Cryptolaemus montrouzieri -...
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1. INTRODUCCIÓN La familia Pseudococcidae es la segunda más numerosa de los Coccoideos, incluye a los chanchitos blancos o cochinillas harinosas, especies polífagas, plagas de cultivos agrícolas, ornamentales y forestales. Los chanchitos blancos constituyen colonias sobre frutos, hojas y madera, así también en las raíces de numerosas plantas cultivadas y malezas, provocando importantes daños por su gran actividad de succión de los tejidos y por la producción de mielecilla (GONZÁLEZ, 1989). El conocimiento de las especies presentes o involucradas en el ataque de esta plaga, tiene importancia al utilizar insectos benéficos en su control, pues algunos de éstos son especialmente eficientes. Cryptolaemus montrouzieri Mulsant, ha demostrado ser un importante agente de control biológico de los chanchitos blancos en frutales. Sin embargo, soportan mal los inviernos fríos aunque es muy activo en verano. La multiplicación masiva de este enemigo natural para fines comerciales, depende en gran medida de la disponibilidad de éste en el momento oportuno. Por ello se busca desarrollar métodos de almacenaje que permitan disponer de cantidades suficientes a comienzo de temporada para su liberación en los huertos. El objetivo general de esta investigación es determinar el efecto de la edad y del almacenaje a baja temperatura en la supervivencia de Cryptolaemus montrouzieri Mulsant (Coleóptera: Coccinellidae).
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1. INTRODUCCIÓN
La familia Pseudococcidae es la segunda más numerosa de los Coccoideos,
incluye a los chanchitos blancos o cochinillas harinosas, especies polífagas,
plagas de cultivos agrícolas, ornamentales y forestales. Los chanchitos blancos
constituyen colonias sobre frutos, hojas y madera, así también en las raíces de
numerosas plantas cultivadas y malezas, provocando importantes daños por su
gran actividad de succión de los tejidos y por la producción de mielecilla
(GONZÁLEZ, 1989).
El conocimiento de las especies presentes o involucradas en el ataque de esta
plaga, tiene importancia al utilizar insectos benéficos en su control, pues algunos
de éstos son especialmente eficientes. Cryptolaemus montrouzieri Mulsant, ha
demostrado ser un importante agente de control biológico de los chanchitos
blancos en frutales. Sin embargo, soportan mal los inviernos fríos aunque es muy
activo en verano. La multiplicación masiva de este enemigo natural para fines
comerciales, depende en gran medida de la disponibilidad de éste en el momento
oportuno. Por ello se busca desarrollar métodos de almacenaje que permitan
disponer de cantidades suficientes a comienzo de temporada para su liberación en
los huertos.
El objetivo general de esta investigación es determinar el efecto de la edad y del
almacenaje a baja temperatura en la supervivencia de Cryptolaemus montrouzieri
Mulsant (Coleóptera: Coccinellidae).
Los objetivos específicos son:
1. Determinar el efecto de distintos tiempos de almacenaje a 15°C sobre la
supervivencia de pupas de Cryptolaemus montrouzieri Mulsant.
2. Determinar el efecto de distintos tiempos de almacenaje a 15°C sobre la
supervivencia de adultos de Cryptolaemus montrouzieri Mulsant.
2. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
2.1. Generalidades:
Cryptolaemus montrouzieri es el mejor controlador de los chanchitos blancos y su
acción en Chile se extiende hasta la VII región. No obstante, desde la V región
hacia el sur pueden pasar el invierno unos pocos individuos, por lo que se hace
necesario ejecutar liberaciones desde la primavera en adelante. Internaciones mas
recientes de razas provenientes de zonas más templadas muestran una mejor
adaptación a las condiciones invernales que ocurren en el área citrícola de la zona
central (ROJAS, 1987).
Este Coccinéllido fue importado desde EEUU entre los años 1931 y 1946. En 1995
se importó desde California una selección colectada desde una zona templada en
Australia y en 1996 una selección que se alimenta casi exclusivamente de
Saissetia oleae (INIA, 2004).
Mediante un programa de crianza y liberación masiva desarrollado en la Facultad
de Agronomía de la Pontificia Universidad Católica de Valparaíso desde 1980, se
logró selección resistente a las condiciones invernales de la V región, a partir de la
formación de pie de cría en base a ejemplares de larvas y adultos recuperados en
invierno en huertos de la zona. Esta acción repetida cada año logró seleccionar
una población adaptada climáticamente a la zona (LÓPEZ, 2005)*.
* López, E. Ing. Agr. Ms. Sc. 2005. Profesor de Cátedra de Entomología Agrícola. Pontificia Universidad Católica de Valparaíso. Facultad de Agronomía. Comunicación Personal.
2.2. Posición sistemática de Cryptolaemus montrouzieri Mulsant
Clasificación según BORROR Y DELONG (1954)
Clase Insecta
Orden Coleóptera
Suborden Archostemata
Superfamilia Cucujoidea
Familia Coccinellidae
Género Cryptolaemus
Especie montrouzieri
2.3. Duración del ciclo de vida de Cryptolaemus montrouzieri Mulsant
La duración del ciclo de vida es altamente dependiente de la temperatura.
