Practico Nº 7: Micorrizas: bioinoculantes fúngicos,

estrategia para una agricultura sustentable

Objetivos:

Conocer las características de las endo y ectomicorrizas

Conocer las metodologías y procedimientos para la extracción

y cuantificación de esporas.

Adquirir habilidades y/o destrezas para la coloración y observación

de endomicorrizas.

Valorar la responsabilidad ,interacción, cooperación y respeto para

fomentar una eficiente labor grupal

Fertilizantes

Fertilizantes biológicos:

Fertilizantes no biológicos:

formulados con organismos vivos

formulados con compuestos químicos orgánicos

(por ej. urea, compost, lombricompuesto, estiércol,

abonos verdes, etc.) o inorgánicos

(por ej. fosfato de amonio, nitrato de amonio, etc.)

INOCULANTE:

Fertilizante biológico que se aplica a la semilla

en el momento de la siembra

Fertilizantes biológicos

Fijadores de N2: Rizobios

Azospirillum spp.

Anabaena

PGPR (promotores del crecimiento):

Microorganismos solubilizadores de P de vida libre

Hongos micorríticos

Mezcla de microorganismos no definidos

MICORRIZAS: simbiosis entre un hongo (mycos) y las raíces (rhizos)

de una planta. Ambos participantes obtienen beneficios

ECTOMICORRIZAS ENDOMICORRIZAS

Regiones templadas y frías Amplia distribución geográfica

Árboles y arbustos Todos los tipos de vegetación

+ de 5000 especies Cerca de 200 especies de

principalmente Basidiomycota Glomeromycota

Cambia la morfología de la raíz La morfología de la raíz no cambia

La planta es simbionte obligado La planta es simbionte facultativo

El hongo es simbionte facultativo El hongo es simbionte obligado

En las ectomicorrizas el micelio invade la raíz sin entrar en el interior

de las células, de aquí el nombre de ectomicorrizas.

Se ubican sobre y entre las separaciones de éstas.

Se pueden observar a simple vista y presentan la llamada Red de

Hartig

ECTOMICORRIZAS

En las endomicorrizas el micelio invade la raíz, inicialmente es

intercelular, pero luego penetra en el interior de las células radicales,

desde la rizodermis hasta las células corticales.

ENDOMICORRIZAS

La estructura típica de esta simbiosis es el ARBÚSCULO

Se desarrolla en las células corticales de la raíz por ramificación hifal.

Allí ocurre el intercambio de nutrientes entre la planta y el hongo.

Las HIFAS cenocíticas de los HMA crecen entre las células

corticales, y producen ENROLLAMIENTOS HIFALES.

Sólo en algunas especies: VESÍCULAS (estructuras globosas de

reserva)

ESPORAS (multinucleadas, origen asexual).

ESPORAS

FUNCIONES DE LAS MICORRIZAS

BENEFICIOS PARA LAS PLANTA

Incremento de la rizósfera

Incremento de la absorción de nutrientes a la planta al

aumentar la captación de iones especialmente los de

movilidad lenta (P, Zn, Cu)

Mayor tolerancia a situaciones de estrés (sequía,

salinidad, temperaturas bajas, anegamiento, deficiencia de nutrientes)

Control de adversidades abióticas

Control de adversidades bióticas (nematodos, algunos

patógeno fúngicos).

BENEFICIOS EN LOS ECOSISTEMAS

Rol en la fertilidad física del suelo (Agregación del suelo)

Reciclaje de nutrientes

Incremento de microorganismos beneficiosos del suelo

Importantes en el secuestro del C

Ayudan a las plantas frente al stress de la contaminación

Poseen influencias en el cambio climático global

Mantenimiento de la diversidad vegetal

¿Cómo se aíslan los MVA?

1. Trabajo de campo:

Recolección de muestras de suelo rizosférico

con propágulos fúngicos (esporas, micelio,

raíces colonizadas)

Recolección de plantas hospedantes

2. Cultivo de plantas-trampa:

Cultivo en invernadero de plantas

hospedantes inoculadas con las muestras

de suelo recolectadas

¿Cómo se cultivan las endomicorrizas?

MVA incapaces de reproducirse en ausencia de un

hospedante: biótrofos obligados

Cultivo in –vitro de hospedantesCultivo de plantas hospedantes

en condiciones de invernadero

Aislamiento de esporas para la producción de

inoculo puro

Tomar 50-100 gr de de suelo

Y diluirlo en 1 litro de agua

Agitar la solución y pasar a través de

Los tamices

Llenar la mitad del tubo con lo que se

recolecta de los contenidos de tamices y

agregar (hasta completar el tubo) con una

solución acuosa de sacarosa pura a 80 %

Centrifugar durante

5 minutos 2500-3000 rpm.

volcar sobre tamiz

lavar con

abundante agua

corrienteColocar en una caja de Petri y

observar en lupa

1

2

3

45

6

Raíz colonizada

Lavado de raíces

con aguaBaño maría

80°C 20min

Lavar con abundante agua

Acidificación

HCL 0,1N

T° Amb. 20min

Retirar el HCL

No enjuagar con agua

Tinción con azul de

Trypan o anilina

Baño maría

90°C 20min

Tinción de raíces

Clarificación

KOH (10%)

Preparación de los preparados

Se procede a montar las raíces a los porta objetos (10 raíces por porta ubicadas verticalmente)

Observar en microscopio

Actividades

1-Realizar la tinción de raíces de endo y ectomicorrizas

2-Observación microscópica de ecto y endomicorrizas

Realizar la observación en microscopio óptico de diferentes

estructuras: hifas, vesículas y arbúsculos de endomicorrizas e

hifas en ectomicorrizas.

3-Observación de estructuras simbióticas:

Observar raíces de pino bajo lupa.

Observar cortes histológicos de raíces bajo lupa.

Con bisturí realizar cortes transversales de raíces y

observarlos al microscopio