HPLCHPLCMantenimiento y Guía de Mantenimiento y Guía de

Problemas a resolver.Problemas a resolver.

DIAGNOSTICOSDIAGNOSTICOS

BombaBomba

Principales ProblemasPrincipales Problemas

• Fugas:

• Conexión de tubería floja• Férula y conector defectuoso• Cuerda barrida de conector• Filtro de alta presión defectuoso• Damper defectuoso• Válvula Check floja

• Ruido:Ruido:

• Burbujas en cámara de pistón• Válvula Check de entrada defectuosa• Falta de líquido

• Funcionamiento:

• Presión excesiva• Lecturas erraticas de presión• Presión Cero (No flujo)• Flujo deficiente

• Problemas del SistemaProblemas del Sistema

• Marcas de pico en línea base relacionadas al movimiento del pistón

• Ruido en línea base no relacionado al movimiento del pistón

• Tiempos de retención no reproducibles

• MiscelaneosMiscelaneos

• Bomba muerta

• Acumulación de sales en pistón

DETECTORDETECTOR

Principales ProblemasPrincipales Problemas• Marcas de Pico en Línea Base

• Ruido Excesivo en Línea Base

• Deriva Excesiva de Línea Base

• Corrección de Zero muy grande

• Lámpara Deuterio no enciende

• Pérdida de comunicación con la PC

• No datos

• Icono de detector desactivado en configuración

• Detector no calibra

AutomuestradorAutomuestrador

Problemas PrincipalesProblemas Principales• No inyecta muestra (Con aguja en buen estado)

• Mala reproducibilidad

• Contaminación Contínua

• Excesivo carry over

MantenimientoMantenimiento

Mantenimiento BombaMantenimiento Bomba

Reconocimiento de hardware

Mantenimiento BombaMantenimiento BombaCambio de check de salida

Mantenimiento BombaMantenimiento BombaCambio de Check de Entrada

Mantenimiento BombaMantenimiento BombaCambio de Filtro de Check de Salida

Mantenimiento BombaMantenimiento BombaReemplazo de Filtro de Alta Presión

Mantenimiento BombaMantenimiento BombaReemplazo de Filtro de Línea

Mantenimiento BombaMantenimiento BombaCambio de Pistón

Mantenimiento BombaMantenimiento BombaCambio de Sellos

Mantenimiento BombaMantenimiento BombaPurga de Bombas

Mantenimiento DetectorMantenimiento DetectorEnsamble Detector 166

Mantenimiento DetectorMantenimiento Detector Remover/Reemplazar/Limpiar Celda de Flujo (Det. 166)

Mantenimiento DetectorMantenimiento Detector Removiendo el Ensamble de la Lámpara

Mantenimiento DetectorMantenimiento Detector Removiendo Ensamble del Monocromador

Mantenimiento DetectorMantenimiento Detector Removiendo/Limpiando Celda de Flujo (Det. 168)

Mantenimiento DetectorMantenimiento Detector Reemplazando Lámpara de Deuterio (Det. 168)

Mantenimiento AutomuestradorMantenimiento Automuestrador Reconocimiento de Dispositivos

Mantenimiento AutomuestradorMantenimiento Automuestrador Cambiando la Jeringa de Inyección

Mantenimiento AutomuestradorMantenimiento Automuestrador Reemplazo de Aguja de Aire

Mantenimiento AutomuestradorMantenimiento Automuestrador Reemplazo de Aguja de Muestra

SERVICIOS QUE OFRECEMOS...SERVICIOS QUE OFRECEMOS...SERVICIOS QUE OFRECEMOS...SERVICIOS QUE OFRECEMOS...

GLPGLPCGMPCGMP

Validación deMétodos

Entrenamiento

Validación deSoftware

Seguridad de Datos

Mantenimiento &Calibración

ProcedimientosEscritos

Preguntas y Respuestas...Preguntas y Respuestas...Preguntas y Respuestas...Preguntas y Respuestas...

1.No hay picos / picos muy pequeños

Posible Causa Soluciòn/Comentarios

1. Làmpara apagada detector 1. Encender Lampara

2. Flojo/Quebrado cable entre el detector 2. Checar conecciones electricas y cables.

3. No flujo de fase movil. 3. Ver prolema siguiente “No Flujo”

4. No muestra/muestra deteriorada. 4. Asegurese que los viales tienen suficiente

5. Parametros muy altos en escala detector muestra y que no tienen burbujas. Evalue

el desempeño del sistema con estandar

fresco, para comfirmar si la muestra es la

fuente del problema.

