Citometría hemática

• INTRODUCCIÓN.

– Sangre:• 5 a 6 litros. 7 a 8% del peso corporal.

• Sus variaciones son generalmente el primer signo de enfermedad.

Citometría hemática.

Plasma: agua, iones disueltos, proteínas, carbohidratos, grasas, hormonas, vitaminas, enzimas.

Elementos celularesEritrocitos: 45%Leucocitos y plaquetas 1%

• INTRODUCCIÓN.– Citometría hemática, término adecuado.

– Citós = célula, metrós= medida haema, haematos = sangre.

– Término clásico: Bios = vida, metros = medida.

– 1er paso para evaluar función hematológica y diagnóstico de enfermedades.

– Exámen cuidadoso de …


Morfología celular.Cuantificación de cada tipo.Tamaño, forma.

• INTRODUCCIÓN.

– Recolección y transporte apropiado del especimen.

– Anticoagulantes mas usados

– Comunicación con el laboratorio.– Correlación clínica.

– Factores del paciente que pueden afectar las medidas hematológicas.


EDTA (Ácido etilaminotetracético)Citrato trisódicoHeparina

Actividad del paciente.Hidratación.Medicación.Sexo, edad, raza, tabaquismo,

ansiedad.Ubicación geográfica.

Venopunción.AlmacenajeConcentración de anticoagulante

• INTRODUCCIÓN.– Cuenta celular.

• Métodos manuales.– Hematocitómetro o cámara de

Neubauer.

– Hematocrito con centrifugación.

– Hemoglobinas determinadas espectrofotometricamente.

– Frotis de sangre periférica.


Métodos imprecisos.… Requieren largo tiempo, paciencia y recursos humanos.

• INTRODUCCIÓN.– Cuenta celular

• Métodos automatizados.– Alr. De 1950. Fiabilidad, precisión y exactitud crecientes.– Permite conteo completo de células sanguíneas, volúmenes,

diferencial, histogramas, dispersogramas.


Dependientes de cambios en impedancia de flujo eléctrico.

Contadores ópticos (dispersión de un haz de luz).

CoulterTOA SysmexAbbott Cell

Dyn.Technicon H System

• INTRODUCCIÓN.– Análisis morfológico de las células sanguíneas.


• Fórmula roja.

• Fórmula blanca.

• Fórmula trombocítica.

Citometría hemática.Eritrocitos. (mill/mm3)Hemoglobina. (g/dl)Hematocrito. (%)Volumen corpuscular medio (fl)Medidas de dispersión.Concentración media de Hb corpuscular (CMHC)(pg)Hemoglobina corpuscular media (HCM) (g/dl)

Leucocitos totales.Diferencial: Linfocitos. (% y xmm3) Monocitos.

Segmentados:

Cuenta total (por mm3)VPM.

• Fórmula roja:

– Cuenta de globulos rojos (mill/mm3)

– VCM (Volumen corpuscular medio (fl)

– Concentración de Hb. (g/dl)


Medido por la mayoría de los contadores de células.

De allí vienen todos los parámetros….

Índices eritrocitarios (Wintrobe).

Hematocrito. (%)Concentración media de Hb corpuscular (CMHC)(pg)Hemoglobina corpuscular media (HCM) (g/dl)

– HEMOGLOBINA…• Medida en gramos por decilitro (g/dl), cantidad de proteína por

unidad de volumen. • Métodos colorimétricos y espectrofométricos.• Define anemia…• Cifras variables

• Cifras de referencia en la Cd. De México en adultos sanos.


Edad.Sexo.Altura sobre el nivel del mar.

Mujeres Hombres

12.5 g/dl - 16 15.5 g/dl – 19.6

– HEMATOCRITO…• Proporción del volumen sanguíneo total ocupada por los

eritrocitos, medido en %• No debe ser medida de anemia.• Valores normales dependientes…



Edad.Sexo.Altura sobre el nivel del mar.

