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CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGIA –CONCYT- SECRETARIA NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGIA-SENACYT-

FONDO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGIA -FONACYT- FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS Y FARMACIA UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

INFORME FINAL

PROYECTO FODECYT No. 12-2004

VALIDACION FARMACOLOGICA Y EVALUACION FITOQUIMICA DE EXTRACTOS DE TRES ESPECIES VEGETALES COMERCIALIZADAS EN

GUATEMALA COMO SEDANTES-HIPNOTICOS

AMARILLIS SARAVIA GOMEZ Ph.D. Investigadora Principal

GUATEMALA, ENERO DEL 2008.

AGRADECIMIENTOS:

La realización de este trabajo, ha sido posible gracias al apoyo financiero dentro del Fondo Nacional de Ciencia y Tecnología –FONACYT-, otorgado por la Secretaría Nacional de Ciencia y Tecnología – SENACYT- y el Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología – CONCYT-

OTROS AGRADECIMIENTOS:

Al Departamento de Farmacología, Fisiología, Laboratorio de Productos Naturales LIPRONAT y Bioterio, de la Escuela de Química Farmacéutica de la Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia de la Universidad de San Carlos de Guatemala, ya que sin el apoyo de esta entidad no hubiera sido posible llevar a cabo toda la parte experimental del proyecto. A las Licenciadas Claudia Roca y María Alejandra Ruiz Mayén por su valioso aporte y conocimiento en la parte Fitoquímica y Farmacología Experimental correspondiente, que concluyó en un excelente trabajo de investigación y un aprendizaje para ellas en el campo que se proyecta a nuestra sociedad y sean cada día mejores profesionales. A Cristian López como técnico de Bioterio, por su gran apoyo en sus conocimientos sobre cuidado, uso y manejo de animales de laboratorio. Al Lic. Armando Cáceres y Licda. Zully Cruz por su colaboración en dicho trabajo de investigación.

AMARILLIS SARAVIA GOMEZ

Graduada de Química Farmacéutica de la Universidad de San Carlos de Guatemala en 1974 Graduada en la Facultad de Medicina y Farmacia de la Universidad de Clermont – Ferrand Francia 1978 con el grado de Ph.D. en Farmacología Experimental. Asesora de más de 250 tesis de grado Expresidenta del Colegio de Farmacéuticos y Químicos de Guatemala Editora del Manual de Ensayos Toxicológicos y Farmacológicos experimentales in vivo e in Vitro editorial Universitaria 2005. Más de 50 publicaciones sobre Validación Farmacológica de Plantas Medicinales de uso popular en Guatemala. Consultora en la OMS periodo 1985-1989 Presidenta de la Comisión Nacional para el Aprovechamiento de las Plantas Medicinales 1987-1992. Jefa del departamento de Farmacología y Fisiología. 1980 a 2008 Miembro ordinario de la Academia de Ciencias Médicas, Físicas y Naturales de Guatemala. Participante en más de 300 eventos cientificos nacionales e internacionales Organizadora de más de 50 eventos científicos nacionales e internacionales Presidenta de la Asociación de Mujeres Científicas de Guatemala 1996-2006 Miembro de la Third World Organization of Women in Science . –TWOWS- Miembro del Internacional Council of Laboratory Animal Sciences. –ICLAS- Vice Presidenta del Consejo de Centroamericano de Acreditación de Postgrados –ACAP-2005-2008.

INDICE DE CONTENIDOS

RESUMEN i

ABSTRACT ii

PARTE I 1

I.1. Introducción 1

I.2. Planteamiento del Problema I.2.1. Antecedentes I.2.2. Justificación

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I.3 Objetivos e Hipótesis I.3.1. Objetivos Generales I.3.2. Objetivos Específico

4 4 4

I.4. Metodología 5

PARTE II 9

II.1. Marco Teórico 9

PARTE III 21

III.1 Resultados III.1.1. Tamizaje Fitoquímico III.1.2. Tamizaje Farmacológico

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III.2. Discusión de resultados 63

PARTE IV 65

VI.1. Conclusiones 65

VI.2. Recomendaciones 67

VI.3. Referencias 68

VI.4. Anexos Gráficas de Tuckey

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Fotografías Pasiflora Tilo Valeriana Fitoquímica Bioterio y Ensayos Farmacológicos Experimentales

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PARTE V 177

V.1. Informe financiero 177

INDICE DE TABLAS

Tabla 1. Porcentaje de rendimiento de cada fracción obtenida de las especies vegetales

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Tabla 2. Aceites Esenciales

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Tabla 3. Saponinas

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Tabla 4. Flavonoides

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Tabla 5. Principios Amargos

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Tabla 6. Cardenólidos y Bufadienólidos

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Tabla 7. Sesquiterpenlactonas

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Tabla 8. Valepotriatos

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INDICE DE GRAFICAS

Gráfica 1 Pasiflora. Tabla agujereada extracto alcohólico

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Gráfica 2-3 Rota Rod extracto alcohólico y chimenea extracto etanólico

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Gráfica 4-5 Potenciación del sueño extracto alcohólico y Tabla Agujereada extracto hexánico

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Gráfica 6-7 Rota Rod extracto hexánico y Chimenea extracto Hexáncio

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Gráfica 8-9 Potenciación del sueño extracto hexánico y tabla agujereada extracto etanólico

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Gráfica 10-11 Rota Rod extracto clorofórmico y Chimenea extracto clorofórmico

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Gráfica 12-13 Potenciación del sueño extracto clorofórmico y Tabla agujereada extracto acetato de etilo

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Gráfica 14-15 Rota Rod extracto acetato de etilo y Chimenea extracto acetato de etilo

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Gráfica 16 Potenciación del sueño extracto acetato de etilo

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Gráfica 17-18 Valeriana. Tabla Agujereada extracto alcohólico y Rota Rod extracto alcohólico

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Gráfica 19-20 Chimenea extracto alcohólico y Potenciación del sueño extracto alcohólico

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Gráfica 21-22 Tabla Agujereada extracto hexánico y Rota Rod extracto hexánico

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Gráfica 23-24 Chimenea extracto hexánico y Potenciación del sueño extracto hexánico

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Gráfica 25-26 Tabla Agujereada extracto clorofórmico y Rota Rod extracto clorofórmico

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Gráfica 27-28 Chimenea extracto clorofórmico y Potenciación del sueño extracto clorofórmico

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Gráfica 29 -30 Tabla Agujereada extracto acetato de etilo y Rota

Rod extracto acetato de etilo

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Gráfica 31-32 Chimenea extracto acetato de etilo y Potenciación del sueño extracto acetato de etilo

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Gráfica 33 y 34 Tilo. Tabla Agujereada extracto alcohólico y Rota Rod extracto alcohólico

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Gráfica 35-36 Chimenea extracto etanólico y Potenciación del sueño extracto etanólico

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Gráfica 43-44 Chimenea extracto hexánico y Potenciación del sueño extracto clorofórmico

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Gráfica 45-46 Tabla agujereada extracto acetato de etilo y Rota Rod extracto acetato de etilo

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Gráfica 49-50 Tabla Agujereada extracto alcohólico y Rota Rod extracto alcohólico

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Gráfica 51-52 Chimenea extracto etanólico y Potenciación del sueño extracto alcohólico

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Gráfica 59-60 Chimenea extracto clorofórmico y Potenciación del sueño extracto clorofórmico

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Gráfica 61-62 Tabla Agujereada extracto acetato de etilo y Rota

Rod extracto acetato de etilo

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RESUMEN El proyecto fue una investigación orientada a la generación de conocimientoo botánico, fitoquímico y farmacológico de tres especies usadas comercialmente como sedantes-hipnóticos en Guatemala y popularmente conocidas con nombres de especies que no se encuentran en el país. El propósito fundamental fue preparar extractos con diferentes disolventes evaluando la actividad sobre el sistema nervioso central (SNC) en ratones machos por diferentes pruebas farmacológicas.

Para cada especie se prepararon por extracción fraccionada, cuatro extractos de diferente polaridad (hexano, cloroformo, acetato de etilo y etanol) para establecer por las pruebas realizadas la posible composición química responsable de la actividad. Se evalúo por pruebas macro y semimicro, la presencia de metabolitos secundarios que podrían ser los responsables de la actividad farmacológica.

De los resultados obtenidos se confirma la hipótesis para Pasiflora (Passiflora edulis) Sims, presentando una actividad reguladora del SNC, ya que fue la única que dio positivo para el efecto hipnótico, con el extracto etanólico a dosis de 50 y 200 mg/kg de peso corporal y con el extracto clorofórmico a dosis de 25 y 50 mg/kg de peso corporal. Al obtener el resultado positivo se trabajó la toxicidad aguda (DL50) no presentándose ninguna toxicidad de los extractos a dosis <500 mg/kg. Los extractos de Valeriana (Valeriana prionophylla) Standl. y Tilo (Ternstroemia tepezapote Schlect. & Cham.), no presentaron actividad farmacológica estadísticamente significativa comparada con el control, pero V. prionophylla fue equiparable a V. officinalis por su composición química en el contenido de valepotriatos.

Se evaluó la actividad citotóxica de los extractos por la prueba con nauplios de Artemia salina, resultando que ninguno posee citotoxicidad por este modelo a concentraciones > 1 mg/mL.

Con estos resultados se concluye que los extractos etanólico y clorofórmico de P. edulis pueden utilizarse para el desarrollo de productos fitofarmacéuticos por sus propiedades hipnóticas y sus componentes químicos, como un aporte para el desarrollo de los recursos naturales del país. En el caso de V. prionophylla deberá evaluarse mediante otros modelos para analizar la actividad sobre el SNC y en el caso de T. tepezapote se requiere de pruebas más profundas para validar su uso popular.

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ABSTRACT

This Project was a research oriented to the generation of botanical, phytochemical and pharmacological knowledge of three species commercially used as sedative-hypnotic plants in Guatemala, and popularly known with names of species that do not grow in the country. The basic purpose was to prepare extracts with different solvents evaluating the activity within the Central Nervous System (CNS) in male mice by different in vivo tests. For each species a fractionated extraction was prepare, using different polarity solvents (hexane, chloroform, ethyl acetate and ethanol) to determine the possible chemical compound responsible of the activity.. By macro and semimicro tests, the presence of secondary metabolites was evaluated to determine which might explain the expected pharmacological activity. The experimental results confirm the hypothesis that Pasiflora (Passfilora edulis Sims),presented a regulating activity over de SNC, since it was the only species with positive results of the hypnotic effect, the ethanol extract at a doses of 50 and 200mg/kg of body weight and the chloroform extract at doses of 25 and 50 mg/kg of body weight. Since the results were positive, it was studied the acute toxicity (LD50), showing no evidence of toxicity of this extracts at a dose <500mg/kg. Valeriana (Valeriana prionophylla Stanley) and Tilo (Ternstroemia tepezapote Schlect. & Cham.) extracts showed no activity with statistical significance compare with control; even though V. prinophylla was similar to V. officinalis in its chemical valopotriate composition. The cytotoxic activity of the extracts was also evaluated, using the Artemia salina nauplii test, showing that none of the extracts has cytotoxicity at a concentration of 1mg/mL. With this results it can be concluded that ethanol and chloroform extracts of P. edulis could be use in the development of phytopharmaceutical products for its hypnotic properties and its chemical composition, as a support to the development of natural resource from the country. In the case of V. prionophylla it should be analyzed with other models for the evaluation of CNS activity; in the case of T. tepezapote it is required a deepest investigation to validate its popular use.

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PARTE I

1. INTRODUCCION La noble riqueza de Guatemala en su biodiversidad y tradición ha permitido el uso de las plantas con fines medicinales desde hace muchos años. El uso de plantas medicinales es muy amplio en el país, siendo los sacerdotes, curanderos, comadronas y promotores de salud entre otros, los principales personajes del sistema de atención primaria en salud.

En los últimos años, la investigación y desarrollo de drogas de origen vegetal ha cobrado una especial importancia por la exhortación hecha por la Organización Mundial de la Salud en el sentido de que cada país utilice todos sus recursos en pro de la Atención Primaria en Salud. Haciendo eco a esto último, el desarrollo de metodologías experimentales y la evaluación y validación de las plantas medicinales guatemaltecas es notable en los últimos años.

