APLICACIÓN DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR EN EL

DIAGNÓSTICO ANATOMO-PATOLÓGICO:

EL MODELO DE LOS SARCOMAS HUMANOS Y

OTROS TUMORES PEDIÁTRICOS

DR. SAMUEL NAVARRODEPTO PATOLOGIA, UNIVERSITAT DE VALENCIAHOSPITAL CLINICO UNIVERSITARIO

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

• VALOR DIAGNÓSTICO

• VALOR PRONÓSTICO

• DIANAS TERAPÉUTICAS

APLICACIONES

• Tumor de Ewing/PNET

• Rabdomiosarcoma alveolar

• Tumor desmoplásico de células redondas

• Sarcoma sinovial

• Liposarcoma mixoide/ de células redondas

• Sarcoma de células claras

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

VALOR DIAGNÓSTICO

Ewing/PNET

Ewing

Ewing/PNET

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

PATRON GENETICO-MOLECULAR Ewing/PNET

Translocación Fusión génica

t(11;22)(q24;q12) ______________ FLI-1 (1q 24)EWS (22q12)

t(21;22)(q22;q12) ______________ ERG (21q22)EWS (22q12)

t(7;22)(p22;q12) ______________ ETV1 (7p22)EWS (22q12)

t(17;22)(q22.2;q12) ____________ E1A-F(17q12)EWS (22q12)

11 22 der (11) der (22)

TUMOR DE EWING/PNET

der(11)

der(22)

t(11;22)(q24;q12) EWS-FLI 1

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

t(11;22)(q24;q12)

11

22der 11

der 22

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

Ewing/PNET

TUMOR DE EWING/PNET

EWS_7 Fli1_5

t(11;22)(q24;q12) EWS-FLI 1

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

Rabdomiosarcoma

Rabdomiosarcoma

Rabdomiosarcoma

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

PATRON GENETICO-MOLECULAR

Rabdomiosarcoma Alveolar

Translocación Fusión génica

T(2;13)(q35;q14) _____________ PAX3 (2q35)FKHR (13q14)

T(1;13)(q35;14)_____________ PAX7 (1p36)FKHR (13q14)

RABDOMIOSARCOMA ALVEOLAR

2 der(2) der(13)13

t(2;13)(q35-37;q14) PAX 3-FKHR

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

RABDOMIOSARCOMA ALVEOLAR

Actin

PAX7/FKHR

PAX3/FKHR

M 1 2 3 4 5 6 C

PAX 3 FKHR

PAX 7 FKHR

B

t(2;13)(q35-37;q14) PAX 3-

FKHR

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

TUMOR DESMOPLÁSICO DE CÉLULAS REDONDAS

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

11 22 der (22)der (11)

EWS exon 7 WT1 exon 8

t(11;22)(p13;q12) EWS-WT1

TUMOR DESMOPLÁSICO DE CÉLULAS REDONDAS

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

SARCOMA SINOVIAL

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

X 18 der (X) der (18)

t(X;18)(p11;q11) SYT-SSX1 SYT-SSX2 SYT-SSSX4

der(18)t(X;18)(D18Z1+;wcpX+)

SARCOMA SINOVIAL

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

SYT -SSX

ACTINA(Control)

Control SYT/SSX

01B9679

SYT -SSX

PBGD(Control)

Control SYT/SSX

01B9679

SYT -SSX

Control SYT/SSX

01B9679

SYT -SSX

PBGD(Control)

Control SYT/SSX

01B9679

Tejido crioconservadoTejido crioconservado Tejido en parafinaTejido en parafina

SYT SSX1

t(X;18)(p11;q11) SYT-SSX1 SYT-SSX2 SYT-SSSX4

SARCOMA SINOVIAL

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

LIPOSARCOMA MIXOIDE/DE CELULAS REDONDAS

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

12 16 der (12) der (16)

t(12;16)(q13;p11) CHOP-

TLS

LIPOSARCOMA MIXOIDE/DE CELULAS REDONDAS

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

t(12;16)(q13;p11) CHOP-TLS

LIPOSARCOMA MIXOIDE/DE CELULAS REDONDAS

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

SARCOMA DE CELULAS CLARAS

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

12 22 der (12) der (22)

t(12;22)(q13-14;q12-13) EWS-ATF1

SARCOMA DE CELULAS CLARAS

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

t(12;22)(q13-14;q12-13) EWS-ATF1

SARCOMA DE CELULAS CLARAS

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

• Tumor de Ewing/PNET

• Fusión tipo 1: EWS (exón 7)-FLI 1 (exón 6)

• De Álava E et al. J Clin Oncol 1998;161248-55

• Rabdomiosarcoma alveolar

• t(1;13) y/o fusión PAX 7-FKHR

• Kelly KM et al. J Clin Oncol 1997;151831-36

• Neuroblastoma

• Amplificación de MYCN Deleción 1p36.3

VALOR PRONOSTICO

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

Neuroblastoma

Neuroblastoma

Neuroblastoma

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

PATRON GENETICO-MOLECULAR

NeuroblastomaAmplificación de MYCN (d

mins, HSR)

