6. Bacteriología

Generalidades de microbiología 1

MICROBIOLOGÍA

MAG. FREDDY ORIHUELA VILLAR


MICROBIOLOGÍA

Estudio de microorganismos:Estudio de microorganismos: Visibles a través del microscopio Tamaño en µm (10-6 m)


MICROBIOLOGÍA

Bacterias BACTERIOLOGÍA Hongos MICOLOGÍA Virus VIROLOGÍA Parasitos PARASITOLOGÍA

CLASES DE MICROORGANISMOSCLASES DE MICROORGANISMOS


MICROORGANISMOS

Ejemplos de patologías

• BACTERIAInfecciones urinarias, Diarrea Tuberculosis, Difteria, Tetanos

• HONGOS Micosis, Tinea

• VIRUS HIV, Hepatitis C,B, Rubeola

• PARASITOSToxoplasmosis, Malaria, Tenia (gusanos en cinta)


MICROORGANISMOS

Hongos :Hongos :

Hongos micelialesHongos miceliales (dermatofitos, hongos filamentosos)Ej : Penicillium, Aspergillus

LevadurasLevadurasEj: levaduras para fermentación (Saccharomyces), polvo de hornearEj.: Candida, CryptococcusTamaño: 10 µm


• • Virus:Virus:- Tamaño < 0.1 µm- Tamaño < 0.1 µm

- DNA o RNA- DNA o RNA

- Sin enzimas: necesitan las del huésped (Ojo: - Sin enzimas: necesitan las del huésped (Ojo: retrotranscriptasa) retrotranscriptasa)

- Reproductción por replicación- Reproductción por replicación

• • Bacterias:Bacterias:- Tamaño: 1 µm- Tamaño: 1 µm

- DNA y RNA- DNA y RNA

- Enzimas: biosíntesis- Enzimas: biosíntesis

- Reproducción por fisión- Reproducción por fisión

MICROORGANISMOS


1.2 – ESTUDIO DE BACTERIAS


DONDE?

En humanos :En humanos : En el ambiente :En el ambiente :

Flora NormalFlora Normal

= Flora Comensal= Flora Comensal

SaprófitosSaprófitos


Donde ?

Suelo Aire Agua Alimentos

En el medio ambiente:En el medio ambiente:


DONDE ?

SISI Boca Orejas Tracto respiratorio Tracto intestinal Tracto genital Piel....

NONO

Sangre Líquido cefaloraquídeo

(LCR) Orina

EN PERSONAS SANASEN PERSONAS SANAS

Flora Normal:Flora Normal:

Contacto con ambiente

Siempre esteril :Siempre esteril :

Cavidades cerradas


PATOGENIA

Patógenos estrictos:Patógenos estrictos: Multiplicacion y diseminación dentro del organismo Resistencia al sistema inmune Secreción de enzimas: lesiones en tejidos del

huésped Secreción ocasional de toxinas

En pacientes infectados:En pacientes infectados:


PATOGENIA

La bacteria no abandona el sitio de infección. Es su La bacteria no abandona el sitio de infección. Es su toxina la que se disemina en el organismo y causa la toxina la que se disemina en el organismo y causa la enfermedadenfermedad

Ej.: - Clostridium tetani (tetanos)- Corynebacterium diphteriae (difteria)

Intoxicación alimentaria:Intoxicación alimentaria:- Staphylococcus aureus- Clostridium botulinum

Botulismo: ingestión de alimentos en los que C. botulinum ha desarrollado su toxina (no eliminatada en el tracto digestivo)

paralisis después de ataque neuromuscular

Bacterias toxigénicasBacterias toxigénicas


Patógenos oportunistas:Patógenos oportunistas: Qué bacteriasQué bacterias?

Bacterias Saprófitas o de flora normal

Generalmente no patógenos

Cuándo? – Immunodepresión del huésped– Rotura de la barrera natural

Ej : E. coli, presente en flora normal y potencial causante de infecciones urinarias, septicemia…

PATOGENIA


PATOGENIA: EJEMPLOS

Estreptococos, Enterococos

Neisseria Corynebacteria Anaerobios...

– Enterobacteriaceae Enterococos Levaduras Anaerobios...

Streptococcus A, Neumococos Corynebacterium diptheriae Staphylococcus aureus Haemophilus influenzae

Salmonella, Shigella E. coli, Yersinia, Campylobacter Vibrio cholerae Toxina : Clostridium, S. aureus

CAVIDAD OROFARÍNGEA:CAVIDAD OROFARÍNGEA:

TRACTO DIGESTIVO:TRACTO DIGESTIVO:

BACTERIASBACTERIAS PATOGENAS PATOGENAS FLORA NORMAL FLORA NORMAL


– Staphylococcus epidermidis– Corynebacteria– Propionibacterium acnes...

– Lactobacillus– Anaerobios– Flora cutánea...– (Mycoplasma)

– Staphylococcus aureus– Streptococcus A– Pasteurella– Bacillus...

– Gonococos– Streptococcus B– Gardnerella vaginalis– Treponema pallidum– Haemophilus, Chlamydia...