El presente trabajo tiene como finalidad caracterizar y evaluar farmacológicamente para la acción sedante e hipnótica los extractos de tres especies usadas comercialmente con dicha acción, Pasiflora (P. edulis), Tilo (T. tepezapote) y Valeriana (V. prionophylla). La estandarización se llevó a cabo mediante análisis, fisicoquímicos y fitoquímicos, de cuatro extractos con diferente polaridad hexánico, clorofómico, acetato de etilo y etanólico, seguidamente estos extractos fueron usados para la evaluación farmacológica. La importancia de esta investigación radica en la utilización de especies medicinales de las mismas familias de las especies oficinales Passifloracea, Valerianacea y en el caso del género Ternstroemia que aunque es de la familia Theaceae, en el país se ha utilizado en sustitución de la especie oficinal Tilia platyphyllos Scop. (Tiliaceae), que han sido investigadas con anterioridad y son popularmente utilizadas en países europeos.

A pesar de la gran cantidad de flora con que cuenta el país muchas especies son importadas para su utilización como medicina natural, por lo que con este estudio se quiere establecer si la P. edulis, V. prionophylla y T. tepezapote que en el país son popular y comercialmente utilizadas bajo nombres de origen europeos poseen el efecto hipnótico-sedante atribuido a las especies oficinales, logrando de esta manera al obtener resultados positivos evitar la importación de estas especies y promover el uso de las plantas cultivadas en Guatemala.

Las limitaciones de este estudio están principalmente basadas en el tiempo de realización del proyecto ya que para el estudio de la actividad farmacológica se requiere más tiempo (por lo que se solicitó una ampliación para finalizarlo).

Durante más de 26 años el Depto. de Farmacología y Fisiología ha contribuido al estudio de numerosas especies comprobando sus actividades farmacológicas, entre ellas estudios como sedantes-hipnóticas en diversas fases (Lemus, 1981; Arriaza, 1981, Solís, 1981; Tabarini de De la Vega, 1981; Aguilar, 1981; Gálvez, 1982, Solís, 1983; Gómez, 1991; Reyes, 1995; Saravia et al., 1999; Bonilla, 2003; González, 2004; Roca, 2005).

Finalmente se puede mencionar que la importancia de este tipo de estudio radica no solamente en la aportación de conocimiento científico, sino a la vez permite promover el uso de plantas medicinales de una manera eficaz en pro de la salud guatemalteca.

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I.2 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.2.1 ANTECEDENTES Guatemala posee 14 zonas de vida y es poblada por una veintena de grupos étnicos, por lo que es un país con gran diversidad biológica y cultural. La flora es muy variada, e incluye especies provenientes de la masa continental del norte y especies neotropicales del sur. El sincretismo cultural aflora en cada una de nuestras actividades, manifestándose entre otras formas, con el uso generalizado de algunos nombres castellanos para especies vegetales nativas (Standley & Williams, 1961).

Las secuelas de la guerra fratricida que tanto dolor ha causado y que supuestamente terminó con el siglo pasado, están todavía por manifestarse, inclusive se ven agravadas por la violencia descontrolada que se vive actualmente. Las patologías psicológicas post trauma, las enfermedades de alteración nerviosa y la ansiedad en todas sus formas, son algunas de las patologías que se presentarán con más frecuencia en los próximos años. Estos hechos justifican el creciente consumo de productos naturales relacionados con afecciones nerviosas, siendo estos los principales productos fitofarmacéuticos comercializados en el país.

En los mercados globalizados, la tendencia es volver a los productos naturales, principal-mente aquellos cuya extracción no perjudique la ecología y contribuya al desarrollo sostenible de los diferentes sistemas. Los productores de los países en desarrollo pueden darle valor agregado a sus productos y aumentar sus ingresos. Los productores cuentan con una ventaja comparativa al tener la materia prima disponible y costos laborales y de transporte relativamente reducidos.

Guatemala es proveedor de materia prima y no hay información sobre el estado actual de la industrialización de plantas medicinales en el país. A nivel de estadísticas, se trabaja con datos pocos confiables que están en forma desagregada. Se han desarrollado técnicas de cultivo o manejo agrícola de unas 37 plantas nativas e introducidas, de las cuales se puede obtener un volumen que podría ser rentable para la industrialización, aunque a pequeña escala, que podría tener un valor agregado importante.

A pesar de la biodiversidad existente en el país, es necesaria la importación de material vegetal y extractos de plantas para la elaboración de los productos fitofarmacéuticos, de esa suerte los principales fitoterápicos para tratamiento de afecciones del SNC que se encuentran disponibles en el mercado nacional usan extractos importados. De acuerdo a un sondeo realizado por el equipo investigador, de manera informal en la industria farmacéutica nacional dedicada a la producción de fitoterápicos para el tratamiento de afecciones del SNC, se estima que anualmente esta industria importa de 2,000-3,000 kg de dichos extractos, una de las razones principales de dicha importación es la falta de investigación de los productos disponibles en el país para su equiparación farmacopéica y su aprovechamiento.

Desde hace varios años los Departamentos de Citohistología de la EQB y de Fisiología y Farmacología de la EQF, realizan trabajos de detección etnobotánica y validación de plantas de uso medicinal con metodologías in vitro (Cáceres et al., 1987a; 1993; 1998, Girón et al., 1991; Villar et al., 1997; Rastrelli et al., 1998; Berger et al., 2000) e in vivo (Cáceres et al., 1987b; 1992; Cáceres & López, 1991) en colaboración con universidades extranjeras. Como consecuencia de proyectos nacionales e internacionales se ha establecido un bioterio de

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acuerdo con los estándares más modernos y se han equipado tres laboratorios especializados, uno para la realización de ensayos farmacológicos con animales de experimentación, otro para la realización de bioensayos in vitro y otro de análisis fitoquímico y farmacognóstico para caracterizar extractos de vegetales con potencial de desarrollo industrial.

I.2.2. JUSTIFICACION El proyecto es una investigación orientada a la generación de conocimiento botánico, farmacológico, fitoquímico y farmacognóstico de tres especies usadas comercialmente como sedantes en Guatemala y popularmente conocidas con nombres de especies europeas que no se encuentran en el país. El propósito fundamental es preparar extractos por extracción fraccionada de diferentes polaridades de las especies, ensayarlos en cuatro modelos animales para evaluar actividad sobre el SNC, para contribuir al conocimiento de la naturaleza fiitoquímica de sus moléculas responsables. En esta forma se pretende equiparar su uso con las especies reconocidas como oficinales, obteniéndose información básica y aplicada que pueda ser aprovechada por grupos de investigación multidisciplinarios para el desarrollo de productos fitofarmacéuticos, dentro de una visión de sostenibilidad, escalamiento productivo y desarrollo de tecnología apropiada para la explotación sostenible de los recursos nativos. Al concluir la investigación se espera haber validado el uso comercialmente atribuido e identificar la naturaleza química de algunos de sus principios activos que sirvan para su posterior estandarización y aplicación industrial. De esta manera se estará contribuyendo con las líneas de investigación sobre el Desarrollo Agroindustrial, con respeto del Medio Ambiente y una posible aplicación directa en la Salud.

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I.3. OBJETIVOS E HIPOTESIS

I.3.1 Objetivos

I.3.1.1. Generales

• Generar información farmacognóstica, farmacológica y fitoquímica para la equiparación de tres especies vegetales usadas localmente como sedantes que puedan satisfacer las demandas del mercado nacional y disminuir la importación de extractos.

• Contribuir al desarrollo rural y de la industria farmacéutica a través de la introducción de nuevos extractos vegetales que pueden transformarse en productos fitoterápicos para el mercado nacional y eventualmente internacional.

I.3.1.2. Específicos

• Determinar el rendimiento de los extractos hexánico, clorofórmico, de acetato de etilo y etanólico de las tres especies.

• Demostrar la actividad sedante - hipnótica por cuatro ensayos en animales, de tres especies vegetales y sus fracciones obtenidas.

• Caracterizar químicamente los metabolitos secundarios mayoritarios presentes en los extractos hexánico, clorofórmico, de acetato de etilo y etanólico de las tres especies.

• Comparar la composición química de plantas de uso oficial con especies nativas para establecer los parámetros de control de calidad para su posible equiparación.

I.3.1.3. Hipótesis

• Las drogas vegetales comercializadas como sedantes - hipnóticas tienen una importante actividad reguladora del SNC.

• Los hallazgos farmacológicos y fitoquímicos apoyan la equiparación de las especies usadas en Guatemala como oficinales.

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I. 4. METODOLOGIA

I.4.1.Universo de trabajo: Mediante criterios etnobotánicos se detectaron unas 40 especies usadas popularmente para el tratamiento de afecciones nerviosas e insomnio. Con los mismos criterios, más los componentes tecnológicos (viabilidad de la domesticación, cultivo y/o explotación sostenible) y de comercialización en los mercados nacionales, se seleccionaron tres especies para realizar los estudios de equiparación.

I.4.2.Localización: Todos los ensayos fueron realizados en la Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia de la Universidad de San Carlos de Guatemala, Ciudad Universitaria ubicada en la Zona 12 de la capital del país; específicamente los ensayos Fitoquímicos en el Laboratorio de Investigación de Productos Naturales LIPRONAT edificio T-10; los ensayos Farmacológicos en el edificio del bioterio de la Facultad y los ensayos Citotóxicos en la Unidad de Bioensayos del Departamento de Citohistología. Edificio T-11.

I.4.3.Población y obtención del vegetal: Se recopiló la información de cada especie para contar con los estudios químicos y farmacognósticos, origen de la especie, propiedades medicinales atribuidas, detección por venta en los mercados y otras que se consideraron relevantes, para la documentación de las tres especies (P. edulis, T. tepezapote y V. prionophylla).

El material vegetal provino de poblaciones cultivadas o bajo manejo en zonas específicas, organizadas por el laboratorio Farmaya como se consigna a continuación:

P. edulis: proveniente de Samayac, Suchitepequez; T. tepezapote: proveniente de Jalapa y V. prionophylla de Nebaj, Quiché.

Dicho material fue identificado por un botánico en el herbario del Laboratorio Farmaya y confirmado por un botánico del herbario BIGUA.

I.4.4.Modelo de muestreo: El modelo de muestreo que se planteó fue de tipo estratificado, preferencial y por conve-niencia. Los estratos (asociaciones vegetales aparentemente homogéneas entre sí) fueron definidos por exploraciones de campo y coordinación de las actividades con los productores.

I.4.5.Composición de la muestra: Conforme a la naturaleza del órgano vegetal de cada especie (hojas, flores y raíces) se obtuvo una muestra representativa de 1,000 g de material; 250 g de material vegetal se identificó y guardó como muestra de voucher de cada población, y los 750 g restantes fueron sometidos a las pruebas de laboratorio (estudio fitoquímico y ensayos farmacológicos).

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I.4.6.Procesamiento y embalaje de las muestras: Las muestras fueron procesadas conforme a técnicas convencionales de secado. Las materias primas fueron colectadas en el momento fenológico respectivo, las hojas de P. edulis se colectaron en el momento de la floración, las hojas y flores de T. tepezapote en el momento de la floración y las raíces de V. prionophylla después de la fructificación. En todos los casos el material colectado se lavó, oreó y secó en un secador solar específicamente diseñado para plantas medicinales. La droga vegetal seca fue molida en su totalidad, hasta reducirla a un tamaño de partícula requerido para extracción. Para garantizar la homogeneidad tanto en composición como en tamaño de partícula, se tamizó la materia vegetal en un Tamiz No. 5 (estándar EEUU) (Solis et.al., 2005).

El almacenamiento, embalaje y transporte se realizó según técnicas generalmente aceptadas, garantizando la integridad de las muestras.

I.4.7. Preparación de extractos crudos de cada especie: Los extractos se elaboran por extracción fraccionada, en donde del material vegetal se pesan 750 g y se colocan en un percolador, se agregar el disolvente menos polar y se realiza una percolación por 5 días con recambios diarios del disolvente hasta que la extracción sea exhaustiva, se deja secar la materia vegetal; se agrega el siguiente disolvente y se hace otra extracción en las mismas condiciones de la anterior. El fluido extraído se reconcentró a presión reducida a una temperatura inferior a los 45°C en un rotavapor. Los extractos obtenidos fueron sometidos a los ensayos farmacológicos y tamizaje fitoquímico correspondientes. Se hicieron extractos con hexano, cloroformo, acetato de etilo y etanol 95%.

