Toma de Muestras Para Análisis Toxicológico

8/17/2019 Toma de Muestras Para Análisis Toxicológico

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TOMA DE MUESTRAS PARA ANÁLISISTOXICOLÓGICO

1. TIPO DE MUESTRAS

En función de las lesiones observadas y la sospecha de

productos implicados pueden ser recomendablesdiferentes tipos de muestra, según se indica en la tabla siguiente.

No obstante, para levar a cabo un diagnóstico diferencial en caso de no haber una

sospecha clara y descartar/identicar los diferentes tóxicos puede ser necesario tomar

todas las muestras posibles, de forma general:

Contenido de esófao ! estó"ao# a mayor!a de los tóxicos son

de acción r"pida y se llegan a encontrar en alta concentración en el

tracto digestivo superior. #na ve$ absorbidos, tóxicos comoorganofosforados y carbamatos son r"pidamente degradados y

pueden no ser detectables en el h!gado. En al caso de observar

materiales extra%os como polvo, pasta, microgranulados &ue se

sospeche &ue son el tóxico, se recomienda introducirlo en un pe&ue%o

tubo para &ue no se me$cle m"s con el resto de alimento y sea m"s f"cil su detección.

$%ado# 'or ser un órgano &ue recibe todo lo absorbido por v!a digestiva es

recomendable su muestreo. En el caso de no haber contenido en el digestivo o si no se

detecta el tóxico en el digestivo puede ser útil anali$ar el h!gado. (lgunos tóxicos de

acción menos r"pida, como rodenticidas anticoagulantes, son acumulados y son

principalmente detectados en el h!gado. os metales pesados como el plomo tambi)n se

acumulan en el h!gado y el ri%ón y est"n bien denidas las concentraciones en estos

te*idos asociadas con la intoxicación letal en animales.



En&'fa(o )no es ne&esa*io e+t*ae*(o inta&to,# +omo la mayor parte de los productos

usados como veneno actualmente son plaguicidas anticolinester"sicos, es recomendable

determinar la actividad de la acetilcolinesterasa cerebral, &ue estar" normalmente muy

inhibida en el caso de exposición a carbamatos u

organofosforados. Esto permite orientar un an"lisis &u!mico y

al mismo tiempo permite conrmar un efecto del tóxico

&ue se asocia con la muerte del animal inhibición -01.

(lgunos compuestos organoclorados o el mercurio puedenser acumulados en el enc)falo a partir de la biomagnicación

en la cadena tróca hasta alcan$ar concentraciones

letales.

Ot*as "-est*as ade&-adasdeendiendo de (as &i*&-nstan&iasson#

Ce/os ! 0ó"itos# 2aterial sospechoso

encontrado cerca del cad"ver.

Evidentemente la concentración suele

ser m"s elevada &ue en los animales y

la detección del tóxico m"s probable.

San*e# 3e restringe la posibilidad de muestreo a animales vivos o reci)n muertos

cora$ón1, pero es de utilidad para determinar la exposición al plomo y as! poner

r"pidamente un tratamiento con &uelantes. 'ara la determinación de plomo se debe

tomar la sangre en tubos con heparina de litio. a sangre tambi)n puede ser muestreada

en tubos con citrato sódico como anticoagulante para la reali$ación de pruebas de

coagulación en el caso de intoxicación por rodenticidas anticoagulantes antagonistas de lavitamina 4. 5ambi)n se puede utili$ar para reali$ar un hemograma. a sangre de color

marrón puede indicar la intoxicación por nitratos, y en ese caso podemos determinar el

porcenta*e de metahemoglobina en sangre si )sta se anali$a en pocas horas o se

conserva en nitrógeno l!&uido.

P(as"a# Es posible determinar algunos tóxicos, pero sobre todo puede ser útil para

determinar la actividad de las colinesterasas

plasm"ticas por el mismo motivo dado para el muestreo

de enc)falo. 5ambi)n se puede utili$ar para hacer un

perl bio&u!mico de rutina.