PIEL:PIEL:

CAVIDADES GENITALES:CAVIDADES GENITALES:

BACTERIAS PATOGENASBACTERIAS PATOGENASFLORA NORMAL FLORA NORMAL

PATOGENIA


MORFOLOGÍA

COCOSCOCOS BACILOSBACILOS

COCO-BACILOS


CARACTERÍSTICAS DE AGRUPAMIENTO

COCOSCOCOS

BACILOSBACILOS

diplococos cadenasgrupos

diplobacilos cocobacilos


ESTRUCTURA

membrana citoplasmáticamembrana citoplasmática

Pared Pared celularcelular

citoplasmacitoplasma

DNADNA

ribosomasribosomas

capsula (facultativa)capsula (facultativa)

flagelosflagelos

(facultativos)(facultativos)


MOVILIDAD

1-1- Sin flagelos:Sin flagelos:

Bacterias inmóviles

3-3- Muchos flagelos:Muchos flagelos:

bacterias móviles

Movimiento:

2-2- Un flagelo:Un flagelo:

bacterias móviles

Movimiento:


REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES

– – Requerimientos básicosRequerimientos básicosPara la síntesis de los distintos constituyentes de la bacteria C, N, O, H, sales minerales...

– – Requerimientos de azúcaresRequerimientos de azúcaresPara los requerimientos energéticos de la bacteria glucosa , lactosa

– – Requerimiento de factores de crecimientosRequerimiento de factores de crecimientosPara el desarrollo de las bacterias de difícil crecimiento vitaminas, aminoacidos...


REQUERIMIENTOS RESPIRATORIOS

Oxígeno requeridoOxígeno requerido Aerobios

Menor cantidad de OMenor cantidad de O22 Microaerófilos

requeridarequerida

Sin oxígenoSin oxígeno Anaerobios

COCO22 requerido requerido Capnófilos


MULTIPLICACION

Division cada Division cada 20 minutos20 minutos


MULTIPLICACION

Velocidad de multiplicación depende de la temperatura:Velocidad de multiplicación depende de la temperatura:

Temperatura

37°C4°C 65°C

Velocidad


1.3 – EL LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA CLÍNICA


OBJETIVO

Encontrar el tratamiento adecuado para el Encontrar el tratamiento adecuado para el pacientepaciente

?


¿Cómo?

Aislamiento de la bacteria responsable de la Aislamiento de la bacteria responsable de la infeccióninfección

Identificar esta bacteriaIdentificar esta bacteria

Probar la resistencia a los diferentes antibióticosProbar la resistencia a los diferentes antibióticos


LOS DIFERENTES PASOS EN EL DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO

Recolección de la muestra Recolección de la muestra

Examen microscópicoExamen microscópico

CultivoCultivo

IdentificaciónIdentificación

Tests de sensibilidad antibióticaTests de sensibilidad antibiótica


RECOLECCION DE LA MUESTRA


LCR= Líquido céfalo-raquídeo

RECOLECCIÓN DE MUESTRA

MUESTRA MODO DE RECOLECCIÓN

PATOLOGÍA

Orina Infecciones urinarias

Heces Diarrea

Intoxicación alimentaria

Genital Hisopado Vaginitis, cervicitis, prostatitis, uretritis,ETS…

Supuración Hisopado o jeringa Absceso, líquido peritoneal,

Infecciones de piel



Muestra polimicrobianas:Muestra polimicrobianas:

Muestras : cutaneascutaneasdigestivasdigestivasvaginal, uretralvaginal, uretralTracto respiratorio...Tracto respiratorio...

Observación de muchos tipos bacterianos

Muestras monomicrobianas:Muestras monomicrobianas:

Muestras : LCR, sangre, orinaLCR, sangre, orina

Observación de un único tipo bacterianoSólo patógeno

Flora normal + Patógeno



Condiciones de recolecciónCondiciones de recolección

Uso de material estéril Desinfección del sitio de recolección antes de la

toma de muestra(Ej: Limpiar localmente antes de recolectar la muestra de orina)


Inocular la muestra inmediatamenteInocular la muestra inmediatamente

oo

Usar medio de transporteUsar medio de transporte

POR QUÉ?POR QUÉ?

Las bacterias son microorganismos vivientes! Es necesario:

1- Mantenerlos viables

2- Evitar su multiplicación

CUÁNDO?CUÁNDO? Los laboratorios que están lejos del sitio de recolección: recolección al pie de la cama del paciente

TRANSPORTE DE MUESTRASTRANSPORTE DE MUESTRAS


TRANSPORTE DE MUESTRASTRANSPORTE DE MUESTRAS

Si la inoculación en el medio de cultivo no es inmediata, Si la inoculación en el medio de cultivo no es inmediata,

Almacenamiento de las muestras durante el transporteAlmacenamiento de las muestras durante el transporte::

4°C4°C 37°C y/o medio de 37°C y/o medio de transportetransporte

??