I.4.7.1. Tamizaje químico y fraccionamiento de extractos: I.4.7.1.1.Caracterización química:

Se hizo por pruebas convencionales de tamizaje de Química de Productos Naturales (escala semimicro, usando pruebas específicas para caracterizar alcaloides, saponinas, esteroles insaturados cardenólidos y bufadienólidos, flavonoides, antocianinas, antraquinonas, cuma-rinas, aceites volátiles, principios amargos, taninos, polifenoles, etc.) y mediante CCF, usando para la visualización y caracterización de los metabolitos reactivos cromógenos universales (vainillina-ácido sulfúrico y anisaldehído) y específicos para grupos funcionales (que en general son los mismos señalados con anterioridad para el tamizaje semimicro) (Wagner & Bladt, 1996).

I.4.7.2. Pruebas farmacológicas: Los ensayos farmacológicos son de dos tipos, los que evalúan la eficacia con respecto a la actividad sobre el SNC (eficacia) y los que miden toxicidad (seguridad):

I.4.7.2.1. Bioensayo en nauplios de Artemia salina (Camarón):

Determina la citotoxicidad en el nauplio de A. salina mediante la evaluación de 3 niveles de dilución del extracto y sus fracciones. Se prepara un medio salino, se colocan los huevos y se dejan eclosionar; se transfiere la mayor cantidad de nauplios a un erlenmeyer con medio salino. Se preparan para cada sustancia de prueba 3 niveles de dilución (100, 50 y 25 µg/ml) y se colocan por triplicado en 9 pozos de la microplaca, haciendo un volumen total de 100 µL.

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Se agrega a cada pozo 100 µL de medio salino con 10-15 nauplios y 100 µL de medio salino. Se usan 3 pozos como controles negativos los que se preparan en forma similar, usando como sustancia de prueba el medio de disolución. Después de 24 horas se cuenta el número de sobrevivientes en cada dilución, del que por diferencia con el valor inicial, se calcula el número de decesos. La Concentración Letal Media (CL50) se calcula mediante una regresión no paramétrica usando el programa Finney. Los nauplios son sensibles a muchas sustancias de prueba, por lo que pueden determinar la bioactividad. Como prueba de pretamizaje resulta idónea, principalmente en lo referente a la búsqueda de sustancias antibióticas, citotóxicas y/o plaguicidas (Meyer et al., 1982; Solís et al., 1993).

I.4.7.2.2. Determinación de la dosis letal 50 (DL50) (Saravia, 2005):

Es un ensayo preliminar para determinar la zona del ensayo definitivo, que debe situarse entre la dosis más fuerte, dosis en la cual todos los animales sobreviven y la dosis más débil en la cual todos los animales mueren. Estas dos dosis delimitan la zona en la cual se efectuará el ensayo definitivo. Se administran dosis constantes en progresión geométrica de sustancias a diferentes lotes de animales; se anota el porcentaje de mortalidad en cada lote. Se seleccionan 5 lotes con un número determinado de ratones albinos, de la misma edad y sexo, con un peso de 22±10 g, con la misma alimentación. Luego se administra por vía orogástrica o intraperitoneal (IP) la sustancia a estudiar de 1-5 g/kg de peso, dándole a cada grupo la dosis respectiva, y se observan a la 1, 4, 8, 12, 48 y 72 horas y así sucesivamente durante 8 días. Observar: Alteración de los pelos y mucosas, sistema respiratorio, circulatorio, nervioso central y periférico, actividad somatomotriz y del comportamiento, temblores, hipersialorrea, sudoración, convulsiones, cromodacriorrea, etc. Para determinar la DL50 los datos obtenidos se analizan utilizando el método de Karber y Beherens (Saravia, 2005).

I.4.7.2.3. Prueba de la placa agujereada (Saravia, 2005):

Mide la actividad de un ratón colocado en una tabla con 16 agujeros; se determina durante 5 min, el número de agujeros explorados. La prueba permite apreciar la curiosidad, la activi-dad exploradora y eventualmente la ansiedad del animal. Se usan 3 lotes de 10 ratones de 20 g; el primero sirve de testigo, recibe por vía oral ó IP agua o suero fisiológico 30 min antes del experimento; el segundo recibe por vía IP el medicamento de referencia (haloperidol), 30 min antes del experimento; el tercero recibe por vía oral o IP el medicamento a investigar, 30 min antes del experimento. Los ratones son colocados delicadamente, uno a uno en el centro de la tabla. El número de agujeros explorados es anotado al final de cada minuto durante 5 min. No se toma en cuenta cuando el animal se para delante de un agujero sin explorarlo, ni cuando explora los bordes, así como cuando explora dos o más veces el mismo agujero. Se anota el número de agujeros explorados por minutos y el número de agujeros explorados durante 5 min. La cantidad de agujeros explorados disminuye cuando las sustancia tienen un efecto sedante. Se determina por la DE50.

I.4.7.2.4. Prueba del equilibrio o coordinación (Rota Rod) (Saravia, 2005)

Consiste en determinar el tiempo que se mantiene un ratón sobre un eje que gira a una velocidad lenta. La administración previa de un inhibidor del SNC provoca cambios de coordinación produciendo la caída del ratón. El equipo es un cilindro que da vuelta con discos verticales de 22 cm de diámetro a intervalos de 10 cm en compartimientos, la rotación es de 10 rev/min. Se usan los ratones usados en la prueba de la placa agujereada, los que antes son entrenados varias veces consecutivas debiendo quedarse un tiempo mínimo de 2 min sobre el

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cilindro; los animales que caen son eliminados. Administrar por vía oral o IP la dosis de la droga, en el lote control iniciar 30 min después de la administración y anotar el tiempo de caída de cada uno. Realizar igual cada media hora durante 3 horas. Los ratones deben mantenerse en equilibrio al menos 3 min. Se determina la dosis que hace caer el 50% de ratones en menos de 3 min (DE50). Se calcula el tiempo de caída para cada dosis; se determina el porcentaje de ratones caídos en menos de 3 min (% de reducción); se construye la curva % de reducción en función del logaritmo de la dosis y se determina la dosis que hace caer 50% de ratones en menos de 3 min por el método de Litchfield y Wilcoxon.

I.4.7.2.5. Prueba de la chimenea (Saravia, 2005):

Permite estudiar el efecto sobre las funciones de equilibrio y el tono muscular. Consiste en introducir un ratón en un tubo de vidrio de 30 cm de largo en donde el diámetro es seleccio-nado según el peso del animal. Se utilizan 3 lotes de 10 ratones albinos de 20 g; el primero recibe por vía oral o IP agua o suero fisiológico 30 min antes del experimento; el segundo recibe el medicamento de referencia (haloperidol); y, el tercero recibe la droga a investigar 30 min antes del experimento a dosis vecinas al medicamento de referencia. Estando el tubo en posición horizontal, se introduce al ratón con la cabeza de primero; cuando el animal llega al otro extremo del tubo, se pone en posición vertical; inmediatamente el ratón tiende a subir de retroceso. La prueba es positiva cuando la subida se efectúa en menos de 30 seg. Se determina la DE50 que inhibe el 50% la subida de los animales

I.4.7.2.6. Prueba de potencialización del sueño (Saravia, 2005):

Es una prueba de sedación que permite medir la influencia de un medicamento sobre la duración del sueño inducido por un hipnótico. Es utilizada para el estudio de los medica-mentos psicolépticos, es decir, los hipnóticos, los neurolépticos o tranquilizantes mayores y los tranquilizantes menores. Se usan lotes de 10 animales. Los agentes susceptibles de poten-cializar el sueño (droga a investigar o haloperidol a razón de 2 mg/kg por via IP u oral 4 mg/kg) son administrados así: Cuando son solubles, por vía IP en solución en agua destilada a razón de 20 u de una jeringa de insulina por 20 g de peso, 20 min antes del hipnótico; cuando son insolubles, por vía oral en suspensión en goma arábiga a razón de 20 u de una jeringa de insulina por 20 g de peso corporal 30 min antes del hipnótico. Los ratones reciben un hipnótico (pentobarbital) a tiempo 0 por vía IP a razón de 35 mg/kg de peso. El criterio de sueño es la pérdida del reflejo de enderezamiento. Los resultados son reportados en una tabla en donde se anota el tiempo de adormecimiento del ratón y la duración del sueño.

I.4.7.3.Análisis estadístico : Dependiendo de la naturaleza de los ensayos farmacológicos se utilizaron diseños completa-mente aleatorizados o de bloques completos al azar. La presentación de los resultados se hace mediante estadística descriptiva. La interpretación de los resultados se realiza por inferencia estadística, haciendo uso de técnicas paramétricas y no paramétricas; entre las primeras, se utilizó el análisis de varianza (de una o dos vías), las pruebas de intervalos de Duncan y de comparaciones de Dunnett; entre las no paramétricas se utilizo la regresión no paramétrica para la estimación de concentraciones inhibitorias CI9900 y DL5500.

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PARTE II

MARCO TEORICO (CONCEPTUAL)

A continuación se presenta una revisión bibliográfica de las plantas investigadas:

II.1. Passiflora edulis Sims (Passifloraceae)

Sinónimos: Passiflora diadem Vell.; P. idocarina Barb. Rodrig.; P. middletoniana Paxton; P. pallidiflora Bert.; P. picroderma Barb. Rodrig.; P. pomifera M. Roemer; P. ridigula Jacq.; P. rubricaulis Jacq.; P. vernicosa Barb. Rodrig.; P. verrucifera Lindl. (Dhawan et al., 2004).

Nombres comunes: Calala, Maracuyá, (Nicaragua); Granadilla de China (México) Parcha (Venezuela); Maracuyá, parchita (Colombia), Chinola (República Dominicana) (Standley & Williams, 1961; Cáceres, 2006).

Descripción botánica: Planta trepadora perenne, vigorosa cuyos tallos pueden alcanzar hasta 50 m de largo. Hojas pescioladas de color verde brilloso de 6-15 cm de longitud, profundamente divididas en tres lóbulos. Las flores de 5 cm de ancho nacen solitarias en las hojas trilobadas a lo largo de los brotes, son grandes, olorosas de color morado en el centro y blanco en sus orillas, contienen en un solo eje el pistilo y los estambres, que están situados por debajo de la extremidad del pistilo y orientados hacia abajo. Los frutos son comprimidos, de color verde amarillento, de cáscara dura que contiene numerosas semillas alveoladas de color amarillo parduzco (Standley & Williams, 1961).

Datos agroecológicos:

Hábitat y distribución geográfica: Se encuentra en bosques mixtos, húmedos o secos, desde el sur de México, Centro América y sur América. Nativa del Brasil y norte de Argentina. Crece en climas subtropicales húmedos, con una precipitación de 630-1,300 mm por año. Cultivada en otras partes por sus frutos o para ornato; es raramente plantada en Guatemala y en Centro América en general. El nombre de granadilla silvestre fue dado por Jesús Morales Ruano para una planta colectada en Guatemala lo que indica que esta estaba creciendo silvestremente, pero lo más probable es que esta especie fuese traída para cultivarse en Guatemala (Standley & Williams, 1961).

Historia y usos etnomédicos: Hacia 1560 en lo alto de los Andes peruanos, 20 años después de que Francisco Pizarro había reprimido brutalmente la última rebelión de los incas y los había forzado a convertirse al cristianismo, el doctor Nicolás Monardes, de Sevilla sufrió cargo de conciencia por la carnicería que sus coterráneos habían perpetrado. Buscó en estas tierras alguna señal de aprobación divina para realizar la Conquista y la encontró en una vid que tenía una grande y hermosa flor con partes que parecían evocar la Pasión de Cristo. Algunos herbolarios mal informados recomiendan té como afrodisiaco, confundiendo la Pasión de Cristo con otra pasión. Esta hierba no tiene ningún efecto de estimulación sexual. Todo lo contrario, es un potencial tranquilizante y sedante suave y puede ser útil para tratar ansiedad y estrés.