WHITCOMB (1940), ONCUER y BAYHAN (1982), determinan que bajo
condiciones de alimentación óptimas, lo que significaría alimentar al depredador
con todos los estadíos de la presa, y a temperaturas de 26,6°C el ciclo duraría
entre 27,7-30 días.
2.4. Ciclo de vida:
- Huevo: Los huevos miden 0,5 mm de ancho por 1.0 mm de largo. Forma oval
alargada con un color amarillo limón característico (YUDELEVICH, 1950).
Los huevos son depositados de a uno o en grupo en medio de las masas
algodonosas de huevos de Pseudococcus (YUDELEVICH, 1950), aunque ESSIG
(1953), reporta que en cítricos fuertemente infestados los huevos son puestos en
la corteza, hojas y frutos, pero siempre cerca de la presa.
El período de incubación de los huevos esta regido por la humedad relativa y la
temperatura. En circunstancias favorables, la incubación es de seis a ocho días
(YUDELEVICH, 1950).
Larva: Las larvas son de forma oblonga a oval oblonga; recién eclosadas miden
aproximadamente 1 mm de largo y tienen lanosidades cortas y ralas. El cuerpo es
de color amarillo sucio, a medida que crece se va cubriendo de largos filamentos
lanosos de color blanco y forma triangular. La larva desarrollada mide
aproximadamente 1 cm de largo y 0.3 cm de ancho, pero los filamentos la hacen
parecer dos veces mas larga. La cabeza al igual que los últimos tres tarsos son
negros. El cuerpo esta compuesto de nueve segmentos (WHITCOMB, 1940).
BHAT, CHACKO y SREEDHARAM (1983), obtienen en sus laboratorios un
período larval de 18 a 21 días. La primera fase dura tres a cuatro días; la segunda
fase cuatro días y la tercera y cuarta fase dura cuatro a cinco y siete a ocho días
respectivamente.
El período larval dura 18 a 20 días (WHITCOMB, 1940).
Pupa: La pupa mide cerca de 5 mm de largo. Es de color amarillo brillante, esta
cubierta por las lanosidades de la larva dándole aspecto de larva dormante. En el
borde del abdomen de la pupa desnuda se observa una hilera de espinas cortas.
Es el estado mas vulnerable en la vida del insecto (WHITCOMB, 1940).
Cryptolaemus inverna como pupa, siendo una excepción a los coccinélidos en
general que pasan el invierno como adultos en lugares protegidos ubicados en
zonas de gran altura (CLAUSEN, 1940).
La duración del período de pupación en laboratorio es de ocho a 12 días
(ARMITAGE, 1931). WHITCOMB (1940), observó que la pupación se extendía por
un mínimo de seis días a 80°F (26,6 °C) a un máximo de 39 días a 60°F (15,5 °C),
con duración promedio de 11,4 días a 70°F (21,1 °C).
Adulto: El adulto de Cryptolaemus mide 5 mm de largo por 3 mm de ancho, con la
convexión característica de los coccinélidos. Color negro excepto la cabeza,
abdomen y la punta del ala posterior que son rojo-anaranjado. El cuerpo esta
cubierto de cerdas cortas. La cabeza es muy pequeña en donde se destacan los
ojos compuestos de color negro. Las mandíbulas están separadas en la punta, no
presenta dimorfismo sexual aparente (WHITCOMB, 1940). KAUFMANN (1996)
agrega que el dimorfismo sexual es leve y que la diferencia es que las piernas del
protórax son de color anaranjado para los machos y negras para las hembras.
En invernadero, los adultos viven un promedio de 40 días, aunque pueden vivir
hasta cuatro meses (WHITCOMB, 1940).
En general, mientras mejores son las condiciones de temperatura y alimentación,
menor es el tiempo de vida y en condiciones muy favorables, viven menos de dos
meses. Algunos han vivido alrededor de tres meses en invierno y principios de
primavera (WHITCOMB, 1940).
2.5. Fundamentos del almacenaje de Cryptolaemus montrouzieri
Según APABLAZA (1992), los insectos como animales poiquilotermos, no poseen
un mecanismo regulador de la temperatura interna y por lo tanto sus cuerpos
tendrán una temperatura cercana a la del ambiente en que viven. Cada especie
tiene un mínimo, óptimo y máximo de temperatura en el cual se desarrolla. El
rango entre el mínimo y máximo constituye su tolerancia ambiental ecológica,
término también válido para otros factores físicos y químicos. El insecto no puede
sobrevivir cuando el agua de sus tejidos se congela, es decir, la temperatura letal
inferior para muchos insectos será algo menos de 0 ºC. Junto con esto, es común
que un valor cercano a 10 ºC represente una temperatura umbral inferior
(temperatura base), bajo la cual no hay desarrollo y la actividad decrece.