Orina, hecesOrina, heces Muestras genitales, LCR, sangre, pusMuestras genitales, LCR, sangre, pus

Sin multiplicación Sin multiplicación bacterianabacteriana

Posibilidad de Posibilidad de bacterias lábilesbacterias lábiles

Posibilidad de Posibilidad de bacterias bacterias anaerobias anaerobias

El medio de transporte previene la desecación de las muestrasEl medio de transporte previene la desecación de las muestras


EXAMEN MICROSCÓPICO



Presencia y conteo de bacterias Morfología y caracteristicas de agrupamiento Movilidad Citología: observación de células

Ej.: Leucocitos (signo de infección)

1 – Examen directo1 – Examen directo Primer paso

1 gota entre porta y cubreobjeto : Lente de x 40, (seco)

INTERES:INTERES:


Gram + Violeta

Gram - Rosa

2 – Tinción de GRAM2 – Tinción de GRAM

Es la tinción más comúnmente usada en bacteriologíaEs la tinción más comúnmente usada en bacteriología

Usada para clasificar bacteriasUsada para clasificar bacterias



Tinción de Gram: PrincipioTinción de Gram: PrincipioBasado en la diferencia de permeabilidad de la pared celular bacterianaBasado en la diferencia de permeabilidad de la pared celular bacteriana

1 – Violeta de Genciana o Cristal - Violeta1 – Violeta de Genciana o Cristal - VioletaAtraviesa la pared celular y colorea toda la bacteria

2 – Solución iodada o Lugol2 – Solución iodada o LugolFavorece la fijación del colorante

3 – Decoloración con alcohol acetona3 – Decoloración con alcohol acetonaBacterias Gram (-) pierden su color

Bacterias Gram (+) permanecen violetas

4 - Fucsina o safranina4 - Fucsina o safraninaColoracion de bacterias Gram (-) en rosado

Re


Objetivo x 100 con aceite de inmersión


3 – Otras tinciones:3 – Otras tinciones:

Coloración con azul de metilenoColoración con azul de metileno

Para visualizar bacterias intraleucocitarias

Ej : gonococos GiemsaGiemsa

Para parásitos sanguíneos o intracelulares Ziehl - NeelsenZiehl - Neelsen

for Mycobacteria Naranja de acridinaNaranja de acridina

Fluorescencia para muestras con bajo recuento bacteriano



CULTIVO


CULTIVO

Agar Nutritivos Atmósfera correcta Temperatura correcta

Para obtener un crecimiento bacteriano, es Para obtener un crecimiento bacteriano, es necesario:necesario:

Cumplir con los requerimientos bacterianos en Cumplir con los requerimientos bacterianos en lo que se refiere alo que se refiere a::


CULTIVO

Elección del medio de cultivo correcto:Elección del medio de cultivo correcto: Depende de la bacteria que será buscada depende de la muestra

?

Medio Selectivo?Medio enriquecido?

Medio básico?Medio

Cromogénico?


CULTIVO

• • Diferentes tipos de medios de cultivoDiferentes tipos de medios de cultivo

• • Medio básicoMedio básico: nutrientes mínimos

• • Medio enriquecidoMedio enriquecido: medio básico+ factores de crecimiento (Ejemplo: sangre)

• • Medio Medio selectivoselectivo: Adición de antibióticos u otros

• • Medios cromogénicosMedios cromogénicos: Adición de sustratos cromogénicos que conducen a la aparición de

colonias coloreadasLos medios pueden ser selectivos y enriquecidos, o selectivos y cromogénicos…


• • Crecimiento en medio sólidoCrecimiento en medio sólido::

En una placaEn una placa

Las bacterias inoculadas en una superficie de agar nutritivo se multiplicarán y formarán una agrupación visible al ojo desnudo:

coloniacolonia = 1 millón de bacterias

= 20 generaciones

PARA AISLAMIENTO

CULTIVO


CULTIVO

Ej.: Caldo cerebro corazón, caldo tripticasa soya...

• • Crecimiento en medio líquido:Crecimiento en medio líquido:

CaldoCaldo Las bacterias son colocadas en un caldo nutritivo donde se

multiplicarán, y se observará un enturbiamiento en el medio (visible al ojo desnudo). Los caldos de cultivo no permiten diferenciar un crecimiento

polimicrobiano de uno monomicrobiano.

PARA ENRIQUECIMIENTO


CULTIVO: Ejemplos

Orina :Orina :

Heces :Heces :

Muestra Muestra genital :genital :

CPS ID 3 Agar Sangre

CampyloselYersinia CINBCPHektoen

Mac ConkeySangre ANCChocolate

Selenito

Candida ID 2


•• Elección de la temperatura adecuada:Elección de la temperatura adecuada:

- Bacteria : 37°C

- Hongos : 30°C

30°C 37°C

¿Incubador?

CULTIVO


Diferentes tipos de respiración Diferentes tipos de respiración

1 2 3 4

CULTIVO


1 – Aerobios estrictos1 – Aerobios estrictos

Requiere la presencia de Oxígeno

Su energía es obtenida a través de una metabolismo oxidativo: respiración

Ej: Pseudomonas, Micobacterias

2 – Anaerobios facultativos2 – Anaerobios facultativos

Desarrolla con o sin oxígeno pero la mayor parte de la energía producida proviene de la fermentación

Ej: Enterobacteriaceae

CULTIVO


3 – Anaerobios estrictos3 – Anaerobios estrictosSólo pueden desarrollar en ausencia de Oxígeno, ya que es tóxico para este tipo de bacterias. Toda la energía producida proviene de la fermentación (metabolismo fermentativo)

Ej.: Fusobacterium, Eubacterium

4 – Bacterias microaerófilas4 – Bacterias microaerófilasPrefieren una atmósfera con cantidad reducida de O2

Ej.: Campylobacter, Mycoplasma

5 – Bacterias Capnófilas5 – Bacterias CapnófilasAlgunas bacterias prefieren atmósferas enriquecidas en CO2, es esencial para otros.