Rión# En caso de intoxicación por herbicidas

dipiridilos para&uat1 el tóxico se acumula en el

ri%ón. En estas intoxicaciones es posible observar lesiones

pulmonares importantes congestión, edema1. El ri%ón puede ser tambi)n una muestra

útil en el caso de &ue el cad"ver haya sido devorado por depredadores y no &ueden restos

de tracto digestivo u h!gado. El cadmio se acumula a lo largo de la vida del animal en el

ri%ón, pudiendo alcan$ar concentraciones muy elevadas.

G*asa# No es un te*ido &ue sirva para determinar exposiciones agudas, pero s! es útil paramonitori$ar la exposición a compuestos lipólos persistentes, como son los compuestos

organoclorados. os plaguicidas m"s acumulables de esta familia no est"n en uso pero

todav!a son detectables en los animales. +ompuestos halogenados como los bifenilos



policlorados, polibromados y otros son altamente persistentes y tambi)n es necesario

monitori$arlos.

$-eso# El plomo se acumula en hueso a lo largo de la vida del animal, por lo &ue es una

muestra útil para estudios de monitori$ación.

Pe(o2 (-"as ! -as# (lgunos elementos como mercurio y ars)nico pueden acumularse

en estos anexos, indicando una exposición crónica o incluso exposiciones agudas letales.

Tie**a /a3o e( &ad40e*# En el caso de haberse recogido, siendo de especial inter)s encasos de cad"veres completamente descompuestos.

5. CONSER6ACIÓN 7 EN68O DE LAS MUESTRAS

as muestras deben estar exentas de contaminación &u!mica externa polvo, pelos, tierra,

etc.1, salvo &ue, lógicamente, esta sea la muestra a enviar o estos elementos formen

parte de la muestra. as muestras deben ser congeladas a 678+ inmediatamente tras su

recolección y enviadas manteniendo estas condiciones hasta su llegada al laboratorio. a

única excepción a esta regla se da en la muestra de sangre, la cual se mantendr" a

temperatura de refrigeración aproximadamente 98+1, con el n de poder reali$ar

pruebas de coagulación y el hemograma.

+ada muestra debe ir contenida en un recipiente independiente tipo envase pl"stico con

rosca o bolsa de pl"stico con cierre $iploc1, debidamente eti&uetado con la referencia delcaso y la naturale$a de la muestra. as bolsas tienen la venta*a de ocupar menos espacio

y poderse precintar f"cilmente con una eti&ueta autoadhesiva &ue incluya la información

de la muestra número de caso y tipo de muestra1.

El con*unto de muestras de un caso debe ir en una bolsa con precinto numerado tipo

brida. 5odos los contenedores deben estar herm)ticamente cerrados, tanto si son bolsas o

envases de pl"stico. En el caso de muestras en las &ue se deban determinar niveles tra$a

de compuestos org"nicos tipo '+;s o plaguicidas podr!a usarse papel de aluminio para

envolver la muestra antes de su introducción en el envase.

No se utili$ar"n conservantes, salvo indicación expresa del laboratorio. En caso de adición

de algún conservante deber" incluirse en el informe la información pertinente y se deber"

enviar al laboratorio una muestra de este. Este deber" enviarse en un recipiente



independiente y debidamente eti&uetado de manera &ue no exista posibilidad de

confusión con una muestra.

En caso de compuestos vol"tiles, tales como amonio o intoxicación por cianuro, se debe

congelar inmediatamente el contenido ruminal, sangre y suero tras la toma, con el n de

evitar su p)rdida por volatili$ación. 5odos los envases con cada muestra tomada del caso

deben introducirse en un embala*e, el cual ser" precintado de manera &ue se garantice

&ue cual&uier intento de manipulación de las muestras en )l contenidas de*e rastros

ine&u!vocos de tal acción.

Este embala*e deber" eti&uetarse de la misma forma &ue los envases contenidos y

siempre haciendo referencia al caso y a las actas &ue lo acompa%an. El env!o al

laboratorio de las muestras se har" en ca*as de porexp"n o similar, convenientemente

adecuado con sucientes acumuladores de fr!o como para garanti$ar &ue la muestra no

llega totalmente descongelada.