Mujeres Hombres

39-50% 46-56%

– HEMATOCRITO…

– … en centrífuga …

– … en contadores electrónicos …


Método manual p/empacar los glóbulos rojos en un pequeño volumen.

Múltiples problemas mecánicos.

Hto (µl/100µl) = RBC en millones/µl x VCM en fl

10

Problemas: Falso aumento de VCM y dism. De RBC por aglutininas frias.

– Número de glóbulos rojos…• Se mide en millones/microlitro.• Citometría de flujo. Métodos manuales muy

inexactos.• Valores dependientes.



Mujeres Hombres

4.1 a 5.7 mill/microlitro 5.0 a 6.3 mill/microlitro

– Volumen globular medio…• Se mide en femtolitros (fl)• Citometría de flujo.• VCM = Hto (L/L) x 1000 / RBC (x1012/L)• De gran valor para clasificación de anemias.



Mujeres Hombres

78 a 103 fl 83-89 fl

– Alteraciones en el tamaño y volumen…


Descripción Morfología Patología asociada

Anisocitosis Desigualdad en el tamaño

Inespecífico, constante en transfundidos

Microcitosis Diám <6µm y volumen < 80 fl

Anemia ferropénica, talasemia, enf crónicas, hipertiroid, Def de PK

Macrocitosis Diám ÷ 8-11µm y vol > 100 fl

Dèficit de factores madurativos (B12, ac fólico), hepatopatías crón, SMD, eritroblastosis fetal.

Megalocitosis Diam > 12µm flVol > 100 fl

Anemias megaloblásticas (A. perniciosa).

– Volumen globular medio…• Aumento del VCM (macrocitosis)

– Megaloblastosis

– Causas no megaloblásticas.


Déficit de factores madurativos (cobalamina y/o folato)Administración de citostáticosHemólisis crónica generalmente medicamentosaDiseritropoyesis con rasgos megaloblásticosSíndromes mielodisplásicosTrastornos congénitos de la síntesis del ADN.Hemopatías malignas con megaloblastosis

Reticulocitosis, Alcoholismo, TabaquismoHepatopatía crónica, HipotiroidismoMacroglobulinemia de WaldenströmEnfermedad por crioaglutininas frias (crioaglutininas)Déficit de cobre, aplasia medular, eritroblastopenia,

diseritropoyesis sin rasgos megaloblásticos,Síndrome de Down, EPOC.

– Volumen globular medio…

• Disminución del VCM (microcitosis)

– Carencia del hierro

– Trastornos en la síntesis de cadenas de globina.

– Trastornos en la utilización de hierro.


Talasemias.Hemoglobinopatías con déficit de

síntesis.

Anemia inflamatoria.Anemia sideroblástica.Atransferrinemia.Anticuerpos antirreceptor de transferrina.

Ferropenia y anemia ferropénica.

– Amplitud de distribución eritrocitaria…

• Sinónimos: ADE, RDW (Red cell distribution width). Índice de variación del volumen globular medio.

• Desviación estándar expresada como %.• Normal: 11 a 15%.• Histograma de distribución de frecuencias por el citómetro de flujo.


Desv. EstándarVCM.

ADE = X 100

– Amplitud de distribución eritrocitaria…


– Hemoglobina corpuscular media (HCM)…• Expresada en picogramos (pg).• Cantidad promedio de Hb en cada eritrocito.• Niveles normales de 27 a 34 pg.

• Valor subnormal…Hipocromia.

• Valor normal…. Normocromia.


1er lugar: ferropenia2º. Talasemia.

– Concentración media de hemoglobina corpuscular (CmHb)…

• Índice eritrocítico medido como %.

• En métodos manuales. Menos útil y exacto.

• Valores normales: 32 a 34%.

– Hb x 100 / Hto.


• Alteraciones de la colaboración de la Hb


Descripción Morfología Patología asociada

Hipocromía Se tiñen debilmente

Anemias ferropénicas.

Policromasia Grisáceos, conservan parte del material basófilo del eritroblasto.

Situación de inmadurez celular.