Consecuentemente existe una temperatura umbral superior, sobre los 30 ºC, que
causa similares efectos. Generalmente entre 10 y 30 ºC hay actividad y desarrollo
normal, lo que se conoce como rango óptimo, y a medida que la temperatura
sube, el desarrollo es más rápido. Por sobre los 30 ºC se produce una detención
de la actividad y desarrollo, y el insecto alcanza la temperatura letal superior aproximadamente a los 40 ºC, lo que dependerá del tiempo de exposición a ella.
Los organismos tienen dos opciones al hacer frente a las condiciones térmicas de
su hábitat, una de ellas es tolerarla tal cual, o escapar de ellas mediante alguna
adaptación evolutiva. Estas condiciones no son constantes por lo tanto los
organismos se aclimatan fisiológicamente a diferentes condiciones (KREBS,
1985).
La inactividad o dormancia puede implicar la suspensión de toda actividad
fisiológica en el organismo, con una reducción en el metabolismo, asociado a un
nivel respiratorio extremadamente bajo y con desarrollo de adaptaciones
especiales para soportar el frío o la desecación. La dormancia puede también
abarcar la suspensión del crecimiento y del desarrollo reproductivo, ya que el
organismo canaliza los recursos disponibles en los medios para permanecer vivo
(KREBS, 1985).
Un animal dormante no está completamente inactivo. Éste debe utilizar sus
reservas alimenticias a medida que su metabolismo se desarrolla a una tasa
relativamente lenta. Aunque permanezca quiescente e inactivo, su metabolismo no
es estacionario (PEARSE, 1939).
Según APABLAZA (1992), existen dos tipos de dormancia. Dormancia facultativa
o quiescencia, en cuyo caso la reducción de los procesos fisiológicos es una
respuesta directa a las condiciones ambientales desfavorables, pero si las
condiciones se tornan adecuadas, la actividad se reinicia. El otro tipo de
dormancia, es la obligatoria o diapausa, la cual es una respuesta genética a los
cambios ambientales en avance. Finalmente, el término hibernación denota
dormancia asociada a temperaturas bajas, así como estivación es dormancia
asociada a altas temperaturas.
La condición dormante en un animal puede ser inducida a través de varias formas;
entre las más comunes están: la escasez de alimento, bajas o altas temperatura,
desecación y obesidad. Algunos insectos se vuelven dormantes a intervalos
regulares sin una referencia particular a las condiciones ambientales; otros son
directamente introducidos a estos estados por cambios en el medio ambiente
(PEARSE, 1939).
La aclimatación es muy importante en aumentar la tolerancia de los insectos a las
bajas temperaturas. Una exposición previa a temperaturas moderadamente bajas
realza a menudo la capacidad de los insectos de sobrevivir a las bajas
temperaturas (CHAPMAN, 1998).
La aclimatación gradual casi siempre aumenta la resistencia al frío en los insectos
(TAUBER, TAUBER y MASAKI, 1984).
De acuerdo a CHAPMAN (1998), el glicerol juega el papel más importante en la
sobrefusión, brindando una protección contra el congelamiento en los insectos,
aunque otros alcoholes polihídricos y algunos azúcares sirven en funciones
similares. Estos compuestos agregados a la solución de las moléculas de soluto,
afectan la presión osmótica de la hemolinfa y ayudan a regular el volumen de la
célula durante la formación de hielo extracelular y también a estabilizar las
proteínas. Estos compuestos químicos se derivan del glucógeno y están presentes
en concentraciones mucho más altas en las especies tolerantes a las heladas,
constituyendo incluso el 20% del peso fresco del insecto. Su producción se induce
por bajas temperaturas y fotoperíodos cortos.
2.6. Comportamiento de Cryptoalemus montrouzieri a bajas temperaturas.
Las condiciones climáticas son los factores más importantes que afectan el
establecimiento de Cryptolaemus montrouzieri en el campo. En experimentos
realizados para determinar la resistencia al frío, se obtuvo 100% de mortalidad de
larvas y adultos expuestos por menos de 1 h a –12.2 ºC. La temperatura letal
promedio cuando se sometieron a frío, durante 2.7 h, fue -6.7 ºC. En cambio,
cuando se sometieron durante 8.4 h a frío, la temperatura letal promedio fue de –
3.9 ºC. La mayoría sobrevivió en exposiciones de 12 h a –1.1 ºC (BARTLETT,
1974).
2.7. Almacenaje de insectos:
Según CHANG, TAUBER y TAUBER (1995), existen tres métodos para almacenar
insectos, los cuales son: la crío-preservación, la inducción de diapausa y el
almacenaje refrigerado. La primera opción es infraestructuralmente problemática y
costosa. La inducción de diapausa no es posible, ya que de acuerdo a HAGEN
(1962) Cryptolaemus montrouzieri es una especie que no presenta diapausa.
El éxito de todo proceso de almacenaje no sólo radica en que el insecto pueda
sobrevivir por un cierto periodo de tiempo, sino que además no comprometa
seriamente sus actividades biológicas fundamentales, como son la alimentación y
la reproducción, especialmente cuando se trata de insectos entomófagos
comercialmente multiplicados (SAUD, 2000).