5. Checar atenuacion o ganacias. Checar

estatus de la lampara y el autozero

2.Sin flujo

1. Bomba apagada

2. Flujo interrumpido/obstruìdo

3. Fuga

4. Aire atrapado en la cabeza de la bomba (revelado por fluctuoaciones en la presiòn)

1. Encender la bomba

2. Checar el nivel de la fase mòvil en el reservorio. Checar el flujo atravès del sistema; examinar el loop de muestra por

3. obstrucciòn o aire. Asegùrese que los componentes de la fase mòvil son visibles y la fàse mòvil estè adecuadamente desgasificada

4. Checar el sistema en el sistema conectores flojos. Checar en la bomba fugas, sales, ruidos inusuales. Cambie los sellos de ser necesario.

5. Desconecte el tubing y la columna. Cheque el flujo. Purgue la bomba a un flujo de 5-10ml, purgue el sistema, cada cabeza separadamente. Afloje las valvulas checks para que escape el aire . Si el problema persite purgue el sistema con Metanol o isopropanol.

3.No hay presiòn/presiòn màs baja de lo usual

1. Fuga

2. Flujo de fase movil interrumpido/obstruido

3. Aire atrapado en la cabeza de la bomba.

4. Fuga en conector a la entrada de la columna.

5. Aire atrapada en alguna parte del sistema.

6. Sello de la bomba en mal estado, causando fugas alrededor de la cabeza.

1. Cheque el sistema conectores flojos. Cheque la bomba por fugas, sales, ruidos inusuales. Cambie los sellos de ser necesario.

2. Cheque el nivel de la fase mòvil en los reservorios. Cheque flujo atravès del sistema. Examine el Loop por obstrucciòn o aire. Asegurese que los componentes de la fase movil son miscibles y estan propiamente desgasificados.

3. Purgue el sistema sin columna y afloje las valvulas checks de ser necesario para que saquen el aire atrapado.

4. Reconecte la columna y ponga el flujo al doble, si la presion permanece baja, cheque fugas en los conectores de entrada y salida de la columna

5. Desconecte la columna purge el sistema con metanol y/o isopropanol.

6. Reemplace sellos si el problema persiste, re-emplace pistones y sellos

4.Presiòn màs alta de lo usual

1. Problema en la bomba, inyector, en filtro de lìnea o tubing.

2. Guardacolumna obstruìda o columna analìtica

1. Remueva la guardacolumna y la columna del sistema. Reemplace con uniones y un tubing largo para reconectar el inyector al detector. Corra la bomba de 2-5 Ml/min. Si la presiòn es mìnima, ver la causa 2. Si no, aislar la causa eliminando sistemàticamente los componentes iniciando con detector, filtro en lìnea, trabajando hacia atràs hacia la bomba. reemplace filtro en la bomba si està presente.

2. Remueva guardacolumna y cheque presiòn. Si la columna està obstruìda, dele vuelta y enjuague la columna, desconectada del conector. Si el problema persiste, la columna puede estar tapada con contaminantes fuertemente retenidos. Use un procedimiento adecuado de restauraciòn. Si el problema persiste, cambie los frits o reemplace la columna.

5.Tiempos de retenciòn Variables

1. Fuga

2. Cambio en composiciòn de fase mòvil (pequeños cambios pueden dar grandes cambios en tiempos de retenciòn)

3. Aire atrapado en la bomba (Tiempos de retenciòn incrementan o decrementan en tiempos aleatorios)

4. Fluctuaciones en la temperatura de la columna (especialmente evidente en sistemas de intercambio de iones)

5. Sobrecarga de la columna. (Tiempos de retenciòn usualmente decrecen cuando la masa de soluto inyectada excede la capacidad de la columna

6. Incompatibilidad del solvente de la muestra con la fase mòvil.

7. Problema de columna (no es una causa comùn de tiempos de retenciòn erràticos. De acuerdo a la edad de la columna, los tiempos de retenciòn gradualmente decrecen).

1. Revise que el sistema no tenga conectores flojos. Revise fugas en la bomba, sales, ruidos inusuales. Cambie los sellos de la bomba si es necesario

2. Revise la preparaciòn de la fase mòvil. Si la fase mòvil es mezclada usando vàlvulas proporcionadoras, mezclela a mano y suminìstrela en un reservorio.