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La infusión de hojas y flores se usa oralmente para el tratamiento de bronquitis, anemia, epilepsia, insomnio, hipertensión y otros estados nerviosos. Tópicamente se usa en las infla-maciones hemorroidales. Se le atribuye propiedad sedante, diurética, febrífuga y antihiper-tensiva. El jugo del fruto se utiliza como bebida y para tratar ictericia, dolores estomacales y tumores intestinales. Las semillas tienen un aceite fijo comestible. Es usada en Suramérica como sedante, diurética, antihelmíntica, antidiarreica, tónica y para el tratamiento de la hipertensión, menopausia y cólico en los niños. En la India, las hojas frescas son hervidas en agua y el extracto es bebido para tratar disentería e hipertensión. Los frutos son comidos para aliviar la estreñimiento (Arteche et al., 1998, Petry et al., 2001; Cáceres, 2006).).

La infusión y tintura de las partes aéreas de otras especies del mismo género se utilizan además de lo citado anteriormente para inflamación urinaria, anemia, paludismo, susto, y afecciones respiratorias (tos, tuberculosis); la decocción del fruto se usa como protector gástrico, contra litiasis biliar y rabia. La tintura se usa en homeopatía para el tratamiento de epilepsia (Cáceres, 1996, 2006; Dhawan et al., 2004).

Presenta la cualidad de generar un sueño similar al fisiológico acompañado de un despertar rápido, sin embotamiento o borrachera matinal. Suele sinergizarse con valeriana, melisa o tilo en casos de insomnio (Alonso, 1998).

Composición química: Se ha reportado la presencia de los siguientes compuestos en diferentes partes de la planta: en cantidades traza, alcaloides indólicos, harmano, harmina, harmol, triptamina, dependiendo de la madurez de la planta (ESCOP 2003); sesquiterpenos, cumarinas, ácidos caféico, clorogénico y p-coumárico, hesperidina, passiflorina, vitexina, quercitina, β-sitosterol, estigmasterol, prunasina, compuestos azufrados, luteolina, glucósidos, umbeliferona, rutina, quercitina, passicol, con considerables variaciones en calidad y cantidad dependiendo del origen (Cáceres, 1996¸ Petry et al., 2001, ESCOP 2003), hexahidro,7,7-dimetil-1-propan-2-onil isobenzofurano, dihidroedulan, neohesperidina, quercitina, rutina, umbeliferona, vitexina y luteolina-6-C-fucósido (Yoshikawa et al., 2000; Dhawan et al., 2004, Arteche et al., 1998).

Según estudios realizados en Nicaragua, en las hojas se encontró que el contenido de vitexina, isovitexina, orientina, isoorientina, calculado como vitexina era de 1.43% y el contenido total de flavonoides calculado como vitexina fue de 2.15%. Los alcaloides citados en la bibliografía del grupo de harmano, no se encontraron en la muestra en estudio, tampoco fue encontrada quercitina. PH EUR 2002 (Bombardelli et al., 1975; Cáceres, 2006)

Denominación de la droga vegetal: Passiflora edulis folium

Definición: Parte área de la planta (Hojas, tallos y flores), secas y trituradas

Obtención: La droga se cosecha durante el período de floración y se seca a la sombra o con calor artificial a temperatura de 45ºC (Sharapin, 2000).

Descripción macro y microscópica: Epidermis en superficie: Las células epidérmicas de la cara abaxial son de contorno ligeramente ondulado; en la cara adaxial se diferencian por tener una forma poligonal de contorno rectilíneo. Asi mismo, se observó alta densidad estomática y algunos de los estomas comparten células acompañantes. Los estomas son anomocíticos, paracíticos y anisociticos (Cáceres, 2006).

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Arquitectura foliar: Venación pinnada, semicraspedódroma.Vena primaria de recorrido derecho, las venas secundarias son de recorrido curvado uniformemente y se ramifican muy cerca del margen, una de las ramas termina en el margen, la otra se una a la secundaria superadyacente. Areolas de desarrollo imperfecto, dispuestas al azar de forma pentagonal, cuadrangular y triangular; ramificación variable que va desde una sola ramificación a mas de tres veces. Venación última marginal ojalada (Cáceres, 2006).

Corte transversal de la lámina: Epidermis uniestratificada; las células de la cara adaxial son de gran tamaño de forma cuadrangular y rectangular que presentan paredes tangenciales ligeramente convexas y radiales rectas; la cara abaxial presenta células epidérmicas finas de forma rectangular ambas con cutícula delgada y lisa. Mesófilo de estructura dorsiventral con una hilera de parénquima en empalizada y parénquima esponjoso desarrollado; escasas drusas de oxalato de calcio localizadas en el parénquima en empalizada. El nervio medio formado por dos grupos de haces bicolaterales, tiene una forma cóncava. Presenta tres capas de colénquima laminar; drusas de oxalato presentes en el parénquima. En la cara adaxial, el nervio presenta una forma convexa muy marcada, dando el aspecto de una protuberancia (Cáceres, 2006).

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Estudios farmacológicos: Un estudio sobre extractos acuosos de P. edulis reporta que estos exhiben efectos depresores del SNC no específicos, en ratones, ratas y humanos sanos (Maluf et al., 1991). En 2001 un estudio comparativo entre los extractos hidroetanólicos de hojas de P. alata y P. edulis denotan que los extractos acuosos de P. edulis prolongan el sueño inducido por barbitúricos (Petry et al., 2001). A nivel nacional se reportan dos estudios, uno que indica el efecto tranquilizante a dosis de 1,000 mg/kg en ratones (Valladares, 2001) y otro que concluye que la infusión de las hojas en dosis de 750 mg/kg y 1,000 mg/kg no posee actividad hipnótico-sedante ya que no se disminuye el equilibrio (Prueba de Rota-Rod) ni la actividad motora (Prueba de la Chimenea) y no potencializa el sueño, únicamente da positivo en los resultados la prueba de la curiosidad (Bonilla, 2003).

La monografía para este género de la European Scientific Cooperative on Phytotherapy (ESCOP) reporta estudios realizados en roedores; después de un análisis de estos, se concluye que las investigaciones realizada generalmente respaldan los conocimiento empíricos acerca de los efectos sedantes y ansiolíticos aunque con algunos resultados contradictorios, resaltando que aun no esta claramente dilucidado cual es el compuesto responsable de dichos efectos (Maluf et al., 1991; ESCOP, 2003)

Una lectura cuidadosa de la bioactividad de P. edulis revela que investigaciones alrededor del mundo tienen diferentes interpretaciones sobre sus resultados. Los alcaloides harmanos y flavonoides han sido reportados como los constituyentes más importantes de P. incarnata, los cuales tienen propiedad inhibitoria de la MAO y por esto se han sugerido como los contituyentes bioactivos. Los flavonoides crisina y maltol han sido descritos por participar en su actividad depresora (Abreu Matos, 2000). En los estudios más recientes, la actividad ansiolítica y sedante de P. incarnata ha sido atribuida a receptores benzodiacepínicos me-diante un proceso bioquímico. Se ha reportado como un depresor del lado motor de la médula espinal, de reducir la presión arterial e incrementar el ritmo respiratorio. Otros trabajos rechazan que cualquiera de los constituyentes fitoquímicos conocidos tengan alguna participación en la actividad sedante y ansiolítica, concluyéndose que no existe consenso acerca de su actividad. Otros autores atribuyen esta confusión a que no existe una identificación botánica de la planta ya que P. incarnata y P. edulis tienen características macro y microscópicas muy similares. P. edulis es sembrada mayormente porque su fruto es comestible pero raramente ha sido descrita como un hipnótico potente (Dhawan et al., 2004).

Toxicología: Por lo general es muy bien tolerada, pero a dosis muy altas puede provocar náuseas y vómitos (por su sabor amargo), cefaleas, taquicardia, disminución del tiempo de reacción frente a estímulos externos, pudiendo dar convulsiones y paro respiratorio (Alonso, 1998).

No se observó toxicidad aguda después de una administración intraperitoneal en ratones de extractos de Passiflora en dosis mayores de 500 mg/kg y 900 mg/kg de peso. No se observaron cambios de peso, temperatura rectal y coordinación motora, comparado con los patrones, así también un estudio realizado en la Universidad de Rosario, Argentina, con ratas blancas a las que se les administró un extracto en dosis equivalentes al consumo diario de un adulto humano durante 15, 30 y 90 días demostraron ausencia de cambios significativos en cuando a peso, peso hepático y cerebral, volumen de líquido corporal y comida ingerida

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(Alonso, 1998; ESCOP, 2003). Sin embargo otro estudio demuestra que P. edulis puede provocar toxicidad hepatobiliar y pancreática en animales y humanos (Dhawan et al., 2004).

No se recomienda su uso en niños o durante el embarazo y lactancia. En caso de embarazo, el harmano y la harmalina han demostrado ser sustancias estimulantes uterinas en animales. Sin embargo, mujeres en estado de gravidez que por desconocimiento han tomado Passiflora, no presentaron aborto ni aceleramiento del parto (Alonso, 1998).

II.2.Valeriana prionophylla Standl. (Valerianaceae) Sinónimos: Valeriana skutchii Standl, V. pumilio Standl. & L.

Nombres comunes: Valeriana, Pericón de Monte.

Descripción botánica: Hierba perenne, erecta, vivaz, rizoma pequeño productor de estolones subterráneos de los que salen múltiples raíces, 1-2 cm de grueso; tallo hueco, acanalado, 70-170 cm de alto. Hojas predominantemente basal, usualmente numerosas y aprisionadas algunas cespitosas, individidas, oblongo-linear a espatuladas, la mayoría de 3-30 cm de largo, 0.5-3 cm de ancho, obtusas, atenuadas hacia la base subpeciolar, los márgenes serrados, serrado-dentados, crenada o raramente entera, usualmente ciliada, glabra o pilosulosa, usualmente sésiles y envuelta en la base. Tallo florar que surge al 2 o 3 año, redondo, estriado, hasta 1.5 m de alto, esparcidamente pilosos o casi glabros. Flores numerosas dispuestas en un dicasio agregado, densa o difusa, pequeñas, tubulares, irregulares, blancas o rosadas. Frutos en aquenio coronado de un vilano plumosos. Raices olorosas (Nash & Dieterle, 1976).

Datos agrotecnológicos

Hábitat y distribución geográfica: Se encuentra en lugares húmedos y umbrosos, silvestre o cultivada en clima templado o de montaña, en bosques hasta 2100 msnm (Nash & Dieterle, 1976). Nativa de Centro América eventualmente cultivada en pequeña escala.

Usos etnomédicos: Lo extractos de varias especies de valeriana son usados en medicina tradicional en muchas partes del mundo donde son endémicas. Los usos tradicionales más comunes son: tranquilizante y sedante, aunque también es utilizado como sedante gastrointestinal, desodorante y para el tratamiento de desórdenes urinarios (Hobbs, 1989; Foster, 1990; Cáceres, 1996; Houghton, 1997). También es utilizada en Estados Unidos para el estrés emocional, dolores musculares, cólicos menstruales e intestinales, espasmo bronquial, tos ligera, cefalea y para el insomnio (Hobbs, 1989).

En algunos pueblos se comen las hojas crudas en ensalada o sazonan carnes y sopas; el aceite esencial o extracto se usa en cerveza, licores y repostería. Se siembra como planta ornamental, aromática y cosmética (Cáceres, 1996).

Composición química: Para otras especies del género se han centrando las investigaciones en los dos componentes mayoritarios, sesquiterpenos de los aceites esenciales e iridoides. Se describen para el primer grupo, acetato de bornilo, valeranona, valeranal, isovalerato de egenil, isovalertao de eugenilo, alcohol parchouli, valerianol borneol, camfeno, leedlo, ácido isovalérico que proporciona el

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olor característico, terpinoleno; entre los iridoides se describen valepotriatos, didrovaltratos e isovaltratos, además de algunos alcaloides como actinidina, valerianina valerina y catinina (Hougthon, 1988; Cáceres, 1996).

La hoja y rizoma de V. prionophylla contienen iridioides monoterpénicos (valtrato, isovaltra-to, homovaltrato, didrovaltrato) (Chavadej et al., 1985) e iridoides (7,9’:7’,9-diepoxiglicano) (Piccinelli et al., 2004). En un estudio de especies popularmente llamadas valeriana en Guatemala se demostró que posee una diversidad de derivados de valepotriatos (Cruz, 2005a), encontrándose por TLC que al menos dos compuesto son similares a los de V. officinalis (de la Cruz, 2005).