(dem"s, habr" de asegurarse el interior con material de embala*e &ue impida el golpeo y

la apertura de los recipientes durante el transporte. Es recomendable hacer los env!os a

principio de semana para evitar &ue las muestras se &ueden sin congelar durante el n de

semana. Es recomendable incluir muestras *adas para histopatolog!a con el n de

conrmar el diagnóstico en caso de duda.

9. IN:ORMACIÓN AD;UNTA A LAS MUESTRAS

<unto con las muestras se enviar" al laboratorio correspondiente un sobre con la solicitud

de an"lisis toxicológico por triplicado ver (nexo1 referido a cada caso, en la &ue se

detalle:

Especie. Número de animales del caso. N8 de caso del centro de recuperación única referencia1.

=echa del halla$go/muerte. ocalidad: 2unicipio y provincia. >alla$gos de campo: >"bitat, tipo de cultivos, ganader!a, cotos de ca$a, torres

el)ctricas, muerte de otros animales, cronolog!a de aparición de casos, datos del

radioseguimiento, tratamientos con tosanitarios o $oosanitarios?

Ca3as



>alla$gos de necropsia, de acuerdo con el informe pericial inicial. 5ipo de muestras remitidas. 'ara las diferentes muestras de un mismo caso se

recomienda asignar diferentes letras. 'or e*emplo, si han muerto tres buitres y se ha

tomado muestra de contenido g"strico e h!gado le asignaremos el número

+@=3A(/B al contenido g"strico y +@=3A;/B al h!gado del primer buitre,

+@=3A+/B y +@=37C/B a las muestras del segundo? 3ospechas de potenciales compuestos o productos tóxicos &ue pudieran estar

implicados, bas"ndose en cual&uier información disponible. En todo caso, esconveniente citar el grado de certe$a &ue se tiene de la sospecha. =echa de env!o. @esponsable del env!o escribir nombre y apellidos, CND, rma y sello del centro1. 'ersona &ue efectúa el transporte. En caso de empresa indicación de la misma y

forma de contacto tel)fono, fax o correo electrónico1. =echa de recepción. @esponsable de la recepción Nombre y apellidos, CND, rma y sello del centro1.

El laboratorio devolver" una copia rmada y sellada al remitente +entro de

@ecuperación1. 3e anotar"n las incidencias relacionadas con el env!o errores de

codicación, mala conservación?1. 3e ad*unta un formulario (nexo D1 &ue puede ser

utili$ado como referencia.

El personal del +entro de @ecuperación de =auna 3ilvestre de a (lfranca enviar"

igualmente una copia del informe6solicitud al +oordinador 'rovincial del 'lan de (cción

correspondiente.

<. ANÁLISIS TOXICOLÓGICO

@ecibidas las muestras, el laboratorio inscribir" en un libro de registro de entrada, almenos la fecha de recepción de las mismas, remitente, referencia del caso del remitente,

referencia del caso en el laboratorio, muestras remitidas y estado de las mismas as! como

consideraciones u observaciones sobre el precintados si es preciso.

<.1. Uso de /io"a*&ado*es

5eniendo en cuenta la historia cl!nica y los halla$gos de la necropsia, se puede reali$ar la

determinación de la actividad de la en$ima acetilcolinesterasa (+hE1 cerebral mediante

el m)todo de Ellman >ill y =leming AF71. Este biomarcador puede ser de utilidad en

muchos de los casos de envenenamiento por anticolinester"sicos, &ue son la mayor!a enla actualidad. os valores obtenidos se pueden comparar con los obtenidos mediante la

reactivación in vitro del en$ima mediante dilución de la muestra y con la adición de 76

'(2. Este ensayo puede ser llevado a cabo al inicio del estudio de cada caso con el n de

orientar el an"lisis, o a posteriori para conrmar la muerte por exposición a un

anticolinester"sico inhibición -G01 complementando los dem"s an"lisis de laboratorio

para el diagnóstico nal.