Ej.: Neisseria gonorrhoeae

CULTIVO


• • Elegir la atmósfera adecuadaElegir la atmósfera adecuada::

- Aerobios

- Aero-anaerobios

- Bacterias µ-aerófilos

- Anaerobios

- Bacterias capnófilas

generador de

microaer

generador de anaer

sin generador

generador de CO2

Jarra

CULTIVO


CULTIVO

1

2

3

4

Tiempo

Recuento bacteriano

• • Fases de crecimiento Fases de crecimiento BacterianoBacteriano

24Hrs 48Hrs


CULTIVO

• • Fases del crecimiento bacterianoFases del crecimiento bacteriano::

1. 1. Fase de latencia:Fase de latencia: Metabolismo reducido: adaptación de la población bacteriana a las

nuevas condiciones de cultivo.

2 –2 – Fase de crecimiento exponencial Fase de crecimiento exponencialCrecimiento extremadamente activo.

3 –3 – Crecimiento negativo y fase estacionaria Crecimiento negativo y fase estacionariaComienzo de acumulación de productos tóxicos, disminución de los nutrientes disponibles.

4 –4 – Fase de Declinación Fase de Declinación

Autolisis bacteriana


IDENTIFICACION


IDENTIFICACION DE BACTERIAS

RequerimientosRequerimientos : Obtener un cultivo puro (si la muestra : Obtener un cultivo puro (si la muestra es polimicrobiana)es polimicrobiana)

Primer paso : AISLAMIENTO Primer paso : AISLAMIENTO

Inoculación del germen en un agar nutritivo

1 bacteria 1 colonia



AislamientoAislamiento1

4

3

2


AislamientoAislamiento 1

4

3

2



• • Segundo paso: IDENTIFICACIONSegundo paso: IDENTIFICACIONLas bacterias se clasificacan de acuerdo con:

FamiliaFamilia GéneroGénero Especies Especies

Ejemplo: MicrococcaceaeStaphylococcusaureusEjemplo: EnterobacteriaceaeEscherichiacoli

E. coli

S. aureus




Examen microscópico:Examen microscópico: Cocos o bacilos Características de agrupamiento Gram + o Gram -

Observacion de colonias en las placas:Observacion de colonias en las placas: Tamaño, color, aspecto, olor (!) Hemólisis en agar sangre

(Streptococci... )



-Hemolisis :-Hemolisis : hemólisis parcial(halo verdoso alrededor de la

colonia)Ej. : Pneumococci

-Hemolisis :Hemolisis : hemólisis total (halo transparente alrededor

de la colonia)Ej. : Streptococci grupo A, B ...

-Hemolisis Hemolisis : no hemolisisEj. : Enterococcus faecalis,

faecium

HEMOLISISHEMOLISIS



• • Tests de Tests de Orientacion:Orientacion:

Detección de enzimas respiratoriasDetección de enzimas respiratorias

– CatalasaCatalasa : : Destrucción de peróxido de hidrógeno 2 H2O2 2 H2O + O2

catalasa

– OxidasaOxidasa : : TMPD oxidized TMPD incoloro oxidasa rosa-violeta

(TMPD = N Tetra metil - para - fenilen - diamina)


Resultados de tests de Orientacion:Resultados de tests de Orientacion: Morfología Gram Catalasa, oxidasawidefinirán la familia o el género, y nos permite elegir la tira de identificación correcta

Ejemplos :Ejemplos : Cocos, Gram +, Catalasa + Staphylococci Cocos, Gram +, Catalasa - Streptococci Bacilos, Gram -, Oxidasa - Enterobacteriaceae




Estudio de características bioquímicas:Estudio de características bioquímicas:

Estudio del metabolismo bacteriano (enzimas...)

Ejemplo :Ejemplo :

Enzima Cambio de Color

pH

TEST (+)

Sin enzima TEST (-)

Glucosa

Fermentacion de glucosa

Producción de ácido



Metabolismo de glúcidos Oxidación o fermentación de azúcares:glucosa, lactosa, sacarosa, arabinosa...

Metabolismo de proteínas Proteínas: gelatina, leche, sangre...proteasas, ureasa, desaminasas, decarboxilasas

Metabolismo de lípidoslipasa, lecitinasa...

PRUEBAS BIOQUÍMICASPRUEBAS BIOQUÍMICAS


AplicacionesAplicaciones

Medios de identificación en tubos

Tiras de identificación

Ej : Galería API, ID 32, tarjetas VITEK 1 / 2

26

27

30

29

28

1 2

5 4

3

16

17

20

19

18

21

22

25

24

23

11

12

15

14

13

6 7

10

9 8




• Estudio de características antigénicasReacción inmonológica: antígeno - anticuerpo: antígeno - anticuerpoAc fijos a partículas de látexAglutinación en presencia del antígeno correspondiente (bacteria...)

- usando colonias aisladas - o usando directamente las muestras.