Definición: La materia médica es el rizoma y la raíz de la planta (Cáceres, 2006).

Obtención: La materia médica son los rizomas y la raíz en V. officinalis. Se recolecta a los dos años, desenterrando los rizomas en otoño (septiembre-octubre), se limpian las raíces y se seca lentamente a la sombra (40-50°C) (Williams, 1980).

Descripción macro y microscópica: Corte en el rizoma: En el corte del rizoma se identifican varias estructuras tales como: fibras, que ayudan a dar rigidez, traqueidas que son células alargadas y conductoras, a diferencia de las fibras que no son conductoras su única función es dar soporte. Las fibras y traqueada forman parte del floema aunque no se distinguió con claridad si en el secundario o primario. Se observan bastantes granos de aceite, principalmente en el parénquima (Rosales et al., 2006).

Corte transversal en la raíz: En la epidermis se encontraron traqueidas las cuales son estructuras conductoras que se encuentran en el xilema. Las traqueidas se observaron como células alargadas con puntuaciones en sus paredes. Las traqueidas poseen paredes secundarias y carecen de protoplasto en su madurez (Rosales et al., 2006).

Se encuentran fibras, que son células no conductoras y el xilema primario y secundario. Las fibras están constituidas principalmente de celulosa. Se observan células de parénquima las cuales forman parte de la raíz y células que contienen lignina, así como gotas de aceites esenciales ya que la raíz es muy abundante (Rosales et al., 2006).

La endodermis (capa interna del córtex) se observa como células estrechamente empacadas entre sí, la cual tiene como función la regulación del movimiento de los minerales que entran en el xilema; el estele o cilindro central de tejidos vasculares, el cual está formado por xilema y floema (Rosales et al., 2006). Arquitectura foliar: Las células de la epidermis tienen forma de rompecabezas. La venación de la hoja posee un patrón específico en donde se pueden observar las venas primarias, secundarias y terciarias formando una estructura semicuadrada. Esta disposición característica de las venas puede ser utilizada como un parámetro para identificar la especie. Se encuentra gran cantidad de tricomas glandulares asociados, en su mayoría a las venas primarias y algunos dispersos en toda la hoja. Como era de esperarse, en el envés se encontró gran cantidad de estomas los cuales son anomocíticos (tipo de estoma que no tiene células subsidiarias). El meristemoide da origen solo a las células oclusivas; al observar el haz de la hoja también se observan estomas, los cuales estaban en menor cantidad que en el envés, siendo estos a diferencia de los presentes en el envés anisocíticos (tipo de estoma que

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usualmente tiene tres células subsidiarias que rodean al estoma, una de menor tamaño que las otras dos (Rosales et al., 2006).

En los cortes transversales de hoja de valeriana se puede observar que uno cuenta con dos capas de parénquima en empalizada mientras que el otro solo cuenta con una capa; esto probablemente se debe a que uno de los cortes corresponde a una hoja más joven, por lo que la misma aún no había desarrollado la segunda capa (Rosales et al., 2006).

Raiz de Valeriana 1. Traqueadas; 2.Traqueidas; 3. Fibras; 4. Células del parénquima; 5. Células con pared lignificada; 6. Gotas de aceite esencial

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1. Estomas anomocíticos en el envés de la hoja 2. Nervadura de la hoja con un patrón particular, la hoja esta vista desde la vena central (v.c). 3. Tricomas glandulares asociados a las venas primarias. 4. Traqueida escaliforme con hoyos en su estructura 5. Traqueidas escaliformes 6. Estoma anomocítico encontrado en el envés de la hoja 7. Estoma anisocítico encontrado en el haz de la hoja (Rosales et al., 2006)

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34

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6 7

Valeriana

v.c.

v.c.

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Estructura Foliar de Valeriana prionophylla – Standl (Rosales et al., 2006).

Raíz de Valeriana prionophylla – Standl (Rosales et al., 2006).

Epidermis abaxial (envés)

Epidermis adaxial (haz)

Parénquima en empalizada

Parénquima esponjoso

Estoma

Epidermis

Córtex

Xilema Floema

Endodermis

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Pruebas Histoquímicas (Rosales et al., 2006). Órgano de la planta Reactivo Sustancias ergásticas Resultado Tejido en donde se

encuentra Lugol Almidón +++ Parénquima Sudán Aceites esenciales ++ Epidermis Dragendorff Alcaloides + Epidermis y parénquima Hoja

Sulfato férrico Taninos - ---------------- Lugol Almidón - ---------------- Dragendorff Alcaloides - ---------------- Naranja G Gránulos de aleurona - ---------------- Rizoma

HCl 10% Cristales oxalato de Ca + Epidermis Naranja G Gránulos de aleurona - ---------------- Sudán Aceites esenciales +++ Parénquima Dragendorff Alcaloides + Parénquima Raíz

Sulfato férrico Taninos - ----------------

Estudios farmacológicos: Los efectos hipnóticos de V. officinalis han sido evaluados en varios estudios, en sujetos de experimentación y en pacientes con disturbios de sueño, especialmente personas que duerme poco o con insomnio. Muchos de estos estudios emplearon medidas subjetivas para demostrar los efectos hipnóticos de la planta (Herrera et al., 2001).

Una revisión de los estudios clínicos, concluye que la evidencia obtenida para estudios doble ciego del efecto sobre el sueño son prometedores pero no completamente conclusivos, por que los resultados de varias investigaciones reportan un agudo y acumulativo efecto de la valeriana sobre el sueño pero no todos los estudios lo reportan. Estas discrepancias pueden ser resultado de la inconsistencia entre los diseños experimentales, por lo que se recomienda realizar estudios estrictos acerca de su eficacia en el tratamiento del insomnio. Se cita artículo que a la misma conclusión llegan en la Farmacopea de los Estados Unidos (USP) en 1998 (Stevinson & Ernst 2000).

La información sobre la actividad farmacológica de V. prionophylla es escasa, pero reciente. El extracto etanólico tiene actividad antioxidante y vasorelajante (Picinelli et al., 2004). Una investigación por estudiantes de Farmacología III de la Escuela de Química Farmacéutica demostró que la infusión de raíz es sedante, lo que fue confirmado al demostrarse actividad de la infusión a dosis de 1,000 mg/kg de peso, dando positivas las pruebas de Placa Agujereada (p=0.0099) y de la Chimenea (p<0.0002) (Roca, 2005). En 28 pacientes mayores de 40 años con diagnóstico de insomnio, la administración de la tintura 1:5 fue más efectiva que la técnica de relajación en disminuir la etapa de latencia del sueño y el número de veces que las personas despertaron, así como mejora la calidad del sueño (Cruz, 2005b).

Toxicología: No existen trabajos sobre la especie, pero de V. officinalis se sabe que en algunas personas puede producir inquietud durante el sueño; su uso excesivo puede crear dependencia (Cáceres, 1996); se ha observado una leve toxicidad por inyección IP en ratones (DL50 3.3 g/kg), sin cambios a la administración a ratas por 45 días en dosis de 400-600 mg/kg (ESCOP, 2003).

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II. 3. Ternstroemia tepezapote Schlect. & Cham. (Theaceae) Sinónimos: T. sphaerocarpa Melchior, T. pringlei Standl., T. seleriana Loes, Taonabo sphaerocarpa Rose.

Nombres comunes: Baratillo, Chucul, Hualicuc, Flor de tilia, Trompillo, Trencillo, Palo huaco (Standley & Williams, 1963).

Descripción botánica Árbol de hasta 15 m de alto con un tronco de 15 cm o más de diámetro; hojas oblongo-bovadas u oblongo-blanceoladas, 7-3 cm de largo, ancho de 3-4 cm aproximadamente, obtusas o redondeadas en el ápice o algunas veces subaguda, cuneadas o atenuadas en la base, enteras o crenuladas, nervadura inconspicuas, ambas en la superficie; pedicelos 1.5-2.5 cm de largo, 2 brácteas, opuestas desiguales, ovadas o suborbiculares, 2-3 mm de largo, sépalos desiguales, uno de afuera suborbicular, de 8 mm de largo, glandular-denticulado, a menudo conspiscuo, o algunas veces entero, pétalos blancos o rosados, lanceolados y ovados, 8 mm de largo, agudo, cerca de 50 estambres y 2 seriados, 2 ovarios de 4-5 ovulos cada uno, estigma punctiforme, fruto cónico u ovoide-cónico, 1-2 cm de largo, 1-1.5 m de ancho en la base (Standley & Williams, 1963).

Datos agrotecnológicos Hábitat y distribución geográfica: Habita en climas cálido, semicálido y templado entre los 300 y los 1000 msnm. Planta silvestre crece a orillas de caminos, asociada a bosques tropicales caducifolio y subcaduci-folio y bosque espinoso, bosque mesófilo de montaña, bosque de pino y bosque de encino (Linares et al., 1990, Argueta et al., 1994). Origen desconocido, crece del sur de México a Honduras. En Guatemala crece en Petén, Alta Verapaz, Izabal, Zacapa, Chiquimula, Jalapa, Santa Rosa, Guatemala, Suchitepequez, Huehuetenango, Chimaltenango, Quiche y Sololá (Standley & Williams, 1961). Usos etnomédicos: La hoja es usada como antirreumática. Se recomienda su uso como calmante nervioso (Martínez, 1992; House et al., 1995). El uso más generalizado es para el tratamiento de enfermedades del corazón y de los nervios, sola o como parte de un compuesto con toronjil (Linares et al., 1990). En otros lugares se utiliza para la tos en cocimiento con canela (Argueta et al., 1994) y para mordedura de culebra (Nelson, 1986). Composición química: No se encontró en la literatura datos de la composición química de la planta. Estudios farmacológicos: La infusión de la flor ejerce una acción constrictora sobre el músculo liso vascular de rata; en la aorta y vejiga conduce a un aumento en las contracciones. En el intestino produce un aumento en la motricidad con evidente aumento del tono; en aurícula aislada solo a dosis elevadas se observó moderado aumento en la amplitud de la contracción. En corazón prefundido de rana se observó un ligero aumento en la contracción. Toxicología: No se encontraron datos sobre su toxicidad

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PARTE III III.1 RESULTADOS

III.1.1 TAMIZAJE FITOQUÍMICO

En la Tabla 1 se presentan los porcentajes de rendimiento de cada extracto obtenido. Como puede observarse, para las tres especies analizadas, el mayor rendimiento se obtiene en los extractos etanólicos, pues estos arrastran la mayoría de los componentes

Tabla 1. Porcentaje de rendimiento de cada fracción obtenida de las especies vegetales

Especie Fracción g obtenidos

% de rendimiento

P. edulis planta Etanólica 23.4 5.85 P. edulis planta Act. Etilo 7.9 2.02 P. edulis planta Clorofórmica 6.8 1.38 P. edulis planta Hexánica 6.4 1.31 V. prionophylla rizoma Etanólica 41.2 12.22 V. prionophylla rizoma Act. Etilo 3.0 0.89 V. prionophylla rizoma Clorofórmica 7.5 2.34 V. prionophylla rizoma Hexánica 11.6 3.44 T. tepezapote flor Etanólica 30.8 7.64 T. tepezapote flor Act. Etilo 2.0 0.49 T. tepezapote flor Clorofórmica 3.03 0.75 T. tepezapote flor Hexánica 1.9 0.47 T. tepezapote hoja Etanólica 25.0 12.19 T. tepezapote hoja Act. Etilo 2.9 3.6 T. tepezapote hoja Clorofórmica 1.2 1.49 T. tepezapote hoja Hexánica 4.8 5.96

En la Tabla 2 se observa la presencia de aceites esenciales por la coloración que dan las manchas separadas en la cromatografía en capa fina al rociar el revelador de anisaldehído, ácido sulfúrico, que según la metodología se interpreta como positivo en coloraciones azul, rojo, amarillo, violeta, café y naranja aunque estas bandas no coinciden completamente con el Rf de los estándares utilizados.

