ Femenino ____
2). GRUPO SANGUINEO: A___ B___ AB___ O___
3). GRUPO RH, RESULTADO DE PRUEBA ANTIGENO D : Positivo
____ Negativo ___
4). ETNIA SEGÚN PERSONA:
Caucásica: _____
Indígena: _____
Mestiza: _____
Afrodecendiente: ____
5). GENOTIPO:
Homocigoto recesivo: ____
Heterocigoto: ____
Homocigoto dominante: ____
6). ASCENDENCIA:
Caucásica: ____
Indígena: ____
Mestiza: ____
Afrodecendiente: ____
66
Fecha: ………………………………………..
Anexo D. Formulario de consentimiento informado
DE TESIS PREVALENCIA DEL ANTÍGENO D COMO MARCADOR DE
ASCENDENCIA INDÍGENA
Estamos invitando a usted y a otras personas de su comunidad a participar de un
proyecto de investigación científica que permitirá tener un conocimiento de la
ascendencia de la población ecuatoriana para lo cual llenara una encuesta y se le sacara
5 ml de sangre por venopunción.
La información obtenida es confidencial y anónima: en ningún lugar se hará público el
nombre de las personas participantes ni sus características. Sólo serán publicados datos
generales para el estudio de la tesis.
Su participación será muy agradecida y contribuirá a conocer la ascendencia indígena
en el país. Si usted acepta participar de este estudio, le agradeceremos que preste su
conformidad por escrito completando y firmando el Formulario
Yo,……………………… ……………………Acepto donar una muestra de sangre de
5 cc y proveer información general para el proyecto explicado arriba, de cuyos
objetivos fui informado.
Nombre y apellido No.CI Firma
67