<.5. Dete&&ión de( tó+i&o

En el caso de los cebos y de los contenidos g"stricos, se reali$ar" un examen visual de la

muestra para detectar la presencia de formulados granulados u otro signo de presencia

de tosanitarios. 2ediante un m)todo general de extracción, puricación y determinación

se pueden identicar la mayor!a de los tóxicos, pero en el caso de &ue existan evidencias

de tóxicos concretos, o cuando se han descartado diversas posibilidades, puede ser

necesario llevar a cabo m)todos anal!ticos m"s concretos. Ce forma gen)rica, y para

garanti$ar la correcta identicación del tóxico, los compuestos org"nicos deben ser

anali$ados mediante detector de masas acoplado a cromatograf!a de gases o l!&uidos.

+uando esto no pueda ser llevado a cabo por no disponer de esta t)cnica anal!tica se

procurar" conrmar el resultado, mediante dos t)cnicas anal!ticas distintas. (ragon1

Dete*"ina&ión de dife*entes tios de s-stan&ias ne-*otó+i&as)o*anofosfo*ados2 &a*/a"atos2 o*ano&(o*ados2 a(fa&(o*a(osa2 /a*/it=*i&os,#

( partir de los cebos o contenidos g"stricos se reali$a una extracción con diclorometano

&ue, dependiendo del tipo de muestra, se puede anali$ar sin m"s puricación tras

evaporar mediante rotavapor o Hu*o de nitrógeno y resuspender en ,G ml de acetato de

etilo. En el caso del h!gado u otro te*ido paren&uimatoso se homogeni$a el te*ido consulfato sódico anhidro y se extrae de la misma forma &ue el contenido g"strico con

diclorometano. En los extractos obtenidos &ue re&uieran una puricación previa, esta se

puede llevar a cabo mediante cromatograf!a de permeación en gel a trav)s de una fase

de ;io6;eads 36IJ ;io6 @ad1 con acetato de etilo y ciclohexano A:A1 como fase móvil. Ce

forma alternativa, y si se tiene algún indicio del tipo de tóxico &ue se busca, es posible

utili$ar columnas preparativas de extracción en fase sólida 3'E1. En algunos casos, el

extracto obtenido mediante la K'+ tambi)n debe ser puricado adicionalmente mediante

t)cnicas alternativas e*.: 3'E, Luechers, etc1 antes de llevar a cabo su an"lisis. os

extractos puricados de cada muestra se pueden anali$ar mediante cromatograf!as del!&uidos y gases, pero siempre deber!an conrmarse los resultados mediante

espectrometr!a de masas, tanto por comparación de espectros de patrones o con las

bases de datos comerciales. (lgunas t)cnicas menos espec!cas y sensibles, como

cromatograf!a en capa na pueden ser de utilidad para hacer un primer estudio de las

muestras, en especial para el an"lisis r"pido de microgr"nulos y muestras con alta

concentración de tóxico.

Dete*"ina&ión de est*i&nina: (un&ue puede ser detectable con el mismo

procedimiento descrito en el apartado anterior, es recomendable llevar a cabo una

extracción m"s espec!ca con diclorometano y con una posterior puricación medianteextracción li&uido6l!&uido. os extractos obtenidos se anali$ar!an como en el apartado

anterior.



Rodenti&idas anti&oa-(antes# El h!gado o el cebo se homogeni$a con sulfato sódico

anhidro, se extrae con diclorometano u otras me$clas de solventes, se reali$a una

puricación mediante 3'E puede variar en función del tipo rodenticidas a anali$ar,

indandiona o cumarina1 y nalmente se anali$a por cromatograf!a de l!&uidos acoplada a

espectrometr!a de masas.

2etales y metaloides: 3e reali$a una digestión de la muestra lioli$ada de cebo o h!gado

con "cido n!trico y peróxido de hidrógeno u otras me$clas de "cidos1 en microondas o en

tubos de vidrio o cuar$o1 abiertos y se anali$a por t)cnicas espec!cas espectrometr!ade absorción atómica, D+', voltamperometr!a1.

>I>LIOGRA:8A(ragon, K. d. s.f.1. 'lan de (cción para la erradicación del uso ilegal de venenos en el

medio natural en (ragón. Mbtenido dehttp://.aragon.es/estaticos/Kobierno(ragon/Cepartamentos/(griculturaKanaderia2edio(mbiente/2edio(mbiente/(reas/7O;iodiversidad/PENENM3/'@M5M+MMO(N

(5M2MO'([email protected]

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