Todas las especies analizadas demostraron tener aceites esenciales, presentándose mayor número de bandas en los extractos de P. edulis y T. tepezapote flor en su fracción hexánica y en esta especie al aumentar la polaridad de los extractos la presencia de las bandas es menor ya que en la fracción clorofórmica se presentaron dos bandas y no se presentaron bandas para la fracción de acetato de etilo. En el extracto etanólico de T. tepezapote hoja no se presentaron bandas características, y en la fracción hexánica se presentaron el mayor número de bandas. En V. prionophylla se presentaron bandas en todos los extractos, aunque el menor número de bandas se presenta en la fracción de acetato de etilo. Los Rf de los estándares están próximos a los de las muestras por lo que la presencia especialmente de 1,8 cineol y acetato de linalilo podrían estar presentes como constituyentes del aceite esencial en las muestras analizadas.

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Tabla 2. Aceites Esenciales

Especie Fracción No. de Bandas Rf P. edulis Etanólica 8 0.08,0.15,0.24,0.35,0.40,0.5,0.76,

0.88 P. edulis Hexánica 8 0.08, 0.15, 0.24,

0.40,0.5,0.54,0.76, 0.88 P. edulis Clorofórmica 9 0.05,0.08,0.15,0.24,0.35,0.40,0.5,

0.76,0.88 P. edulis Acetato etilo 9 0.08,0.15,0.24,0.35,0.40,0.5,0.76,

0.83, 0.88 V. prionophylla rizoma

Etanólica 5 0.08, 0.15, 0.24, 0.33, 0.70, 0.88

V. prionophylla rizoma

Hexánica 6 0.08, 0.16, 0.22, 0.36, 0.70, 0.88


Clorofórmica 6 0.08, 0.16, 0.22, 0.36, 0.70, 0.88


Acetato etilo 3 0.08, 0.15, 0.33,

T. tepezapote hoja Etanólica - -- T. tepezapote hoja Hexánica 7 0.08, 0.24, 0.29, 0.36, 0.47, 0.69,

0.88 T. tepezapote hoja Clorofórmica 4 0.08, 0.21, 0.29, 0.36 T. tepezapote hoja Acetato etilo 2 0.29, 0.35 T. tepezapote flor Etanólica 5 0.08, 0.17, 0.32, 0.36, 0.88 T. tepezapote flor Hexánica 10 0.08,0.10,0.17,0.22,0.30,0.37,0.4

6,0.53,0.68,0.88 T. tepezapote flor Clorofórmica 2 0.08, 0.17 T. tepezapote flor Acetato etilo - -- 1,8 cineol Estándar 1 0.5 Acetato de linalilo Estándar 1 0.65 Citronelal Estándar 1 0.74

Fase móvil: Tolueno: acetato de etilo (93:7). Revelador: anisaldehído, ácido sulfúrico. Colores presentados en las bandas en VIS: rojo, violeta, amarillo, verde, naranja, café.

23

En la Tabla 3 se presentan los resultados obtenidos para saponinas en los cuales se observan resultados positivos para dichos metabolitos en los cuatro extractos de P. edulis, V. prionophylla y T. tepezapote hoja y flor, coincidiendo al menos una de las bandas obtenidas con el Rf del estándar de saponinas (saponinas de quilaya) y sarsapogenina a excepción de los extractos acetato de etilo de hoja y etanólico de flor de T. tepezapote cuyas bandas no coinciden con los Rf de los estándares utilizados, sin embargo por la comparación con los colores que reporta la literatura se puede deducir que si existe presencia de estos metabolitos pero con estructura química diferente a la de los estándares utilizados.

Tabla 3. Saponinas Especie Fracción No. de Bandas Rf P. edulis Etanólica 1 0.91 P. edulis Hexánica 1 0.91 P. edulis Clorofórmica 2 0.73, 0.91 P. edulis Acetato etilo 1 0.91 V. prionophylla rizoma Etanólica 4 0.13, 0.22, 0.41, 0.91 V. prionophylla rizoma Hexánica 2 0.65, 0.91 V. prionophylla rizoma Clorofórmica 1 0.91 V. prionophylla rizoma Acetato de etilo 2 0.65, 0.91 T. tepezapote hoja Etanólica 4 0.25, 0.55, 0.75, 0.91 T. tepezapote hoja Hexánica 3 0.55, 0.75, 0.91 T. tepezapote hoja Clorofórmica 5 0.25, 0.38, 0.53, 0.75, 0.91 T. tepezapote hoja Acetato de etilo 5 0.25, 0.38, 0.53, 0.75, 0.83 T. tepezapote flor Etanólica 1 0.25 T. tepezapote flor Hexánica 1 0.91 T. tepezapote flor Clorofórmica 1 0.91 T. tepezapote flor Acetato de etilo 2 0.75, 0.91 Saponina Estándar 1 0.91 Sarsapogenina Estándar 1 0.91 Fase móvil: n-butanol-ácido acético glacial: agua (25:5:20). Revelador: anisaldehído, ácido sulfúrico. Colores presentados en las bandas en VIS: azul, violeta, amarillo, café y verde.

24

En la Tabla 4 se observa la presencia de flavonoides, únicamente en los extractos etanólicos y de acetato de etilo de T. tepezapote, , acercándose los Rf con los del estándar de ácido clorogénico, por lo que se puede decir que tienen estructura química similar.

Tabla 4. Flavonoides

Especie Fracción No. De Bandas Rf P. edulis planta Etanólica ---------- ---------- P. edulis planta Act. Etilo ---------- ---------- P. edulis planta Clorofórmica ---------- ---------- P. edulis planta Hexánica ---------- ---------- V. prionophylla rizoma

Etanólica ---------- ----------


Act. Etilo ---------- ----------


Clorofórmica ---------- ----------


Hexánica ---------- ----------

T. tepezapote flor Etanólica 1 0.82 T. tepezapote flor Act. Etilo 1 0.81 T. tepezapote flor Clorofórmica ---------- ---------- T. tepezapote flor Hexánica ---------- ---------- T. tepezapote hoja Etanólica ---------- ---------- T. tepezapote hoja Act. Etilo ---------- ---------- T. tepezapote hoja Clorofórmica ---------- ---------- T. tepezapote hoja Hexánica ---------- ---------- Quercetina Estándar 1 0.86 Acido Clorogénico Estándar 1 0.81

Revelador: NP/PEG. Fase Móvil: Acetato de etilo: ácido fórmico: ácido acético glacial:agua (33.3:3.7:3.7:9). Los resultados presentan en VIS, amarillo, verde, blanco fluorescente

25

Como se observa en la Tabla 5, para P. edulis se demuestran principios amargos en los extractos de acetato de etilo y cloroformo, V. prionophylla presenta principios amargos en las cuatro porciones y T. tepezapote en la flor se observa el metabolito en la fracción clorofórmica y en la hoja, en los extractos acetato de etilo, clorofórmico y hexánico. Para los principios amargos identificados, ninguno coincide con los estándares propuestos, únicamente en color, por lo que en este ensayo, los estándares sirven como verificador de que la prueba esta bien realizada

Tabla 5. Principios Amargos Especie Fracción No. de

Bandas Rf

P. edulis planta Etanólica ---------- ---------- P. edulis planta Act. Etilo 1 0.7 P. edulis planta Clorofórmica 1 0.68 P. edulis planta Hexánica ---------- ---------- V. prionophylla rizoma Etanólica 1 0.82 V. prionophylla rizoma Act. Etilo 1 0.82 V. prionophylla rizoma Clorofórmica 1 0.82 V. prionophylla rizoma Hexánica 1 0.79 T. tepezapote flor Etanólica ---------- ---------- T. tepezapote flor Act. Etilo ---------- ---------- T. tepezapote flor Clorofórmica 1 0.62 T. tepezapote flor Hexánica ---------- ---------- T. tepezapote hoja Etanólica ---------- ---------- T. tepezapote hoja Act. Etilo 1 0.7 T. tepezapote hoja Clorofórmica 1 0.65 T. tepezapote hoja Hexánica 1 0.54 Aucubina Estándar 1 0.59 Neurolaena lobata Estándar 1 0.2

Nota: Revelador utilizado: vainillina-ácido sulfúrico..Fase Móvil: Acetato de etilo: metanol: agua (38.5:7.5:4). Los resultados presentan en VIS colores estándar, café, rojo, púrpura.

26

Los cardenólidos y bufadienólidos, fueron detectados en los extractos clorofórmico y hexánico de V. prionophylla, así como en el extracto clorofórmico de T. tepezapote flor y en el extracto de acetato de etilo de T. tepezapote hoja; unicamente en los extractos clorfomrmico y hexanico del rizoma de V. prionophylla se encontraron bandas con Rf similar al del estándar (Digitalis), aunque no coinciden los colores lo que implica similitud química, mientras que en el extracto cloroformico de flor de T. tepezapote y en el extracto acetato de etilo de T. tepezapote las bandas coinciden en el color rosado pero con coinciden los Rf que se encuentran entre 0.66 y 0.72. Los demás extractos no presentaron presencia de estos metabolitos (Tabla 6).

Tabla 6. Cardenólidos y Bufadienólidos

Especie Fracción No. de Bandas Rf

P. edulis planta Etanólica ---------- ---------- P. edulis planta Act. Etilo ---------- ---------- P. edulis planta Clorofórmica ---------- ---------- P. edulis planta Hexánica ---------- ---------- V. prionophylla rizoma Etanólica ---------- ---------- V. prionophylla rizoma Act. Etilo ---------- ---------- V. prionophylla rizoma Clorofórmica 1 0.81 V. prionophylla rizoma Hexánica 1 0.82 T. tepezapote flor Etanólica ---------- ---------- T. tepezapote flor Act. Etilo ---------- ---------- T. tepezapote flor Clorofórmica 1 0.72 T. tepezapote flor Hexánica ---------- ---------- T. tepezapote hoja Etanólica ---------- ---------- T. tepezapote hoja Act. Etilo 0.66 T. tepezapote hoja Clorofórmica ---------- ---------- T. tepezapote hoja Hexánica ---------- ---------- Digitalis Estándar 1 0.82

Nota: Revelador utilizado: Reactivo de Kedde. Fase Móvil: Acetato de etilo: metanol: agua (50:6.5:5). Los resultados observan colores en VIS, rosado, azul a rojo violeta.

27

La Tabla 7 muestra los resultados obtenidos al identificar sesquinterpenlactonas, como se puede observar estos metabolitos fueron positivos para todos los extractos de las plantas en estudios. Los colores de las manchas separadas coinciden con los que especifica la literatura para este tipo de metabolitos secundarios, y el Rf de al menos una banda coincide con el del estándar utilizado (Neurolaena lobata, neurolenina y lobatina), a excepción del extracto de acetato de etilo de hoja de T. tepezapote del cual ninguna banda coincide, pero al igual que en análisis anteriores se puede deducir por la comparación con los colores que reporta la literatura que si existe el metabolito pero con estructura química diferente.

Tabla 7. Sesquiterpenlactonas

Especie Fracción Rf Visible P. edulis planta Etanólica 0.79 Verde P. edulis planta Act. Etilo 0.79 Verde P. edulis planta Clorofórmica 0.79 Verde P. edulis planta Hexánica ---------- ---------- V. prionophylla rizoma Etanólica 0.75 Café V. prionophylla rizoma Act. Etilo 0.75 Café V. prionophylla rizoma Clorofórmica 0.74 Café V. prionophylla rizoma Hexánica 0.74 Café T. tepezapote flor Etanólica ---------- ---------- T. tepezapote flor Act. Etilo ---------- ---------- T. tepezapote flor Clorofórmica 0.75 Verde T. tepezapote flor Hexánica ---------- ---------- T. tpezapote hoja Etanólica ---------- ---------- T. tepezapote hoja Act. Etilo ---------- ---------- T. tepezapote hoja Clorofórmica 0.62 Verde T. tepezapote hoja Hexánica 0.79 Verde

Nota: Revelador utilizado: Ácido Sulfúrico Concentrado. Fase Móvil: Cloroformo: éter: acetato de etilo (5:1:1). Estándares: Neurolaena lobata Rf 0.82 color verde. Los resultados son comparados por colores estándar.

28

En la Tabla 8 la presencia de valepotriatos fue detectada únicamente para V. prionophylla obteniéndose 5 bandas, 4 de ellas de color azul lo que nos indica la presencia de valtratos y acevaltratos, y una de color café debida a la reacción de halazucromo indicando la presencia de didrovaltratos. El Rf del estándar coincide con el Rf de las muestras con los que se confirma la presencia de valepotriatos.