De acuerdo a GILKESON (1990), una cualidad importante para un agente de
control biológico multiplicado comercialmente, es la capacidad de soportar
períodos de almacenaje refrigerado. Cortos períodos de almacenaje permiten al
productor balancear diferencias semanales entre la oferta y la demanda. Por otra
parte un almacenamiento de larga duración reduce costos de producción,
permitiendo que el productor críe insectos cuando las condiciones son cada vez
más favorables y almacenarlos en el invierno, en que la crianza es costosa y lenta.
Por otro lado, el almacenaje refrigerado, también es una manera de preservar
líneas genéticamente seleccionadas y de llevar a cabo temporalmente crianzas de
insectos para investigaciones futuras, sin tener que mantener una crianza
permanente.
CHANG, TAUBER y TAUBER (1995), manipulando el fotoperíodo, la temperatura
y la dieta, lograron un excelente método para almacenar comercialmente adultos
de Chrysoperla carnea Stephens (Neuroptera: Chrysopidae). Su almacenaje a
corto plazo (hasta 10 semanas) se logró con días cortos (8-10 h de luz) y con
temperaturas de hasta 21 ºC. Un almacenaje intermedio (10 a 18 semanas) se
logró con temperaturas relativamente bajas (5 ºC -10 ºC). En cambio, un
almacenaje a largo plazo (18-31 semanas) resultó más eficiente, cuando las pupas
y adultos fueron sometidos a un fotoperíodo decreciente, y por su parte, los
adultos en diapausa fueron mantenidos a 5 ºC y 16 h de oscuridad diarias. Bajo
estas condiciones, la reproducción luego del almacenaje iguala a la del control no
almacenado.
Por otra parte, Chrysoperla externa Hagen, que es una especie que habita
regiones relativamente cálidas, su tendencia a entrar en diapausa varía
geográficamente (TAUBER, ALBUQUERQUE y TAUBER, 1997). Estos autores,
lograron desarrollar un método de almacenaje trabajando con una selección de
una población hondureña, que al igual que C. montrouzieri no presenta diapusa. El
almacenaje consistió en criar en una primera etapa el estado larval, en
condiciones favorables de temperatura (24 ºC) y 16 h diarias de luz. Luego, los
individuos fueron aclimatados hasta llegar a la temperatura de almacenaje de 10
ºC con adultos de 2 días de edad, los cuales fueron mantenidos, logrando una
supervivencia del 85%, hasta por cuatro meses. El fotoperíodo mantenido durante
el almacenaje fue de 8 h diarias de luz. Posterior al almacenaje, la reproducción
comienza rápidamente y la tasa de ovipostura, sólo declina cuando los insectos
son almacenados por cuatro meses.
2.8. Almacenaje de Cryptolaemus montrouzieri.
Las especies multivoltinas tropicales y subtropicales de coccinélidos, como
Cryptolaemus montrouzieri, simplemente disminuyen su metabolismo, mostrando
una leve tendencia a la dormancia, pero no así a la diapausa. (HAGEN, 1962).
Investigaciones realizadas por BABU y AZAM (1988), lograron someter a
Cryptolaemus montrouzieri a un satisfactorio proceso de almacenaje, teniendo un
alto porcentaje de emergencia de adultos y sin generar efectos adversos en la
fecundidad de las hembras. Este método consiste en mantener pupas de cinco
días de edad almacenadas hasta por 20 días a 10 ºC. Un almacenaje que sea
mayor a este periodo, provoca un fuerte decaimiento en la fecundidad. De acuerdo
a los autores, con periodos superiores a 20 días la transición del adulto ocurre
durante el almacenaje, lo que provoca problemas en la diferenciación del oocito, el
cual se completa durante el periodo preimaginal.
Sin embargo, de acuerdo a SAUD (2000), veinte días resulta ser un periodo de
almacenaje demasiado corto como para ser utilizado a una escala comercial.
Idealmente, el almacenaje refrigerado debiera permitir conservar una generación
completa de Cryptolaemus montrouzieri, mientras otra generación es multiplicada.
En términos prácticos, un sistema ideal debiera permitir almacenar a C.
montrouzieri por períodos de dos a tres meses, lo cual es suficiente para poder
criar en una primera etapa a su presa natural, y posteriormente a él.
3. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1.Ubicación del ensayo:
El estudio se efectuó en las dependencias de la Facultad de Agronomía de la
Pontificia Universidad Católica de Valparaíso, en los laboratorios de Control
Biológico.
Los ejemplares de Cryptolaemus montrouzieri utilizados fueron obtenidos a partir
de la crianza artificial del Laboratorio de Control Biológico de la Facultad. La
crianza artificial se realizó a partir de Pseudococcus calceolariae Maskell
principalmente, como así también otras especies de chanchitos blancos tales
como Planococcus citri Risso y Pseudococcus viburni Maskell, dado que en estas
especies la hembra deposita los huevos en una masa algodonosa.