Ventaja: rapidez (reacción inmediata)

latex con Acs

AGLUTINACION

bacteria



• Identificación en medios cromogénicos:

Identificación directa de bacterias en la placa: colonias coloreadas

Para muestras comunes Para baterias frecuentemente

encontradas

Ej.: CPS ID 3 Urina (E.coli, Proteus, Strepto. D)

Interés:Interés: ahorro de tiempo y dinero ahorro de tiempo y dinero


• Identificacion usando biología molecular:

Identificacion de bacterias por fragmentos de DNA específicos

– usando colonias– o directamente usando la muestra

Ej : Gen ProbeEj : Gen Probe Mycobacteria, Gonococci, Chlamydia...

InteresInteres : Especificidad, ahorro de tiempo : Especificidad, ahorro de tiempo



PRUEBAS DE SENSIBILIDAD


Objetivo:Objetivo:

Encontrar un tratamiento efectivo para el paciente

RecuperaciónRecuperaciónrápidarápida

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA



1. Estudio « 1. Estudio « In vitro In vitro » de la actividad antibiótica sobre una » de la actividad antibiótica sobre una bacteria aisladabacteria aislada

Se realiza sólo sobre patógenos (no, sobre flora normal)

2. Interpretación « 2. Interpretación « In vivo » In vivo » de la actividad antibiótica:de la actividad antibiótica:

Riesgo potencial del éxito o falla del tratamientoRiesgo potencial del éxito o falla del tratamiento


ANTIBIOTICOS ANTIBIOTICOS agentes agentes

antibacterianosantibacterianos

1928: Descubrimiento de la penicilina por 1928: Descubrimiento de la penicilina por Sir A.FlemingSir A.Fleming




• • Origen:Origen: - biologico: desarrolladas por microorganismos:

hongos, bacterias

- Químico: producidos por síntesis

• • Acción:Acción: variable dependiendo de la familia de ATB

- inhibición de la síntesis de la pared bacteriana

- alteración de la membrana citoplasmática

- acción sobre la síntesis proteica

- inhibición de la síntesis de ácidos nucleicos

ANTIBIOTICOSANTIBIOTICOS


Los resultados que se informan a los Los resultados que se informan a los médicos se clasifican como: médicos se clasifican como:

S Sensible

R Resistante

I Intermedio




Bacteria Sensible: Bacteria Sensible: SS Bacterias que no crecen en presencia del ATB El tratamiento con ese ATB resultará exitosoexitoso

Bacteria Resistente: Bacteria Resistente: RR Bacterias que crecen en presencia del ATB El tratamiento con ese ATB resultará en fallafalla

Intermedio: Intermedio: II Resultado Intermedio Éxito del tratamiento in vivo variable

RESULTADOSRESULTADOS



Resistencia bacterianaResistencia bacteriana• • Natural:Natural:

Resistencia siempre encontrada en la msima especie bacteriana:

Mecanismo conocido

Ej.: Proteus mirabilis resistente a Tetraciclina

• • Adquirida:Adquirida: Resistencia adquirida por una mutacion genética, traspaso desde otra

bacteria, adquisición de plásmidos, etc

Mecanismo presente sólo en algunas cepas de dicha especie.

Debido a la posible presencia de resistencias adquiridas, los tests de sensibilidad deben ser realizados para cada

bacteria identificada



• • Estudio de la CIM:Estudio de la CIM:

CONCENTRACION MINIMA INHIBITORIACONCENTRACION MINIMA INHIBITORIA

La menor concentración de ATB capaz de inhibir el desarrollo visible de la cepa estudiada.

Método de dilución en medio líquidoMétodo de dilución en medio líquido

0 0,5 1 2 4 8

Concentración antibiótica (µg/ml)

MIC = 1µg/ml

Ej :



Difusión en Agar (discos) Galerías ATB Tarjetas de sensibilidad Vitek

Diferentes técnicasDiferentes técnicas



• • Técnica de difusión en aTécnica de difusión en agargarUso de un disco de papel de filtro impregnado en el antibiótico que se desea estudiar

Inocular total la superficie del ágar con una suspensión antibiótica.

Colocar los discos sobre la superficie de la placa.

Los ATBs difundirán en el ágar.

Después de una incubación por 20 hs., la zona de inhibición de crecimiento aparecerá alrededor del disco. El tamaño de la zona es proporcional al valor de CIM.



• Media de los diámetros de inhibición para cada antibiótico

• Este diámetro se corresponde con el valor de la CIM

• El diametro define el informe como S, R, I dependiendo de los diámetros oficiales dados por comites de expertos

A

F

E

D

C

B

GH


Para poder ser confiable, el método debe estar Para poder ser confiable, el método debe estar estandarizadoestandarizado

ESTANDARIZACION DE:ESTANDARIZACION DE:

- inóculo:inóculo: cantidad de bacterias

- Agar Mueller-HintonMueller-Hinton: composición del medio

- Espesor del agar: difusión del ATB

- Carga antibiótica del disco del disco




•• Galerias Galerias ATB:ATB:

Cada ATB (A, B, C, D…) es evaluados en 2 concentraciones diferentes (c y C)

cc CC

DD

CC

BB

AA

00 Control de crecimiento

SS

RR

II

SS

= Sin crecimiento bacteriano

= Crecimiento bacteriano


Concentraciones críticasConcentraciones críticas

Para cada antibiótico, los comités internacionales de sensibilidad antibiótica fijan un rango crítico para saber si el ATB será efectivo in vivo o no ( a las dosis terapéuticas)

C : Concentración crítica MáximaC : Concentración crítica Máxima

c : concentración crítica Mínimac : concentración crítica Mínima

Concentraciones fijadasde acuerdo con la farmacocinética:- unión a proteínas,

- penetración a varios sitios de acción,

- absorcion, metabolismo, y excreción



•• Cepa sensibleCepa sensible: MIC < c: MIC < cEl antibiotico testeado es activo sobre esa bacteria

•• Cepa con sensibilidad Cepa con sensibilidad Intermedia: c < MIC < CIntermedia: c < MIC < CLas bacterias no serían afectadas por tratamientos en dosis habituales, pero pueden verse afectadas por altas dosis intravenosas o tratamientos locales.