Tabla 8. Valepotriatos

Especie Fracción No. de Bandas Rf P. edulis Etanólica -- ---- P. edulis Hexánica -- ---- P. edulis Clorofórmica -- ---- P. edulis Acetato etilo -- ---- V. prionophylla raíz Etanólica 5 0.16, 0.36, 0.48, 0.57, 0.74 V. prionophylla raíz Hexánica 5 0.16, 0.36, 0.48, 0.57, 0.74 V. prionophylla raíz Clorofórmica 5 0.16, 0.36, 0.48, 0.57, 0.74 V. prionophylla raíz Acetato de etilo 5 0.16, 0.36, 0.48, 0.57, 0.74 T. tepezapote hoja Etanólica -- ---- T. tepezapote hoja Hexánica -- ---- T. tepezapote hoja Clorofórmica -- ---- T. tepezapote hoja Acetato de etilo -- ---- T. tepezapote flor Etanólica -- ---- T. tepezapote flor Hexánica -- ---- T. tepezapote flor Clorofórmica -- ---- T. tepezapote flor Acetato de etilo -- ---- Isovaltrato Estándar 1 0.74 Fase móvil: tolueno: acetato de etilo (37.5:12.5). Revelador: ácido clorhídrico y ácido acético glacial (8:2). Para los ensayos fitoquímicos de taninos, antraquinonas y alcaloides los resultados fueron negativos en todos los extractos obtenidos de las plantas en estudio. Al evaluar la citotoxicidad con el ensayos de A. salina la concentración letal media se encuentró por encima de 1 mg/mL, por lo que no se considera a ninguno de los extracto como citotóxico en este modelo.

29

III.1.2 VALIDACIÓN FARMACOLÓGICA La validación farmacológica se llevó a cabo mediante la utilización de los extractos elaborados para cada especie. A continuación se presentan los resultados obtenidos en las diferentes pruebas realizadas para observar el efecto sedante e hipnótico.

III.1.2.1 Pasiflora (Passiflora edulis)

III.1.2.1.1 Passiflora edulis, extracto etanólico: El extracto etanólico de P. edulis, no mostró un efecto sedante significativo como se puede observar en las gráficas de las pruebas de tabla agujereada, Rota Rod y Chimenea (Gráficas 1-3), sin embargo si se obtuvo un resultado positivo para el efecto hipnótico como se puede observar en la gráfica de potenciación del sueño siendo la dosis de 200 mg/kg de peso la que presentó una mayor actividad farmacológica (Grafica 4).

Gráfica 1

0

5

10

15

20

25

30

No.

de

aguj

eros

exp

lora

dos

TABLA AGUJEREADA EXTRACTO ALCOHOLICO

CONTROL HALO PLANTA 25 PLANTA 50 PLANTA 100 PLANTA 200

Fuente: Datos experimentales

El extracto etanólico no mostró efecto sedante significativo a ninguna de las dosis utilizadas, aun mostrando una disminución de la curiosidad a las dosis de 50 mg/kg y 200 mg/kg de peso.

30

ROTA RODEXTRACTO ALCOHOLICO

020406080

100120140160180200

30 60 90 120 150 180

Tiempos de medición

Min

. de

equi

librio

(seg

.)

CONTROL HALO PLANTA 25PLANTA 50 PLANTA 100 PLANTA 200

CHIMENEAEXCTRACTO ALCOHOLICO

0

5

10

15

20

25

30

35

30 60 90 120 150 180


Tiem

po d

e sa

lida

(seg

undo

s)


Gráfica 2

Fuente: datos experimentales

La gráfica muestra una disminución del equilibrio en los ratones, con la utilización del extracto etanólico a todas las dosis evaluadas, sin embargo esta disminución no es significativa. Gráfica 3


La gráfica anterior muestra una disminución de la motricidad en los ratones a la dosis de 200 mg/kg de peso, sin embargo esta disminución no es significativa si se compara con el grupo control, (color azul). Esta prueba es negativa para el efecto sedante, mientras el tiempo de salida de la chimenea por los ratones sea mayor a 30 segundos, lo cual no se observó con este extracto.

CHIMENEA EXTRACTO ETANÓLICO

31

0

20

40

60

80

100

120

140Ti

empo

de

Sueñ

o (m

in.)

POTENCIACION DEL SUEÑO EXTRACTO ALCOHOLICO

PENTO HALO-P 25-P 50-P 100-P 200-P

Gráfica 4


La gráfica muestra un aumento en el tiempo de sueño a los ratones administrados con las dosis de 50 y 200 mg/kg de peso. La dosis de 25 mg/kg de peso también presentó un aumento sin embargo éste no es significativo comparado con el grupo control.

III.1.2.1.2 Passiflora edulis, extracto hexánico: El extracto hexánico no mostró efecto en ninguna de las pruebas. Aunque la gráfica para la prueba de Rota Rod muestra que no se pudo determinar exitosamente, este resultado se toma como negativo, porque las dos pruebas restantes realizadas para determinar el efecto sedante, con la utilización de los mismos ratones son negativas, siendo probablemente un problema externo a la prueba lo que alteró los resultados. No se logró observar un efecto hipnótico significativo como se muestra en las Gráfica 5-8.

Gráfica 5

0

5

10

15

20

25

30

No.

de

aguj

eros

exp

lora

dos

TABLA AGUJEREADA EXTRACTO HEXANICO



La gráfica muestra que el extracto hexánico no presentó disminución de la curiosidad a ninguna dosis.

32

ROTA RODEXTRACTO HEXANICO

020406080

100120140160180200

30 60 90 120 150 180


Min

. de

equi

librio

(seg

.)


CHIMENEAEXCTRACTO HEXANICO

0

5

10

15

20

25

30

35

30 60 90 120 150 180


Tiem

po d

e sa

lida

(seg

undo

s)


Gráfica 6


La gráfica muestra que no se pudo determinar un efecto sedante por la pérdida del equilibrio ya que todos los grupos incluyendo al grupo control, mostraron un comportamiento no esperado, perdiendo el equilibrio antes de llegar a los 3 min y el control positivo muestra un aumento en el equilibrio probablemente por una disminución del efecto del fármaco. Sin embargo las otras pruebas complementarias para observar el efecto sedante son negativas por lo que este efecto no influye sobre los resultados finales descritos para el extracto hexánico.

Gráfica 7


La gráfica muestra que no existe una perdida significativa de la motricidad con el extracto hexánico.

33

0

20

40

60

80

100

Tiem

po d

e Su

eño

(min

.)

POTENCIACION DEL SUEÑO EXTRACTO HEXANICO


Gráfica 8 Fuente: datos experimentales

La gráfica no muestra efecto potenciador del sueño a ninguna dosis utilizada para el extracto hexánico.

III.1.2.1.3 Passiflora edulis, extracto clorofórmico: El extracto clorofórmico no presentó actividad sedante positiva como se puede observar en las Gráficas 9-11. Sin embargo si se observó un efecto hipnótico experimental positivo, ya que potenció el sueño a todas las dosis pero es solamente significativo a las dosis de 25 mg/kg y 50 mg/kg de peso. (Gráfica 12).

Gráfica 9

0

5

10

15

20

25

No.

de

aguj

eros

ex

plor

ados

TABLA AGUJEREADA EXTRACTO CLOROFORMICO



La gráfica muestra que el extracto clorofórmico no presentó disminución de la curiosidad a ninguna dosis utilizada.

34

ROTA RODEXTRACTO CLOROFORMICO

020406080

100120140160180200

30 60 90 120 150 180


Min

. de

equi

librio

(seg

.)


CHIMENEAEXCTRACTO CLOROFORMICO

0

5

10

15

20

25

30

35

30 60 90 120 150 180


Tiem

po d

e sa

lida

(seg

undo

s)


Gráfica 10


La gráfica muestra que no existe una pérdida significativa del equilibrio con la utilización extracto clorofórmico, a ninguna dosis evaluada.


La gráfica muestra que no existe una perdida significativa de la motricidad con la utilización extracto clorofórmico, a ninguna dosis evaluada.

CHIMENEA EXTRACTO CLOROFORMICO

35

Gráfica 12

0

20

40

60

80

100

Tiem

po d

e Su

eño

(min

.)

POTENCIACION DEL SUEÑO EXTRACTO CLOROFORMICO


La gráfica muestra que el extracto clorofórmico posee un efecto potenciador del sueño a todas las dosis, sin embargo solamente es significativo los presentados para las dosis de 25 mg/kg y 50 mg/kg de peso.

III.1.2.1.4 Passiflora edulis, extracto de acetato de etilo: El extracto de acetato de etilo, no mostró efecto sedante-hipnótico experimental como se puede observar en las Gráficas 13-16.

Gráfica 13

0

5

10

15

20

25

No.

de

aguj

eros

exp

lora

dos

TABLA AGUJEREADA EXTRACTO ACETATO ETILO



La gráfica muestra que el extracto de acetato de etilo no presentó disminución de la curiosidad significativamente a ninguna dosis utilizada.

36

ROTA RODEXTRACTO ACETATO ETILO

020406080

100120140160180200

30 60 90 120 150 180


Min

. de

equi

librio

(seg

.)


CHIMENEAEXCTRACTO ACETATO ETILO

0

5

10

15

20

25

30

35

30 60 90 120 150 180


Tiem

po d

e sa

lida

(seg

undo

s)


Gráfica 14


La gráfica muestra que no existe una perdida significativa del equilibrio con la utilización del extracto de acetato de etilo, a ninguna dosis evaluada.

Gráfica 15


La gráfica muestra que no existe una perdida significativa de la motricidad con la utilización del extracto de acetato de etilo, a ninguna dosis evaluada.

37

0102030405060708090

Tiem

po d

e Su

eño

(min

.)

POTENCIACION DEL SUEÑO EXTRACTO ACETATO ETILO


Gráfica 16


La gráfica no muestra efecto potenciador del sueño a ninguna dosis utilizada para el extracto de acetato de etilo.

38


020406080

100120140160180200

30 60 90 120 150 180


Min

. de

equi

librio

(seg

.)


III.1.2.2 Valeriana (Valeriana prionophylla): De los resultados obtenidos en las diferentes pruebas realizadas para observar el efecto sedante e hipnótico con los extractos etanólico, hexánico, clorofórmico y acetato de etilo, ninguno presentó actividad como se puede observar en las Graficas 17-32.

III.1.2.2.1 Valeriana prionophylla, extracto etanólico:

Gráfica 17

0

5

10

15

20

25

30

No.

de

aguj

eros

exp

lora

dos




La gráfica muestra que el extracto etanólico, no presentó disminución de la curiosidad significativamente a ninguna dosis utilizada.

Gráfica 18


La gráfica muestra que no existe una pérdida significativa del equilibrio con la utilización de extracto etanólico, a ninguna dosis evaluada.

39


0

5

10

15

20

25

30

35

30 60 90 120 150 180


Tiem

po d

e sa

lida

(seg

undo

s)


0

20

40

60

80

100

120

Tiem

po d

e Su

eño

(min

.)



Gráfica 19


La gráfica muestra que no existe una pérdida significativa de la motricidad con la utilización del extracto de acetato de etilo, a las dosis de 25 mg/kg de peso hasta 100 mg/kg de peso, sin embargo a la dosis de 200 mg/kg se observa una perdida de la motricidad, sin embargo ese mismo grupo no perdió el equilibrio en la prueba de Rota Rod, ni la curiosidad en la tabla agujereada, por lo que probablemente este resultado se deba a idiosincrasia del grupo utilizado u otro factor externo.

Gráfica 20.


La gráfica no muestra efecto significativo potenciador del sueño a ninguna dosis utilizada para el extracto etanólico, aun observando un aumento en el tiempo de sueño en el grupo administrado con la dosis de 25 mg/kg de peso.

40


020406080

100120140160180200

30 60 90 120 150 180


Min

. de

equi

librio

(seg

.)


III.1.2.2.2 Valeriana prionophylla, extracto hexánico:

Gráfica 21

0

5

10

15

20

25

No.

de

aguj

eros

exp

lora

dos




La gráfica muestra que el extracto hexánico, no presentó disminución de la curiosidad significativamente a ninguna dosis utilizada.

Gráfica 22.


La gráfica muestra que no existe una pérdida significativa del equilibrio con la utilización del extracto hexánico, a ninguna dosis evaluada.