Para la crianza de Pseudococcus calceolariae se establecieron baterías de crianza
tipo Flanders, utilizando como sustrato zapallos cacho (Cucurbita moschata) y
papas brotadas (Solanum tuberosum), según disponibilidad de éstos al momento
del estudio.
Las salas utilizadas para este propósito, fueron calefaccionadas con temperaturas
cercanas a los 23°C mediante un calefactor eléctrico controlado con un termostato
y a una humedad relativa variable alrededor del 70%.
Una vez obtenida la crianza de chanchito blanco, se inocularon las baterías tipo
Flanders con 100 adultos de Cryptolaemus montrouzieri cada una cuando los
zapallos (Cucurbita moschata) se encontraron totalmente cubiertos de masas de
huevos de Pseudococcus calceolariae. La inoculación de estas baterías durante el
ensayo fue permanente, dado el alto número de pupas y adultos de Cryptolaemus
montrouzieri necesarios para las evaluaciones, como así también para llevar un
adecuado control y seguimiento de los estadíos de Cryptolaemus montrouzieri.
Los adultos fueron mantenidos en las baterías durante siete días para que
realizaran su ovipostura. Al cabo de ese tiempo fueron retirados de las baterías
para evitar el canibalismo sobre huevos de la misma especie.
Se esperó la eclosión de los huevos de Cryptolaemus montrouzieri y la aparición
de larvas, manteniéndolas con alimento abundante hasta obtener pupas y adultos.
Para las evaluaciones se retiraron pupas de distintas edades separando pupas
iniciales de pupas próximas a eclosión de adultos. Los adultos se retiraron luego
de dos y cinco días de edad.
Para el desarrollo del experimento, se consideraron parámetros que permitieron
diseñar la metodología tanto de la aclimatación previa al almacenaje, como
también del almacenaje en sí.
3.2 Aclimatación previa al almacenaje de C. montrouzieri:
La aclimatación se realizó en adultos, se utilizaron 100 adultos para cada
tratamiento los que correspondieron al testigo, en que no se realizó la aclimatación
previa; y los tratamientos de 15, 30, 45 y 60 días de almacenaje (Tratamientos
1,2,3 y 4 respectivamente). Estos insectos fueron mantenidos en placas Petri, a
temperatura ambiente en los pasillos del Laboratorio de Control Biológico. Estos
permanecieron por un período de 24 horas, a una temperatura de alrededor de
20°C.
Una vez cumplido este período se trasladaron a almacenaje refrigerado en
cámara.
3.3 Almacenaje refrigerado de Cryptolaemus montrouzieri
- Estadío del insecto: Dado que existen resultados concretos con respecto al
almacenaje de pupas de Cryptolaemus, y además existen antecedentes de
almacenaje de adultos de Chrysoperla carnea y Chrysoperla externa, se decidió
almacenar pupas iniciales y terminales, así como adultos de dos y cinco días de
edad.
- Período: El período mínimo a examinar fue de 15 días, dado que el máximo
período de almacenaje soportado exitosamente por esta especie es de 20 días, en
estadío pupal, y pensando en un almacenaje con fines comerciales que permita
criar una nueva generación mientras otra es mantenida almacenada.
- Temperatura: la temperatura de almacenaje fue de 15 °C, esto tomando como
referencia tanto el almacenaje de Chrysoperla externa, una especie que al igual
que C. montrouzieri, no presenta diapausa, y considerando que la aclimatación
gradual casi siempre aumenta la resistencia al frío en los insectos.
- Humedad relativa: este factor parece no ser muy importante, ya que en otras
investigaciones es despreciado, o permanece variable entre 35 y 85%. Para el
caso del ensayo la humedad relativa fluctuó entre 60 y 70%.
- Alimentación: para soportar un período de dormancia, los insectos fueron
alimentados con su presa natural previo y durante el almacenaje.
- Luminosidad: los insectos fueron mantenidos bajo total oscuridad durante todo el
período de almacenaje dentro de la cámara.
Una vez completado el periodo mínimo de almacenaje (15 días), como así el
tiempo requerido para cada tratamiento, se retiraron las placas con las pupas y
adultos, estos fueron llevados a temperatura ambiente para activación de adultos y
eclosión de pupas. Se registró la supervivencia y se realizó un análisis para cada
uno de los tratamientos.
3.3.1. Almacenaje refrigerado de adultos de dos días de edad y total oscuridad.
Para el experimento se obtuvieron un total de 500 individuos, los cuales se
separaron en cinco grupos de 100 insectos para cada uno de los tratamientos y
testigo, a su vez estos fueron divididos en cinco grupos de 20 individuos, los que
correspondieron a cada una de las repeticiones por tratamiento.
Los insectos fueron puestos con alimento en cajas de acrílico tipo placa de Petri,
con ventilación. Inmediatamente fueron trasladados a la cámara bioclimática de
almacenaje, retirados cada quince días un grupo de 100 insectos para determinar
la supervivencia de sus integrantes.