Rango de riesgo

•• Cepa reCepa resistente: MIC > Csistente: MIC > CLa bacteria resiste a las más altas concentraciones de ATB. El antibiótico no será activo in vivo.



•• Métodos automatizadosMétodos automatizados::Estudio del crecimiento bacteriano en un medio líquido o semisólido en presencia de una o varias concentraciones de antibiótico

-- ATB ExpressionATB Expression

- mini API- mini API

- VITEK 1 and VITEK 2- VITEK 1 and VITEK 2

2627

3029

28

1 2

5 4

3

1617

2019

18

2122

2524

23

1112

1514

13

6 7

10 9

8



1.1. MUESTRAMUESTRA2.2. EXAMEN MICROSCOPICOEXAMEN MICROSCOPICO

Examen Directo Gram

3.3. CULTIVOCULTIVO4.4. TESTS DE ORIENTACIONTESTS DE ORIENTACION

Catalasa Oxidasa

5.5. IDENTIFICACIONIDENTIFICACION Manual : GALERÍAS API Semi-automáticos: ATB Expression - mini API Automatización total: VITEK1 y VITEK2

6.6. PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICAPRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA Difusión en agar (discos) Medio semisólido (galerías ATB) Medios líquidos (tarjetas VITEK1 Y VITEK2)

RESUMEN


1.4 – Principales muestras


Principales muestras en bacteriología

1 - Orina

2 - Materia fecal

3 - Muestras genitales

Seguimiento de acuerdo con las infecciones esperadas


INFECCIÓN URINARIA


INFECCIÓN URINARIA

Presencia de bacterias en orina (normalmente estéril)

Pathología = cistitis, pielonefritis ... Orina: es la muestra más frecuentemente

recibida en el lab de bacteriología 80% en mujeres


INFECCIÓN URINARIA

Bacterias patógenas: Escherichia coli Proteus Enterococcus faecalis Klebsiella Pseudomonas otross ....

La distribución de las bacterias difiere entre pequeños laboratorios y laboratorios de hospitales.

– S. saprophyticus

– Streptococcus B


Diagnóstico de laboratorio:Diagnóstico de laboratorio:

–– RecuentoRecuento::

Cantidad significativa de bacteriasCantidad significativa de bacterias: >105 bacterias / ml

–– Presencia de leucocitosPresencia de leucocitos: indican inflamación

–– Presencia de glóbulos rojosPresencia de glóbulos rojos: si hay lesión de la mucosa del tracto urinario

–– IdentificaciónIdentificación

–– Prueba de sensibilidad ATBPrueba de sensibilidad ATB

Con tratamiento antibiótico efectivo:Con tratamiento antibiótico efectivo:

esterilización de la orina en menos de 48 hsesterilización de la orina en menos de 48 hs

INFECCIÓN URINARIA


INFECCIÓN URINARIA

Día 1Día 1 Día 3Día 3Día 2Día 2

Colonias

- Aspecto de la orina

- Cultivo

Inoculación:Inoculación:

1- Tiras de identification

2- Tests de sensibilidad

ResultadosResultados

- Examen microscópico

Identificación

Tests de sensibilidad

Cultivo estéril:

Resultado negativo


DIARREA INFECCIOSA


FLORA INTESTINAL NORMAL

Bacterias comensales

Flora residente:Flora residente: E.coli, otras Enterobacteriaceae Enterococci, Lactobacilli, levaduras, anaerobios...

Flora de tránsitoFlora de tránsito: provenientes de la comida Staphylococci, Bacillus, Pseudomonas ...


DIARREA INFECCIOSA

Bacterias patógenas:Bacterias patógenas: Salmonella Shigella Campylobacter Escherichia Yersinia Vibrio ...

La diarrea no es siempre es causada por bacterias: virus y parásitos también son causas frecuentes


Diagnóstico de laboratorio: Diagnóstico de laboratorio: –– Examen mExamen macroscópico:acroscópico:

- Consistencia y aspecto de las heces

–– Examen mExamen microscópico:icroscópico: - Detección de glóbulos rojos y leucocitos

- Detección de bacterias móviles (Campylobacter, Vibrio..)

- Tinción de Gram: detección de un desbalance en la flora

DIARREA INFECCIOSA



Colonias


- Cultivo

Si hay scolonias Si hay scolonias sospechosas, inocular:sospechosas, inocular:

1- Tiras de ID



- Aspecto de la MF

Identificación


Sin colonias Sin colonias sospechosassospechosas::

cultivo negativo

DIARREA INFECCIOSA


INFECCIONES GENITALES



Flora normal:Flora normal: Lactobacilli, Staphylococci, Corynebacteria,

Anaerobios...

