CITOMETRA DE FLUJO

CITOMETRA DE FLUJO

Magnetismo y ptica

Alumno

Herson Isaac Flores Hernndez

Citometra de flujo

La citometra de flujo es una tcnica de anlisis que permite la caracterizacin fenotpica celular mediante el estudio de la dispersin de la luz y fluorescencia emitidas cuando la clula atraviesa un rayo laser.

Componentes fundamentales

Rayo lser

Sistema de flujo que contiene la preparacin a analizar

Diferentes detectores lumnicos y fluorescentes

Sistema electrnico de registro de la informacin

Rayo Laser

Sistema de flujo que contiene la preparacin a analizar

Diferentes detectores lumnicos y fluorescentes

Sistema electrnico de registro de la informacin

PRINCIPIO

La suspensin celular atraviesa el lser permitiendo que sus elementos formes produzcan alteraciones del haz de luz. Las clulas pasan ordenadamente registrando de forma individualizada cada una de sus caractersticas.

Cuando la clula atraviesa el lser provoca una penumbra longitudinalmente al lser, esta penumbra es proporcional al tamao de la clula se denomina Foward de Scatter y puede ser detectada mediante un receptor luminoso colocado en el recorrido del lser.

Los orgnulos intracelulares producen difracciones del haz de luz, el nivel de difraccin de luz ser proporcional a la complejidad del citoplasma celular, estos ases de luz pueden detectarse colocando un receptor lumnico perpendicularmente al laser la informacin recogida por este receptor se denomina Side Scatter.

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Mediante reacciones antgeno anticuerpo se puede recubrir la superficie celular con sustancias fluorescentes denominadas fluorocromos.

La informacin lumnica y fluorescente que ofrece la clula es recogida por los reflectores.

El receptor FS recoge la penumbra celular, el receptor SS recoge la cantidad de luz del lser desviada proporcional a la complejidad del citoplasma

La fluorescencia emitida por los fluorocromos es recogida por diferentes receptores tras ser filtrada por diferentes cristales dicroicos. Los cristales dicroicos tienen la capacidad de reflejar longitudes de onda determinadas permitiendo que las dems la atraviesen sin sufrir modificaciones.

Los diferentes receptores transforman la luz en seales elctricas que son enviadas a un registro informtico.

Diferentes Fluorocromos

Complejidad del citoplasma

Tamao de la clula

Presencia de parmetro de longitud de onda de un fluorocromo. Eje X diferentes intensidades y en eje y contabiliza el nmero de clulas que emitieron luz de esa intensidad y color.