Tratamientos
T0: Testigo, adultos sin almacenaje refrigerado en sala de crianza a 23°C
T1: Adultos de dos días de edad durante 15 días de almacenaje refrigerado
T2: Adultos de dos días de edad durante 30 días de almacenaje refrigerado
T3: Adultos de dos días de edad durante 45 días de almacenaje refrigerado
T4: Adultos de dos días de edad durante 60 días de almacenaje refrigerado
3.3.2. Almacenaje refrigerado de adultos de 5 días de edad y total oscuridad
Consistió en almacenar adultos de cinco días de edad, con el fin que los
ejemplares alcanzaran mayor madurez y así soportar con mejor éxito un período
de almacenaje.
Para este experimento se procedió de la misma forma que el experimento anterior,
tanto en la alimentación recibida antes y durante el almacenaje, como en la
metodología para medir supervivencia de los integrantes de cada tratamiento (días
de almacenaje).
Tratamientos
T0: Testigo, adultos sin almacenaje refrigerado en sala de crianza a 23°C
T1: Adultos de cinco días de edad durante 15 días de almacenaje refrigerado
T2: Adultos de cinco días de edad durante 30 días de almacenaje refrigerado
T3: Adultos de cinco días de edad durante 45 días de almacenaje refrigerado
T4: Adultos de cinco días de edad durante 60 días de almacenaje refrigerado
3.3.3. Almacenaje refrigerado de pupas en estadio inicial
Para este experimento se utilizaron un total de 500 pupas, las cuales se
separaron en 5 grupos de 100 para cada uno de los tratamientos, a su vez estos
fueron divididos en 5 grupos de 20 individuos, los que correspondieron a cada una
de la repeticiones por tratamiento.
Tratamientos
T0: Testigo, pupas mantenidas en sala de crianza a 23°C
T1: Pupas en estadío inicial durante 15 días de almacenaje refrigerado
T2: Pupas en estadío inicial durante 30 días de almacenaje refrigerado
T3: Pupas en estadío inicial durante 45 días de almacenaje refrigerado
T4: Pupas en estadío inicial durante 60 días de almacenaje refrigerado
3.3.4. Almacenaje refrigerado de pupas en estadío terminal
Para esta experiencia se utilizó la misma metodología del experimento anterior, en
cuanto al número de pupas por tratamiento y repetición, como así también la
metodología para la medición de la supervivencia de los individuos.
Tratamientos
T0: Testigo, pupas mantenidas en sala de crianza a 23°C
T1: Pupas en estadío terminal durante 15 días de almacenaje refrigerado
T2: Pupas en estadío terminal durante 30 días de almacenaje refrigerado
T3: Pupas en estadío terminal durante 45 días de almacenaje refrigerado
T4: Pupas en estadío terminal durante 60 días de almacenaje refrigerado
4. PRESENTACIÓN Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS
4.1. Almacenaje de Cryptolaemus montrouzieri:
Se puede ver en el Cuadro 1, que la supervivencia en adultos de dos días de edad
ocurrió en un alto porcentaje, dado que prácticamente la totalidad de los adultos
sometidos al tratamiento logran la supervivencia al máximo periodo de
experimentación que corresponde a 60 días.
CUADRO 1. Supervivencia de adultos de dos días de edad, luego de almacenaje a 15 °C y total oscuridad.
Periodo de almacenaje (días) Supervivencia de 100 adultos de 2 días
de edad 15 90 30 90 45 97 60 86
Los resultados de supervivencia para cada una de las repeticiones de la unidad
experimental (Anexo 1) es alta, no variando significativamente para cada uno de
los tratamientos (Anexo 5 y 6).
CUADRO 2. Supervivencia de adultos de cinco días de edad, luego de almacenaje a 15 °C y total oscuridad.
Periodo de almacenaje (días) Supervivencia de 100 adultos de 5 días de edad
15 98 30 90 45 96 60 90
La supervivencia en adultos de cinco días de edad es alta en todos los
tratamientos, llegando a un 90% de esta a los 60 días de almacenaje. Así también
se observa una alta supervivencia posterior a los 30 días (Cuadro 2).
Para el caso de adultos de 2 días de edad es posible obtener una alta
supervivencia posterior a los 30 días de almacenaje lo que concuerda
parcialmente con lo obtenido por TERRAZAS (2004), el cual señala que es posible
obtener una aceptable supervivencia hasta los 30 días de almacenaje a 10°C y
total oscuridad. (Anexo 2).
CUADRO 3. Supervivencia de pupas iniciales, luego de almacenaje a 15 °C y total oscuridad
Periodo de almacenaje (días) Supervivencia de 100 pupas en estadio inicial
15 100 30 48 45 40 60 36
En pupas en estadio inicial (Cuadro 3), la supervivencia es baja a los 30 días de
almacenaje (Anexo 3), mostrando diferencias significativas posterior a este
período (Anexo 5 Y 6).
CUADRO 4. Supervivencia de pupas en estadio final, luego de almacenaje a 15 °C y total oscuridad.