Flora patógena:Flora patógena: Bacteria : N. gonorrhoeae, Treponema pallidum

(syphilis), Mycoplasma, Chlamydiae, Candida albicans ...

Virus : Herpes genital Parásitos : Trichomonas vaginalis

Muy patógenos en embarazadas:Muy patógenos en embarazadas: Listeria, Streptococcus B


•• En mujeres:En mujeres:- vaginitis, uretritis, cervicitis, salpingitis ..

- lesiones : chancro, úlceras

•• En hombresEn hombres::- sindrome uretrogenital

- Lesiones de piel y mucosas

- Prostatitis

- Portador asintomático

PATOLOGÍAS:PATOLOGÍAS:



Diagnóstico de laboratorio:Diagnóstico de laboratorio:

–– Examen macroscópicoExamen macroscópico- Aspecto de la muestra

–– Examen microscópico:Examen microscópico: - Detección de GR, leucocitos y células epiteliales

- Detección de microorganismos móviles (Trichomonas)

- Detección de bacterias intracelulares (Gonococci)

- Tinción de Gram: detección de un desbalance en la flora

- Cantidad de bacilos de Doderlein (Lactobacilli)




Colonias


- Cultivo


Identificación



Si hay scolonias Si hay scolonias sospechosas, inocular:sospechosas, inocular:

1- Tiras de ID


Sin colonias Sin colonias sospechosassospechosas::

cultivo negativo


Infecciones adquiridas en el hospital 48hs después de Infecciones adquiridas en el hospital 48hs después de la admisión:la admisión:infecciones urinarias, neumonía, infecciones después de una cirugía...

Microorganismos resistentes al medio y a los ATBs Microorganismos resistentes al medio y a los ATBs comúnmente usadoscomúnmente usados

Los más frecuentes:Los más frecuentes:E. coli, S.aureus, Enterococos, Pseudomonas aeruginosa, Serratia, Klebsiella, Acinetobacter, Enterobacter, Candida...

multirresistentes

El personal del hospital juega un rol El personal del hospital juega un rol muy importante en la diseminación de la muy importante en la diseminación de la epidemiaepidemia

INFECCIONES HOSPITALARIAS


1.5 – PRINCIPALES FAMILIAS DE BACTERIAS


Clasificación simplificada

COCOSCOCOS

BACILOSBACILOS

GRAM -GRAM -GRAM +GRAM +

- - StaphylococciStaphylococci

- Streptococci- Streptococci

- Neisseria- Neisseria

- - ListeriaListeria

- Corynebacteria- Corynebacteria

- - EnterobacteriaceaeEnterobacteriaceae

- No - No EnterobacteriaceaeEnterobacteriaceae

- Haemophilus- Haemophilus

- Campylobacter- Campylobacter


ESTAFILOCOCOS

Cocos Gram + en grupos, Catalasa +Cocos Gram + en grupos, Catalasa + 20% de las bacterias aisladas en la rutina20% de las bacterias aisladas en la rutina Principales especies:Principales especies:

Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophiticus

Patogenicidad:Patogenicidad: Supuraciones, infecciones urinarias, septicemia, neumonía, endocarditis, meningitis Intoxicaxión por alimentos

Muestras:Muestras: pus, orina, hisopado faríngeos, MF, LCR, sangre

Medios de cultivo:Medios de cultivo: No-selectivos: Agar sangre Selectivos: Agar manitol salado


•• Cocos Gram + en cadenas, Catalasa -Cocos Gram + en cadenas, Catalasa -

•• 9% de las bacterias aisladas en rutina9% de las bacterias aisladas en rutina

•• Principales especies y patogeniaPrincipales especies y patogenia::- Streptococcus pyogenes (A) - Streptococcus pyogenes (A) :: angina

- Streptococcus agalactiae (B) :- Streptococcus agalactiae (B) : meningitis de los RN

- Enterococcus faecalis, facium (D) :- Enterococcus faecalis, facium (D) : infecciones urinarias

- Streptococcus pneumoniae :- Streptococcus pneumoniae : otitis, neumonía meningitis

- Streptococci spp:- Streptococci spp: endocarditis

•• MuestrasMuestras::- orina, faríngeos, esputo, muestras genitales, LCR, sangre

•• Medio de cultivoMedio de cultivo:: - No-selectivos: agar sangre

- Selectivos: Columbia CNAAtmósfera de CO2 o ANA

ESTREPTOCOCOS


•• Bacilos Bacilos Gram -, Oxidasa -Gram -, Oxidasa -

•• 60% de los aislamientos de rutina60% de los aislamientos de rutina

•• Saprófitos o bacterias comensales Saprófitos o bacterias comensales (tracto digestivo...)

•• Principales génerosPrincipales géneros::- Escherichia coli , Klebsiella, Proteus, Providencia

- Citrobacter, Enterobacter, Serratia

- Salmonella, Shigella, Yersinia

• Patogenia: variada

• Muestra:- Todo tipo

• Medio de cultivo: - No-selectivo: Agar lactosa púrpura

- Selectivos : Mac Conkey, Drigalski

ENTEROBACTERIACEAE


•• = No fermentadores de glucosa= No fermentadores de glucosa•• Bacilos Bacilos Gram - , Oxidase +/-Gram - , Oxidase +/-•• 6% de los aislamientos6% de los aislamientos•• Bacterias sBacterias saprofitas: aprofitas: patógenos oportunistas

•• Principales génerosPrincipales géneros::- Pseudomonas aeruginosa - Stenotrophomonas maltophilia, Acinetobacter : Ox - - Aeromonas, Chryseobacterium, Pasteurella- Vibrio cholerae

•• Patogenia:Patogenia:- Infecciones urinarias, supuraciones, septicemia, meningitis...