3. Purgue el aire de la cabeza de la bomba o vàlvulas check . Cambie los sellos de la bomba si es necesario. Asegùrese que la fase mòvil està desgasificada

4. Use horno de columna (altas temperaturas incrementan la eficiencia de la columna. Para resultados òptimos, caliente el eluyente antes de introducirlo a la columna).

5. Inyecte volùmenes pequeños (e.g. 10uL vs 100uL) o inyecte el mismo volumen despuès de 1:10 ò 1:100 dilusiones de muestra.

6. Ajuste solvente. Siempre que sea posible, inyecte muestras en fase mòvil

7. Substituya la columna por una nueva del mismo tipo para confirmar si la columna es la causa. Descarte la columna vieja si los procedimientos de restauraciòn fallan.

6.Pérdida de resolución

1. Fase mòvil contaminada / deteriorada (causando cambios en tiempo de retenciòn y/o selectividad ).

2. Guardacolumna o columna obstruida

1. Prepare fase mòvil fresca

2. Remueva guardacolumna y repita el anàlisis. Si la columna analìtica està obstruìda dele vuelta y enjuague, si el problema persiste, la columna debe estar tapada con contaminantes fuertemente retenidos. Use el procedimiento adecuado de restauraciòn. Si el problema persiste, cambie los frits o reemplace la columna.

7.Picos partidos

1. Contaminaciòn en precolumna o columna

2. Frit parcialmente bloqueado

3. Pequeño espacio muerto a la entrada de la columna

4. Solvente de la muestra incompatible con la fase mòvil

1. Remover columna y repetir el anàlisis. Si la columna analìtica està obstruìda dele vuelta y enjuàguela, si el problema persiste, la columna puede estar tapada con contaminantes fuertemente retenidos. Use el procedimiento adecuado de restauraciòn. Si el problema persiste, probablemente los frits estàn parcialmente tapados, cambie frits o reemplace la columna.

2. Reemplace frits

3. Trate de re-empacar el espacio muerto con una pelìcula de partìculas de la misma fase de la columna. Continùe usando la columna con el flujo en direcciòn contraria.

4. Ajuste solvente. Siempre que sea posible, inyecte muestra en fase mòvil.

8.Picos coleados en inyecciones iniciales o ùltimas

1. Muestra reaccionando con sitios activos.

2. Fase mòvil con pH incorrecto

3. Tipo de columna incorrecta

• 1. verificar el desempeño de la columna con un estándar y luego con la mezcla. Si los resultados de la mezcal son correctos agregar el agente completando la base o modificando el ácido.

• 2.Ajustar el pH. Los compuestos básicos de pH bajo generalmente registran picos mas simétricos.

• 3. Intentar con otro tipo de columna.

• 4. observar el problema 7.

• 5. Los picos pueden tener cola cuando la muestra es inyectada en un solvente mas fuerte que la fase móvil. Disolver la muestra en fase móvil

9.Picos Coleados

• Columna Analítica contaminada o fuera de uso

• Fase Móvil contaminada

• Interferencia en la muestra

• 1. Desmontar la pre columna (si está puesta) y repetir el análisis. Reemplazar la pre columna si es necesario. Si la columna analítica es la fuente del problema, usar el procedimiento adecuado de restauración. Si el problema persiste reemplazar la columna

• 2. Verificar la elaboración de la fase móvil

• 3. Verificar el desempeño de la columna con estándares.

10.Picos Frontales

• Columna sobre cargada.

• Solvente de la muestra incompatible con la fase móvil

• Hombro o movimiento de la linea base antes del pico principal causado probablemente por otro componente en la muestra.

• 1. Inyectar un pequeño volumen (10l vs.100l). Diluir la muestra1:10 o 1:100 duplicar en caso de masa sobre cargada

• 2. Ajustar el Solvente. Cuando sea posible inyectar muestras en fase móvil. Purgue la columna consolidada con 50 veces el volumen de la columna de acetato de etilo a un flujo 2 o 3 veces mayor que el flujo estándar, después con un solvente de polaridad intermedia previa al análisis

• 3. Incrementar la eficiencia o cambiar la selección para mejorar la resolución. Intentar con otro tipo de columna si es necesario

11. Picos Redondeados

• Detector operando fuera del rango dinámico lineal

• Ganancia baja del registrador

• Columna sobre cargada

• Interacción de muestra y columna

• Tiempo del registrador o detector constantemente altos

• 1. Reducir el volumen o concentración de la muestra

• 2. Ajustar la ganancia

• 3. Inyectar un pequeño volumen (10l vs.100l). Diluir la muestra 1:10 o 1:100

• 4. Cambiar la fuerza iónica del buffer, el pH, o la composición de la fase móvil. Si es necesario cambiar el tipo de columna o bien aumentar la temperatura de la columna.