– Índice reticulocitario…• Proporción porcentual de células rojas

inmaduras recientemente desprovistas del núcleo, que han sido emitidas a la sangre periférica prematuramente por la médula osea.

• Índice indirecto de la magnitud de la eritropoyesis en la médula osea.


– Índice reticulocitario…• Tinciones supravitales.• Tinción de ácidos nucleicos, dispuestos en el

citoplasma a manera de red.


Hoffman. Hematology. 3rd. Edition. 2000.

– Otras alteraciones de serie roja descritas en la citometría hemática.

• Formación de Rouleaux. (pseudoaglutinación)

• Altas concentraciones de globulinas anormales o fibrinógeno.


Mieloma múltiple.Macroglobulinemia de

Waldenstrom.Crioglobulinemia, etc.


• Alteraciones de la forma.– Esquistocitos.– Dacriocitos.– Esferocitos.– Ovalocitos, eliptocitos, drepanocitos, células en diana,

estomatocitos.– Eritrocitos espiculados: equinocitos, en casco,

acantocitos, excentrocitos.



• Inclusiones eritrocitarias.– Cuerpos de Howell-Jolly– Anillos de Cabot– Punteado basófilo– Cuerpos de Pappenheimer– Reticulocitos– Cuerpos de Heinz– Siderocitos.– Parásitos



• Basofilia difusa, punteado basófilo.



• Parásitos eritrocíticos (plasmodium).


• Fórmula blanca.


Leucocitos totales.Diferencial: Linfocitos. (% y xmm3) Monocitos.

Segmentados:

Alteraciones.

– Número de glóbulos blancos…

• Se mide en miles por microlitro o mm3.• Dilución con una sustancia que hemolizante (ácido o

detergente)• Citometría de flujo.

• Valores dependientes.

• Cifras de referencia: 4 000 a 12 000 mm3


Edad.PesoRaza.Medicamentos, hormonas.

– Causas de leucocitosis (>12 000 mm3)


– Causas de leucocitosis (>12 000 mm3)• Infecciones agudas.

• Intoxicaciones.

• Inflamación crónica, neoplasias no hematológicas.• Hemólisis o hemorragia aguda.• Padecimientos mielo o linfoproliferativos.

• Necrosis tisular.

• Condiciones fisiológicas.


Metabólicas: uremia, acidosis, toxemia gravídica, gota aguda.Otras: envenenamiento por químicos o venenos (mercurio, veneno de

arácnido, adrenalina).

Leucemias crónicas o agudas.PRV, MMA.

IAMNecrosis de tumores.Quemaduras.Gangrena, necrosis bacteriana.

Ejercicio, estado postictal.Tensión emocionalTrabajo de partoMenstruación, asplenia.

– La “Reacción leucemoide”.• Leucocitosis > 50 000/mm3• Incremento en precursores: mielocitos,

metamielocitos, bandas. Promielocitos y mieloblastos en reacciones severas.

• Morfología normal. Granulac. Tóxicas.• Dx diferencial: LMC. Reacc

leucoeritroblástica.


Infecciones agudas.

Intoxicaciones.

Hemorragia aguda.

Hemólisis aguda.

Padecimientos mielo o linfoproliferativos.

Necrosis tisular.

Condiciones fisiológicas.

– Cuenta diferencial normal de glóbulos blancos en el adulto.


Célula Porcentaje (%)

Límites absolutos (/µl)

Neutrófilos totales 40-85 1500-7000

Metamielocitos 0-2 < 10-500

En banda 0-11 100-800

Segmentados 40-74 2000-6000

Eosinófilos 0-7 <100-200

Basófilos 0-3 <10-20

Monocitos 1-13 100-800

Linfocitos 12-46 1000-4200

– Proporción normal de glóbulos blancos de acuerdo a la edad.