Periodo de almacenaje (días) Supervivencia de 100 pupas en estadio
final 15 100 30 95 45 58 60 38
En el Cuadro 4, pupas próximas a la emergencia como adultos, la supervivencia
es alta a los 30 días de almacenaje, pero baja significativamente a los 45 días
(Anexo 5 y 6).
En el caso de pupas próximas a su eclosión a adultos la supervivencia es baja a
los 60 días de almacenaje, variando significativamente en cada una de las
repeticiones de la unidad experimental (Anexo 4).
Las pupas presentan un mayor daño producto del manipuleo al momento de la
obtención de estas para ser sometidas al almacenaje, dado que un bajo número
logra soportar un período de almacenaje mas prolongado y las que logran
soportarlo presentan daños en su estructura, lo que hace necesario evaluarlo.
La supervivencia de los adultos almacenados en esta investigación, difieren con
los resultados de TERRAZAS (2004), quien logra obtener una alta supervivencia
hasta 30 días, almacenados a 10°C y total oscuridad. Estas diferencias se pueden
deber a la distinta temperatura a la que fueron sometidos en este experimento.
5. CONCLUSIONES
El almacenaje refrigerado a 15°C tiene un efecto positivo en la supervivencia de
adultos de Cryptolaemus montrouzieri llegando a 60 días.
El estadio de pupa de Cryptolaemus montrouzieri es el de menor supervivencia a
lo largo del periodo estudiado comparado con adultos durante igual periodo.
La supervivencia de pupas en estadío inicial se ve más afectada posterior a los 15
días, a diferencia de pupas en estadío final en que la supervivencia es alta, pero
que decae drásticamente posterior a los 30 días de almacenaje.
Tanto adultos como pupas logran superar en un alto porcentaje el almacenaje
durante 30 días.
Es posible almacenar pupas de Cryptolaemus montrouzieri en estadío inicial y
terminal por hasta 30 días a 15°C sin afectar significativamente su sobrevivencia.
6. RESUMEN
Durante el año 2004, en el laboratorio de Control Biológico de la Facultad de
Agronomía de la Pontificia Universidad Católica de Valparaíso, se llevó a cabo una
investigación para determinar el efecto de la edad en la supervivencia de pupas y
adultos de Cryptolaemus montrouzieri en un proceso de almacenaje refrigerado.
La investigación se inició con una crianza artificial de Cryptolaemus montrouzieri
con la finalidad de obtener pupas y adultos de este controlador biológico.
El experimento consistió en seleccionar pupas iniciales y próximas a su eclosión
en adultos, y adultos de dos y cinco días de edad, y someterlos a un proceso de
almacenaje a 15°C en total oscuridad. Se evaluó la supervivencia comparándolos
con un testigo no sometido a almacenaje refrigerado.
Se determinó que un almacenaje refrigerado a 15°C tiene efectos positivos en la
supervivencia de los insectos almacenados, cuando son comparados con un
testigo no almacenado.
Se determinó junto con esto, que la supervivencia se ve mas afectada en pupas
que adultos, de cualquier estadío, posterior a un periodo de almacenaje.
Por último, se determinó que adultos de dos y cinco días de edad, almacenados a
15°C y en condiciones de total oscuridad, se puede extender por un período de 60
días con una alta supervivencia, comparado el mismo periodo de almacenaje en
pupas de cualquier estadío.
7. ABSTRACT
During 2004, in the Biological Control Laboratory at the Faculty of Agricultural
Science, of the Pontificia Universidad Católica de Valparaíso, a study was done to
evaluate the effect of age on the survival of pupas and adults of Cryptolaemus
montrouzieri in a cold storage process.
The investigation began with an artificial breeding of Cryptolaemus montrouzieri to
obtain pupas and adults of this biological control.
The experiment consisted of a selection of initial pupas and near to the emergence
in adults and two-to five day old adults to be put into 15°C storage process in the
total dark. Survival of these individulas were evaluated as compared to an un-
refrigerated control sample.
It was concluded that refrigerated storage treatment at 15°C is positive in the
survival of the storage insects when compared with untreated controls.
It was also concluded that the survival of pupas was seen to be more affected than
that of the adults of any age, after a period of storage.
Finally, it was concluded that storage of two and five day old Cryptolemus
montrouzieri adults, at 15°C in the total dark, could be extended over a 60 days
period with a high survival rate, compared with pupas of any age.