• 5. Aumentar los valores del Data Rate hasta el valor para el cual no se observa ninguna mejora.

12. Ruido en la línea base

• Variación en la temperatura de la columna

• Fase móvil no homogénea

• Aire o algún contaminante en la celda del detector

• Tapón después de la línea de salida del detector

• Problema con la mezcla de fase móvil o variación en el flujo

• Estabilización lenta de la columna en especial cuando cambia la fase móvil

• Fase móvil contaminada, deteriorada o preparada con compuestos químicos de pureza inadecuada.

1. Controlar la temperatura de la columna y fase móvil. Usar un controlador de temperatura antes del detector.

2. Usar solventes grado HPLC, aditivos y sales de alta pureza. Desgasificar la fase móvil antes de su uso .Burbujear con Helio durante su uso

3. Dejar fluir metanol u otro solvente fuerte a través de la celda. Si es necesario limpiar la celda con 1N HNO3 nunca con HCl y nunca usar ácido nítrico concentrado en tuberías PEEK

4. Desconectar o reemplazar la línea. Hacer referencia al detector manual para reemplazar ventana

5. Corregir la composición / Flujo. Para evitar problemas monitorear continuamente la composición y el flujo

6. Dejar fluir por la columna un solvente de fuerza intermedia un volumen de 10-20 columnas con la nueva fase móvil antes del análisis.

7. Verificar la elaboración de la fase móvil

8. Usar una pre columna. Si es necesario purgar la columna con un solvente fuerte entre inyecciones o mientras dure el análisis

9. Cambiar la longitud de onda para la absorbancia máxima de UV

13.Ruido en la Línea Base (Regular)

1. Aire en la fase móvil, en la celda del detector, o en la bomba

2. Pulsaciones en la bomba

3. Mezcla incompleta de la fase móvil

4. Efecto de temperatura (columna a alta temperatura y detector con baja temperatura)

5. Otro equipo conectado a la misma línea

6. Fugas

1. Desgasificar la fase móvil ,purgar el sistema para remover aire desde la celda del detector o la bomba.

2. Incorporar un damper al sistema

3. Mezclar la fase móvil con la mano o usar un solvente menos viscoso

4. Agregar un intercambiador de calor

5. Aislar el HPLC, detector, registrador para determinar si la fuente del error es externo. Corregir si es necesario.

6. Verificar que el sistema no tenga fugas, sales, ruidos inusuales. Cambiarlos sellos de las bombas si es necesario

14. Ruido en la línea base (irregular)

1. Fugas

2. Fase móvil deteriorada, contaminada o preparada con compuestos de baja pureza

3. Fallas electrónicas en el detector

4. Aire atrapado en el sistema

5. Burbujas en el detector

6. Celda contaminada (incluso pequeñas cantidades de contaminante pueden causar ruido)

7. Lámpara del detector débil

8. Fuga de sílice en la columna o el material de empaque

1. Verificar conexiones flojas, fugas, sales o ruidos inusuales. Cambiar los sellos de la bomba si es necesario

2. Verificar como se elaboro la fase móvil

3. Aislar el detector y el registrador electronicamente.

4. Purgar el sistema con un solvente fuerte.

5. Purgar el detector, instalar regulador de contra presión a la salida del detector

6. Limpiar la celda

7. Reemplazar lámpara

8. Reemplazar la columna y limpiar el sistema

15. Picos Anchos

1. Cambio de la composición de fase móvil

2. Flujo de la fase móvil muy baja

3. Fugas especialmente entre la columna y el detector

4. Parámetros incorrectos del detector

5. Efectos extra de la columna1. Columna sobrecargada2. Tiempos y volúmenes muy altos causados por el detector3. Tubería entre columna y detector muy grandes o ID muy largo4. Registrador responsable de tiempos muy altos

6. Concentración del buffer muy baja

7. Pre columna contaminada o fuera de uso

8. Columna contaminada o fuera de uso

9. Vació en la entrada de la columna

10. El pico representa dos o mas picos con resolución pobre

11. La temperatura de la columna es muy baja

1. Preparar nueva fase móvil

2. Ajuste el flujo

3. Verificar que no existan conexiones flojas en el sistema, fugas en la bomba, existencia de sales o ruidos raros. Cambiar los sellos de la bomba si es necesario

4. Ajustar los parámetros

5. Inyectar un Volumen menor (10l vs. 100l o una disolución de muestra de 1:10 y 1:100. Reducir el tiempo de respuesta o usar una celda mas pequeña. Usar tubería de diámetro mas pequeño (0.007-0.010”)

6. Incrementar la concentración

7. Reemplazar la pre columna

8. Reemplazar la columna por una del mismo tipo. Si la nueva columna no proporciona picos Angostos . Purgar la vieja columna, después repetir la prueba.