Leuc Neutr Linf Monoc Eos

Edad Media Media % Media % Media % Media %

Nacimiento 18.1 11.0 61 5.5 31 1.1 6 0.4 2

12 hrs 22.8 15.5 68 5.5 24 1.2 5 0.5 2

24 hrs 18.9 11.5 61 5.8 31 1.1 6 0.5 2

1 sem 12.2 5.5 45 5.0 41 1.1 9 0.5 4

2 sem 11.4 4.5 40 5.5 48 1.0 9 0.4 3

1 mes 10.8 3.8 35 6.0 56 0.7 7 0.3 3

– Proporción normal de glóbulos blancos de acuerdo a la edad.


Leuc Neutr Linf Monoc Eos

Edad Mean Mean % Mean % Mean % Mean %

6 meses 11.9 3.8 32 7.3 61 0.6 5 0.3 3

1 año 11.4 3.5 31 7.0 61 0.6 5 0.3 3

2 años 10.6 3.5 33 6.3 59 0.5 5 0.3 3

4 años 9.1 3.8 42 4.5 50 0.5 5 0.3 3

6 años 8.5 4.3 51 3.5 42 0.4 5 0.2 3

8 años 8.3 4.4 53 3.3 39 0.4 4 0.2 2

10 años 8.1 4.4 54 3.1 38 0.4 4 0.2 2

16 años 7.8 4.4 57 2.8 35 0.4 5 0.2 3

21 años 7.4 4.4 59 2.5 34 0.3 4 0.2 3

– Causas de Neutrofilia (> 1800/ mm3).• Secundarias…

– Infección.– Estrés.– Inflamación crónica.– Inducida por fármacos.– Neoplasia no hematológica.– Estimulación generalizada de la médula osea (hemólisis).– Asplenia e hipoesplenismo.


– Causas de Neutrofilia (> 1800/ mm3).• Primarias…

– Neutrofilia hereditaria.– Neutrofilia crónica idiopática.– LMC y otros síndromes mieloproliferativos.– Enfermedad mieloproliferativa familiar.– Anomalías congénitas: trombocitopenia amegacariocítica,

tetralogía de falot, síndrome de Down.– Deficiencia de adhesión de leucocitos.


– Neutropenia (<1500mm3).• Clasificación:


Cuenta de neutrófilos/mm3

Significado clínico.

1500 Normal.

1000- 1500 Sin propensión significativa a infección. La fiebre puede ser manejada ambulatoriamente.

500-1000 Cierta propensión a la infección. Ocasionalmente la fiebre se maneja ambulatoriamente.

< 500 Predisposición significativa a infecciones. Pocos signos clínicos de infección. Manejo de fiebre con antibióticos parenterales.

– Causas de Neutropenia (<1500mm3).• Adquirida…

– Postinfecciosa.– Inducida por fármacos.– Neutropenia familiar benigna.– Neutropenia crónica benigna infantil.– Neutropenia crónica idiopática.– Neutropenia autoinmune.– Neutropenia asociada con anormalidades inmunológicas.– Asociada con enfermedades metabólicas.– Debida a incremento en la marginación.– Déficit nutricional.


– Causas de Neutropenia (<1500mm3).• Defectos intrínsecos…

– Síndrome de Kostman (agranulocitosis infantil severa).– Mielocatéxis/neutropenia con nucleo tetraploide.– Neutropenia cíclica.– Síndrome de Swacheman-Diamond-Oski.– Síndrome de Chediak-Higashi.– Disgenesis reticular.– Disqueratosis congénita.


– Causas de Linfocitosis (> 5 000/mm3).• Infecciosas.

– Por virus…

– Por otros agentes…

• Otras.– Leucemia linfocítica crónica.– Tirotoxicosis.– Neutropenia con linfocitosis relativa.


VaricelaTos ferinaMononucleosis infecciosaHepatitisParotiditisRubeola

TuberculosisBrucelosisSífilisToxoplasmosis

– Causas de Eosinofilia (> 5 00 mm3).• Alérgicas: asma bronquial, fiebre del heno, urticaria.• Parásitos: Triquinosis, hidatidosis, larva migrans.• Infecciosas: Escarlatina.• Padecimientos cutáneos: Pénfigo, dermatitis

herpetiforme.• Padecimientos gastrointestinales: Gastroenteritis

eosinofílica, enteritis reginoal, CUCI.• Enf. Hematológicas: …• Otras …


– Causas de Eosinofilia (> 5 00 mm3).