Del 1p 36

Ganancia 17q

LOH 11q, 14q

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

Neuroblastoma:MYCN

p

q

22

25

24

23

21

16

1514

13

12

11.2

11.111.1

12

21

22

23

24

31

32

11.2

13

14.114.214.3

35

34

33

36

37

HSRsp

q

22

25

24

23

21

16

1514

13

12

11.2

11.111.1

12

21

22

23

24

31

32

11.2

13

14.114.214.3

35

34

33

36

37

dmins

Cromosoma 2

p

q

11.2

12

13

14

23

24.1

15

11.111.1

13

12

21

22

24.2

24.3

p

q

11.2

12

13

14

23

24.1

15

11.111.1

13

12

21

22

24.2

24.3

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

Neuroblastoma:MYCN

p

q

22

25

24

23

21

16

151413

1211.211.111.1

12

21

22

23

24

31

32

11.2

1314.114.214.3

3534

33

36

37

MYCN

Cromosoma 2

2p24

p

q

22

25

24

23

21

16

151413

1211.211.111.1

12

21

22

23

24

31

32

11.2

1314.114.214.3

353433

36

37

Cromosoma 2

Ganancia

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

Neuroblastoma:MYCN

Ganancia de MYCNMYCN no amplificado

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

Neuroblastoma:MYCN

36.336.2

36.1

3534.3

34.133

31.3

21

1211

34.2

32.3

32.132.2

31.2

31.1

22.3

22.122.2

13.3

13.113.2

11

12

21.1

22

23

24

25

31

32.1

41

42.1

4344

21.221.3

32.232.3

42.242.3

3534.3

34.133

31.3

21

1211

34.2

32.3

32.132.2

31.2

31.1

22.3

22.122.2

13.3

13.113.2

11

12

21.1

22

23

24

25

31

32.1

41

42.1

4344

21.221.3

32.232.3

42.242.3

17q 23-qter

1t(1;17)(p35,q23)

del 1 p36.3

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

Neuroblastoma:1p36

No deleción del 1p36 Deleción del 1p36

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

Neuroblastoma: Cr.1p36

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

M 23 25 1524106 IMR32

MycN

LHPCR D1S80

TN TN TN

Valor pronóstico

• Oncogenes: c-kit ras Her2

• GIST: Tratamiento con STI571

• Scappatici FA et al. Cancer Treatment Rew 2001;27:317-26

• Genes supresores/proapoptóticos: p53 Fas/FasL

• Genes reguladores del ciclo celular: p27 mdm2

• Productos de fusión génica: EWS-FLI1 CHOP-TLS

•

DIANAS TERAPEUTICAS

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

HE c-kit

DIANAS TERAPEUTICAS

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

• Fusiones génica nuevas

• Diagnóstico histológico cuestionable Escaso material

• Tumor necrótico RNA degradado

• Irreproductibilidad por diferentes laboratorios

• Diagnóstico histológico cuestionable

• Contaminacion

RESULTADOS NEGATIVOS INESPERADOS

RESULTADOS POSITIVOS INESPERADOS

LIMITACIONES

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

1 32 54 6 987 IMR32

LIMITACIONES

PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS

NEUROBLASTOMA: MYCN falsos negativos por PCR

CASO CLINICO (1)

Niño de 3 años, presentando una gran masa retroperitoneal ocupando la cavidad abdominal.

Niveles de ácido vanil mandélico y homovanilico

en orina normales.Captación de MIBG-I123.Se remite biopsia a cielo abierto.Tres días después el paciente fallece por

hemorragia abdominal

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

DIAGNOSTICO (1)DIAGNOSTICO (1)

NEUROBLASTOMA POBRE EN ESTROMA, SUBTIPO

INDIFERENCIADO.

VARIANTE: PLEOMORFICO-ANAPLASICO

HISTOPRONOSTICO: DESFAVORABLE

( CLASIFICACION INPC)

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

Niña de 3 años con masa retroperitoneal de rápido crecimientoNo captación de MIBG

SOSPECHA CLINICASarcoma retroperitoneal

PROCEDIMIENTO DIAGNOSTICOBiopsia exéresis

TUMORES DE CELULAS REDONDASCASO CLINICO

(2)

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

N-myc

Rabdomiosarcoma alveolar: Amplificación MYCN

DIAGNOSTICO (2)DIAGNOSTICO (2)

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

DIAGNOSTICO ANATOMO-PATOLOGICOTumor de células redondas con diagnostico diferencial de

Rabdomiosarcoma alveolarNeuroblastoma indiferenciado

ESTUDIO MOLECULARAmplificación MYCN

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

Varón de 24 años con masa abdominal de crecimiento rápido con metástasis pulmonares y mediastinicas.Se practica biopsia a cielo abierto.Tras 12 meses y 2 ciclos de QT el paciente fallece

CASO CLINICO (3)

TUMORES DE CELULAS REDONDAS

Ewing’s/PNET: Fusiones génicas atipicas EWS-FEV

Tumor de Ewing/PNET Atípico PleomorficoCon Feno-Genotipo inusual

DIAGNOSTICO (3)DIAGNOSTICO (3)

TUMORES DE CELULAS REDONDAS