9. Reemplazar la columna o abrir la línea de entrada y llenar el vacío.

10. Cambiar el tipo de columna o mejorar la sepatración

11. Incrementar la temperatura, no exeder los 75º C a menos de que las temperaturas mas altas sean aceptables para el fabricante de la columna

16. Variación en la altura de los picos

1. Uno o mas componentes de la muestra están deteriorados o ha cambiado la actividad de la columna

2. Fugas, especialmente entre el puerto de inyección y la entrada de la columna (la retención podría cambiar también)

3. Volumen de la muestra inconsistente

4. Variación en los parámetros del detector y del registrador

5. Lámpara del detector débil.

6. Contaminación en la celda

1. Usar una muestra fresca para confirmar si ésta es la fuente del problema. Si algunos o todos los picos permanecen más pequeño de lo esperado, reemplazar la columna. Si la nueva columna mejora el análisis reinstalar la vieja columna, siguiendo el procedimiento adecuado. Si el desempeño no mejora descartar la vieja columna

2. Revisar conexiones flojas, fugas, sales, ruidos inusuales, cambiar los sellos de la bomba si es necesario.

3. Asegurarse de que las muestras son consistentes. Para un loop de volumen fijo use 2 o 3 veces el volumen del loop para asegurarse de que éste está totalmente lleno. Asegurarse de que los viales del muestreador contienen suficiente muestra y no burbujas de aire. Verificar que no exista aire en la jeringa. En sistemas con pasos de lavado o purgaasegurar que la solución de enjuague no precipite los componentes de la muestra

4. Verificar los parámetros

5. Reemplazar la lámpara

6. Limpiar la celda

17. Variación de Selectividad

1. Incrementar o decrementar la fuerza iónica del solvente, pH, o concentración aditiva (especialmente afecta solutos iónicos)

2. Cambio de Columna, la nueva columna tiene una selectividad diferente a la de la vieja columna.

3. Muestra inyectada en un solvente incorrecto o en cantidad excesiva (100-200 l) de solvente fuerte

4. Variación de la temperatura de la columna

1. Verificar la elaboración de la fase móvil

2. Confirmar la identidad del empaque de la columna. Para análisis reproducible use el mismo tipo de columna. Establecer si el cambio tomo lugar gradualmente. Si es así la fase estacionaria se pudo haber disuelto. La actividad de la columna pudo haber cambiado o la columna está contaminada

3. Ajustar solvente. Siempre que sae posible inyecte muestra en fase móvil

4. Ajustar temperatura. Si es necesario usar un horno de temperatura para mantener la temperatura constante

18. Picos Negativos

1. Conexión intercambiada del registrador.

2. Índice de refracción del soluto menor que el de la fase móvil (Detector RI)

3. La muestra del solvente y la fase móvil difieren en gran medida en composición.

4. La fase móvil tiene mayor absorbancia que los componentes de la muestra en la región ultravioleta

1. Verificar polaridad de la conexión del registrador

2. Usar fase móvil con menor índice de refracción o intercambie las conexiones del registrador

3. Ajustar o cambiar el solvente de la muestra. Diluir muestra con fase móvil siempre que sea posible

4. Cambiar la polaridad del registrador cuando use detección UV o Cambie la longitud de onda o usar fase móvil que no absorba la longitud de onda elegida

19. Picos Fantasma

1. Contaminación en el inyector o columna

2. Pico de elusión tardío (Usualmente ancho) presente en la muestra

1. Enjuagar el inyector entre análisis. Si es necesario correr solvente fuerte a través de la columna para remover las elusiones tardías. Incluir un paso de lavado al final de los análisis de gradiente, para remover, compuestos retenidos fuertemente.

2. Verificar la preparación de la muestra. Incluya un paso de gradiente para expulsar el componente rapidamente