• Enf. Hematológicas:

• Otras.


Síndrome hipereosinofílico.Leucemia mieloide crónica.Policitemia vera.Enfermedad de Hodgkin.Anemia perniciosa.

Poliarteritis nodosa.Tumores ováricos.Sarcoidosis.Endocarditis de Löffler.Intoxicación por fósforo.Mordedura de araña.

– Causas de Basofilia (> 200 mm3).• Trastornos alérgicos.• Leucemia mieloide crónica.• Otros SMP: Policitemia vera, Metaplasia mieloide agnogénica.• Enfermedad de Hodgkin.


Anemia hemolítica crónica.

Sinusitis crónica, varicela, mixedema, síndrome nefrótico, postoperatorio a esplenectomía, etc.

– Causas de Monocitosis (> 800/ mm3).• Menos definido que granulocitos.• Enfermedades inflamatorias crónicas.

– Enf. Infecciosas: Tb, sífilis, endocarditis bact. Subaguda.– Autoinmune, granulomatosas: LES, AR, arteritis temporal,

miositis, PAN, CUCI, sarcoidosis, enteritis regional.

• Enfermedades malignas:– SMD, leucemia, histiocitosis, enf. Hodgkin, LNH, carcinomas.

• Otros:– Neutropenia crónica, postesplenectomía.


– Otras células en sangre periférica…• Plasmocitos.


Blastos

• Fórmula trombocítica.


Cuenta total (por mm3)VPM.

• Fórmula trombocítica.– Clasificación de las trombocitopenias.

• De origen central…

• De origen periférico…


Amegacariocíticas.Megacariocíticas.

Inmunológicas.Hiperconsumo.


• De origen central…– Amegacariocíticas.

» Depresión medular.

» Invasión medular.

» Insuficiencia medular.

– Megacariocíticas.


Tóxicos, medicamentos, radiación, infecciones (rubeola congénita, infecc virales).

Leucemia y otras hemopatías.Cáncer metastásico.

Aplasia, hipoplasia, mielofibrosis, a. de Fanconi, idiopática, trombocitopenia cíclica, heredditaria, amegacariocítica con malformaciones congénitas.

Síndromes congénitos..


• De origen periférico…

– Inmunológicas.

– Por hiperconsumo.


Sepsis, hiperesplenismo, hemangiomas, microangiopatía, CID, hemorragia,

Hemodiálisis, circulación extracorpórea.

• Fórmula trombocítica.– Conducta diagnóstica.

• Comprobar cifra.• Detectar alteración en otras series.• Elucidar si es megacariocítica o amegacariocítica.


– Posibilidades de error en la citometría hemática.

Citometría hemática.Componente Alteración/condición Efecto en la cuenta

celularRazón

Eritrocitos Microcitosis o esquistocitosis Subestima RBC Umbral bajo para contar RBC

Cuerpos de Howell-Jolly Cuenta plaquetaria elevada Mismo tamaño que plaquetas.

Policitemia. Subestima RBC Dificultad para distinguir células.

Leucocitos Leucocitosis Sobrestima RBC Dificultad para distinguir células.

Leucemia aguda, LLC, infecciones virales.

Falsea cuenta baja de leucocitos.

Fragilidad incrementada de leucocitos

QT de leuc aguda Incrementa cuenta plaquetaria Fragmentos celulares identificados como plaquetas

Plaquetas Aglutininas plaquetarias Falsa trombocitopeniaFalsa leucocitosis

Agregación plaquetaria

Plasma Aglutininas frias Falsa macrocitosis Aglutinación, rouleaux

Crioglobulinas, criofibrinógeno.

Variación en la cuenta plaquetaria

Precipitados de proteínas identificados como plaquetas

Citometría hemática

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