8. LITERATURA CITADA
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ANEXOS
ANEXO 1: Supervivencia de adultos de dos días de edad Repeticiones T1 (15 días) T2 (30 días) T3 (45 días) T4 (60
días) R1 17 17 18 14 R2 18 19 20 16 R3 18 18 19 20 R4 18 19 20 17 R5 19 17 20 19 Media 18 18 19.4 17.2 Tratamientos: Días de almacenaje Unidad Muestral: 20 individuos Repeticiones: 5 Total de individuos por Tratamiento: 100 ANEXO 2: Supervivencia de adultos de cinco días de edad Repeticiones T1 (15 días) T2 (30 días) T3 (45 días) T4 (60
días) R1 20 20 20 16 R2 19 18 20 16 R3 19 17 18 20 R4 20 18 18 20 R5 20 17 20 18 Media 19.6 18 19.2 18 Tratamientos: Días de almacenaje Unidad Muestral: 20 individuos Repeticiones: 5 Total de individuos por Tratamiento: 100
ANEXO 3: Supervivencia de pupas en estadío inicial Repeticiones T1 (15 días) T2 (30 días) T3 (45 días) T4 (60
días) R1 20 8 10 6 R2 20 9 8 7 R3 20 9 7 7 R4 20 10 8 7 R5 20 12 7 9 Media 20 9.6 8 7.2 Tratamientos: Días de almacenaje Unidad Muestral: 20 individuos Repeticiones: 5 Total de individuos por Tratamiento: 100 ANEXO 4: Supervivencia de pupas en estadío final Repeticiones T1 (15 días) T2 (30 días) T3 (45 días) T4 (60
días) R1 20 19 10 7 R2 20 20 12 11 R3 20 18 13 10 R4 20 19 13 6 R5 20 19 10 4 Media 20 19 11.6 7.6 Tratamientos: Días de almacenaje Unidad Muestral: 20 individuos Repeticiones: 5 Total de individuos por Tratamiento: 100
ANEXO 5: Diseño Completamente al Azar (DCA) para los distintos tratamientos
ANEXO 5a. Diseño completamente al azar (DCA) para el tratamiento de pupas en estadío inicial
Significación: 0.05 Fuentes de variación
Grados de libertad (GL)
Suma de cuadrados (SC)
Cuadrado Medio (CM)
F observado
F requerido
Total 19 551.2 Tratamiento 3 531.2 177.0667 141.6533 3.240 Error 16 20 1.25
Coeficiente de variación: 9.982%
ANEXO 5b. Diseño completamente al azar (DCA) para el tratamiento de pupas en estadío final
Significación: 0.05 Fuentes de variación
Grados de libertad (GL)
Suma de cuadrados (SC)
Cuadrado Medio (CM)
F observado
F requerido
Total 19 576.9502 Tratamiento 3 532.5502 177.5167 63.9699 3.240 Error 16 44.40002 44.40002 2.775002 Coeficiente de variación: 11.449%
ANEXO 5c. Diseño completamente al azar (DCA) para el tratamiento de adultos de dos días de edad
Significación: 0.05 Fuentes de variación
Grados de libertad (GL)
Suma de cuadrados (SC)
Cuadrado Medio (CM)
F observado
F requerido
Total 19 44.5498 Tratamiento 3 12.5498 4.183268 2.091634 3.240 Error 16 32 2
Coeficiente de variación: 7.792%
ANEXO 5d. Diseño completamente al azar (DCA) para el tratamiento de adultos de cinco días de edad
Significación: 0.05 Fuentes de variación
Grados de libertad (GL)
Suma de cuadrados (SC)
Cuadrado Medio (CM)
F observado
F requerido
Total 19 38.2002 Tratamiento 3 10.2002 3.400065 1.942894 3.240 Error 16 28 1.75 Coeficiente de variación: 7.074%
ANEXO 6: Comparación de Medias Tuckey para los distintos tratamientos
ANEXO 6a. Comparación de medias Tuckey para el tratamiento de pupas en
estadío inicial Grados de libertad del error: 16 Cuadrado medio del error: 1.25 Número de comparaciones: 4 Significación: 0.05 Tratamientos Repeticiones Media Grupos 1 (15 días) 5 20 a 2 (30 días) 5 9.6 b 3 (45 días) 5 8 bc 4 (60 días) 5 7.2 c ANEXO 6b Comparación de medias de Tuckey para el tratamiento de pupas en estadío final Grados de libertad del error: 16 Cuadrado medio del error: 2.775002 Número de comparaciones: 4 Significación: 0.05 Tratamientos Repeticiones Media Grupos 1 (15 días) 5 20 a 2 (30 días) 5 19 a 3 (45 días) 5 11.6 b 4 (60 días) 5 7.6 c
ANEXO 6c. Comparación de medias Tuckey para el tratamiento de adultos de dos días de edad Grados de libertad del error: 16 Cuadrado medio del error: 2 Número de comparaciones: 4 Significación: 0.05 Tratamientos Repeticiones Media Grupos 1 (15 días) 5 18 a 2 (30 días) 5 18 a 3 (45 días) 5 19.4 a 4 (60 días) 5 17.2 a ANEXO 6d. Comparación de medias Tuckey para el tratamiento de adultos de cinco días de edad Grados de libertad del error: 16 Cuadrado medio del error: 1.75 Número de comparaciones: 4 Significación: 0.05 Tratamientos Repeticiones Media Grupos 1 (15 días) 5 19.6 a 2 (30 días) 5 18 a 3 (45 días) 5 19.2 a 4 (60 días) 5 18 a