•• MuestrasMuestras::- orina, genitales, pus, sangre, LCR

•• Medio de cultivoMedio de cultivo: : - No selectivos : Agar lactosa purpura- Selectivos : Mac Conkey, Drigalski

NO ENTEROBACTERIACEAE


•• Bacilos Bacilos Gram -, Oxidase +Gram -, Oxidase +

•• Bacterias muy móvilesBacterias muy móviles

•• Fuente de contaminaciónFuente de contaminación: pájaros, pollo, cerdo: pájaros, pollo, cerdo Contaminación por ingestion de alimentos contaminados con

suelos Patógenos oportunistas

•• Principales especies y patogeniaPrincipales especies y patogenia::- Helicobacter pylori :- Helicobacter pylori : úlcera gástrica

- Campylobacter coli, jejuni, fetus : - Campylobacter coli, jejuni, fetus :

Infecciones intestinales, septicemia...

•• MuestraMuestra::- heces, sangre

•• Medio de cultivoMedio de cultivo: : - No-selectivos : Agar sangre

- Selectivos : CampyloselAtmósfera microaerófila

CAMPYLOBACTER


•• Bacilos Bacilos Gram +, en letras chinas, Catalasa +Gram +, en letras chinas, Catalasa +

•• Flora normal de piel y mucosasFlora normal de piel y mucosas

•• Gérmenes ambientalesGérmenes ambientales: : patógenos oportunistas

•• Principales especies y patogeniaPrincipales especies y patogenia::- Corynebacterium diphtheriae (patógeno estricto): Difteria

- Corynebacterium urealyticum : infecciones urinarias

- Corynebacterium jeikeium : endocarditis, septicemia

•• Muestras:Muestras:- orina, hisopados faríngeos, pus, sangre

•• Medios de cMedios de cultivo: ultivo: - No-selectivos: agar sangre

- Selectivos: Columbia CNA

CORINEBACTERIAS


•• Bacilos Bacilos Gram +, Catalasa +Gram +, Catalasa +

•• Bacterias ambientalesBacterias ambientales: : patógenos oportunistas

•• Principal especiePrincipal especie::- Listeria monocytogenes

•• Patogenia: Patogenia: - Intoxicacion alimentaria (leche, queso crudo, carne...)

- Meningitis, encefalitis, abortos, septicemia...

•• MuestrasMuestras::- Sangre, LCR, (muestras genitales)

•• Medios de cultivoMedios de cultivo: :

- No selectivos: agar sangre (-hemólisis)

- Selectivos: Columbia CNA

LISTERIA


•• Diplococos Diplococos Gram -, Oxidasa +Gram -, Oxidasa +

•• Principales especies y patogeniaPrincipales especies y patogenia::

- Neisserias comensales:- Neisserias comensales: tracto respiratorio

- Patógenos estrictos:- Patógenos estrictos: Neisseria gonorrhoeaeNeisseria gonorrhoeae (Gonococos) : infección genital

Neisseria menigitidisNeisseria menigitidis (Meningococos) : meningitis, septicemia

•• Muestras:Muestras:- genitales, LCR, sangre

•• Medios de cultivoMedios de cultivo: : bacterias fastidiosas

- No-selectivos: agar chocolate

- Selectivos: agar chocolate VCAT3 Atmósfera de CO2

NEISSERIA


•• Cocobacilos Cocobacilos Gram -, Oxidasa +Gram -, Oxidasa +

•• Flora Flora Normal: comensales de rinofaríngeNormal: comensales de rinofarínge

•• Principales especiesPrincipales especies::- Haemophilus influenzae

- Haemophilus parainfluenzae

•• Patogenia: Patogenia: - Otitis, respiratorios, ocular, infecciones genitales,

meningitis, septicemia...

•• Muestras:Muestras:- faríngeos, esputo, muestras genitales, LCR, sangre

•• Medio de cultivoMedio de cultivo: : bacterias fastidiosas

- No-selectivos: agar chocolate

- Selectivos: agar chocolate Haemophilus

Atmósfera de CO2

HAEMOPHILUSEMOPHILUS


ANAEROBIOSANAEROBIOS

•• Bacilos o cocos Bacilos o cocos Gram - ó Gram +, (algunos Gram - ó Gram +, (algunos esporulados)esporulados)

•• BBacterias ambientales o flora normalacterias ambientales o flora normal (bucal, (bucal,

vaginal, intestinal, cutánea)vaginal, intestinal, cutánea)

•• Principales génerosPrincipales géneros::- Clostridium

- Bacteroides

•• Patogenia:Patogenia: - Pus, peritonitis, neumonia, abscesos, infecciones genitales,

septicemia...

•• MuestrasMuestras::- pus, genitales, sangre...

•• Medios de cultivoMedios de cultivo: : - No-selectivos: Agar sangre, Schaedler

- Selectivos: Schaedler Neo-Vanco agar

Atmósfera anaeróbica

6. Bacteriología

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