41


0

5

10

15

20

25

30

35

30 60 90 120 150 180


Tiem

po d

e sa

lida

(seg

undo

s)


020406080

100120140160

Tiem

po d

e Su

eño

(min

.)




La gráfica muestra que no existe una pérdida significativa de la motricidad con la utilización del extracto hexánico, a ninguna dosis evaluada.

Gráfica 24.



42


020406080

100120140160180200

30 60 90 120 150 180


Min

. de

equi

librio

(seg

.)


III.1.2.2.3 Valeriana prionophylla, extracto clorofórmico:

Gráfica 25

0

5

10

15

20

25

No.

de

aguj

eros

exp

lora

dos

TABLA AGUJEREADA EXTRACTO CLORORFORMICO



La gráfica muestra que el extracto clorofórmico, no presentó disminución de la curiosidad significativamente a ninguna dosis utilizada.

Gráfica 26


La gráfica muestra que no existe una perdida significativa del equilibrio con la utilización del extracto clorofórmico, a ninguna dosis evaluada.

43

CHIMENEAEXCTRACTO CLOROFORMICO

0

5

10

15

20

25

30

35

30 60 90 120 150 180


Tiem

po d

e sa

lida

(seg

undo

s)


0

20

40

60

80

100

Tiem

po d

e Su

eño

(min

.)



Gráfica 27


La gráfica muestra que no existe una pérdida significativa de la motricidad con la utilización del extracto clorofórmico, a ninguna dosis evaluada.

Gráfica 28


La gráfica no muestra efecto significativo potenciador del sueño a ninguna dosis utilizada para el extracto clorofórmico, aun observando un aumento en el tiempo de sueño en los grupos administrados con las dosis de 25 mg/kg y 50 mg/kg de peso.

44


020406080

100120140160180200

30 60 90 120 150 180


Min

. de

equi

librio

(seg

.)


III.1.2.2.4 Valeriana prionophylla, extracto de acetato de etilo:

Gráfica 29

0

5

10

15

20

25

No.

de

aguj

eros

exp

lora

dos




La gráfica muestra que el extracto de acetato de etilo, no presentó disminución de la curiosidad significativamente a ninguna dosis utilizada.



45


0

5

10

15

20

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30

35

30 60 90 120 150 180


Tiem

po d

e sa

lida

(seg

undo

s)


0

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40

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100

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140

Tiem

po d

e Su

eño

(min

.)



Gráfica 31




La gráfica no muestra efecto potenciador del sueño a ninguna dosis utilizada para el extracto de acetato de etilo.

46


020406080

100120140160180200

30 60 90 120 150 180


Min

. de

equi

librio

(seg

.)


III.1.2.3 Tilo (Ternstroemia tepezapote) flor: De los resultados obtenidos en las diferentes pruebas realizadas para observar el efecto sedante e hipnótico con los extractos etanólico, hexánico, clorofórmico y acetato de etilo, ninguno presentó actividad como se puede observar en las Graficas 33-48.

III.1.2.3.1 Ternstroemia tepezapote flor, extracto etanólico:

Gráfica 33

0

5

10

15

20

25

No.

de

aguj

eros

exp

lora

dos


CONTROL HALO PLANTA 25 PLANTA 50PLANTA 100 PLANTA 200


La gráfica muestra que el extracto etanólico, no presentó disminución de la curiosidad significativamente a ninguna dosis utilizada.


La gráfica muestra que no existe una perdida significativa del equilibrio con la utilización del extracto etanólico, a ninguna dosis evaluada.

ROTA ROD EXTRACTO ETANÓLICO

47


0

5

10

15

20

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35

30 60 90 120 150 180


Tiem

po d

e sa

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(seg

undo

s)


020406080

100120140160

Tiem

po d

e Su

eño

(min

.)




La gráfica muestra que no existe una pérdida significativa de la motricidad con la utilización del extracto etanólico, a ninguna dosis evaluada.


La gráfica no muestra efecto significativo potenciador del sueño a ninguna dosis utilizada para el extracto etanólico, aun observando un aumento en el tiempo de sueño en los grupos administrados con las dosis de 100 mg/kg y 200 mg/kg de peso.


POTENCIACION DEL SUEÑO EXTRACTO ETANÓLICO

48


020406080

100120140160180200

30 60 90 120 150 180


Min

. de

equi

librio

(seg

.)


III.1.2.3.2 Ternstroemia tepezapote flor, extracto hexánico:

Gráfica 37

0

5

10

15

20

25

30

No.

de

aguj

eros

exp

lora

dos




La gráfica muestra que el extracto hexánico, no presentó disminución de la curiosidad significativamente a ninguna dosis utilizada.


La gráfica muestra que no existe una pérdida significativa del equilibrio con la utilización del extracto hexánico, a ninguna dosis evaluada.

49


0

5

10

15

20

25

30

35

30 60 90 120 150 180


Tiem

po d

e sa

lida

(seg

undo

s)


020406080

100120140160

Tiem

po d

e Su

eño

(min

.)







CHIMENEA EXTRACTO HEXANICO

50


020406080

100120140160180200

30 60 90 120 150 180


Min

. de

equi

librio

(seg

.)


III.1.2.3.3 Ternstroemia tepezapote flor, extracto clorofórmico:

Gráfica 41

0

5

10

15

20

25

No.

de

aguj

eros

exp

lora

dos




La gráfica muestra que el extracto clorofórmico, no presentó disminución de la curiosidad significativamente a ninguna dosis utilizada.


La gráfica muestra que no existe una pérdida significativa del equilibrio con la utilización del extracto clorofórmico, a ninguna dosis evaluada.

51

020406080

100120140160

Tiem

po d

e Su

eño

(min

.)




0

5

10

15

20

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30

35

30 60 90 120 150 180


Tiem

po d

e sa

lida

(seg

undo

s)


Gráfica 43


La gráfica muestra que no existe una pérdida significativa de la motricidad con la utilización del extracto clorofórmico, a ninguna dosis evaluada.

Gráfica 44


La gráfica no muestra efecto potenciador del sueño a ninguna dosis utilizada para el extracto clorofórmico.


52

0

5

10

15

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25

30

No.

de

aguj

eros

exp

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020406080

100120140160180200

30 60 90 120 150 180


Min

. de

equi

librio

(seg

.)


III.1.2.3.4 Ternstroemia tepezapote flor, extracto de acetato de etilo:





53


0

5

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15

20

25

30

35

30 60 90 120 150 180


Tiem

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e sa

lida

(seg

undo

s)


020406080

100120140160

Tiem

po d

e Su

eño

(min

.)






La gráfica no muestra efecto significativo potenciador del sueño a ninguna dosis utilizada para el extracto clorofórmico, aun observando un aumento en el tiempo de sueño en los grupos administrados con las dosis de 25 mg/kg y 50 mg/kg de peso.

CHIMENEA EXTRACTO ACETATO ETILO

54

0

5

10

15

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No.

de

aguj

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020406080

100120140160180200

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Min

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equi

librio

(seg

.)


III.1.2.4 Ternstroemia tepezapote hoja: De los resultados obtenidos en las diferentes pruebas realizadas para observar el efecto sedante e hipnótico con los extractos etanólico, hexánico, clorofórmico y acetato de etilo, ninguno presentó actividad como se puede observar en las Graficas 49-64.

III.1.2.4.1 Ternstroemia tepezapote hoja, extracto etanólico:


La gráfica muestra que el extracto de etanólico, no presentó disminución de la curiosidad significativamente a ninguna dosis utilizada.


La gráfica muestra que no existe una pérdida significativa del equilibrio con la utilización del extracto etanólico, a ninguna dosis evaluada.

55


0

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30 60 90 120 150 180


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0

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Tiem

po d

e Su

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(min

.)




La gráfica muestra que no existe una perdida significativa de la motricidad con la utilización del extracto de etanólico, a ninguna dosis evaluada.


La gráfica no muestra efecto potenciador del sueño a ninguna dosis utilizada para el extracto etanólico.


56

0

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o. d

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100120140160180200

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Min

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equi

librio

(seg

.)


III.1.2.4.2 Ternstroemia tepezapote hoja, extracto hexánico:

Gráfica 53


La gráfica muestra que el extracto de hexánico, no presentó disminución de la curiosidad significativamente a ninguna dosis utilizada.


La gráfica muestra que no existe una pérdida significativa del equilibrio con la utilización del extracto de hexánico, a ninguna dosis evaluada.

57


0

5

10

15

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020406080

100120140160180

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.)





Gráfica 56




58

0

5

10

15

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No.

de

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eros

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020406080

100120140160180200

30 60 90 120 150 180


Min

. de

equi

librio

(seg

.)


III.1.2.4.3 Ternstroemia tepezapte hoja, extracto clorofórmico:


La gráfica muestra que el extracto de clorofórmico, no presentó disminución de la curiosidad significativamente a ninguna dosis utilizada.

Gráfica 58.


La gráfica muestra que no existe una pérdida significativa del equilibrio con la utilización del extracto de clorofórmico, a ninguna dosis evaluada.

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0

20

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(min

.)



CHIMENEAEXTRACTO CLOROFORMO

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Tiem

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(seg

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s)


Gráfica 59


La gráfica muestra que no existe una pérdida significativa de la motricidad con la utilización del extracto clorofómico, a ninguna dosis evaluada.


La gráfica no muestra efecto potenciador del sueño a ninguna dosis utilizada para el extracto clorofórmico.

60

0

5

10

15

20

25

No.

de

aguj

eros

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lora

dos




020406080

100120140160180200

30 60 90 120 150 180


Min

. de

equi

librio

(seg

.)


III.4.4 Ternstroemia tepezapote hoja, extracto de acetato de etilo:

Gráfica 61. Fuente: datos experimentales


Gráfica 62


La gráfica muestra que no existe una pérdida significativa del equilibrio con la utilización del extracto de acetato de etilo, a ninguna dosis evaluada.

61


0

5

10

15

20

25

30

35

30 60 90 120 150 180


Tiem

po d

e sa

lida

(seg

undo

s)


0

20

40

60

80

100

120

140

Tiem

po d

e Su

eño

(min

.)



Gráfica 63.


La gráfica muestra que no existe una pérdida significativa de la motricidad con la utilización del extracto de acetato de etilo, a ninguna dosis evaluada.

Gráfica 64


La gráfica no muestra efecto potenciador del sueño a ninguna dosis utilizada para el extracto de acetato de etilo

CHIMENEA EXTRACTO ACETATO ETILO

62

III.2. DISCUSIÓN DE RESULTADOS En el proyecto de investigación, se trabajaron tres especies de plantas medicinales que dieron resultados sedantes- hipnóticos experimentales positivos en la primera fase de estudio, la cual consiste en la utilización de infusiones al 10% de las especies, lo que permite conocer una primera respuesta experimental que nos da una idea del posible efecto farmacológico, logrando ya en esta fase de estudio, el fraccionar extractos mediante el uso de solventes, separando por polaridad, entonces permite dilucidar las posibles sustancias terapéuticas (alcohol, cloroformo, hexano y acetato de etilo). Las especies estudiadas son P. edulis, V. prionophylla, T. tepezapote, (para esta última utilizando extractos de la hoja y de su flor), por lo que para cada especie se analizaron los resultados de cada extracto tomando en cuenta las pruebas experimentales de sedantes - hipnóticos realizadas.

Las pruebas para observar efecto sedante, fueron negativas para todas las especies estudiadas, en lo que respecta la actividad sedante, con todos los extractos utilizados, a dosis de 25, 50, 100 y 200 mg/kg de peso.

Sin embargo con la prueba de potenciación del sueño si se logró observar un efecto hipnótico positivo solamente en la especie P. edulis Sims, la cual dio un efecto hipnótico experimental positivo al administrar los extractos etanólico y clorofórmico, observándose un marcado aumento de sueño en los ratones administrados con los extractos ha estudiar, en comparación con el grupo control negativo (agua) (Gráficas 1-4).

El extracto etanólico de P. edulis, mostró un efecto positivo al utilizar las dosis de 50 y 100 mg/kg de peso, y uno negativo a las dosis de 25 y 200 mg/kg al igual que con el extracto clorofórmico a las dosis de 25 y 50 mg/kg de peso, demostrándose un fenómeno que muchas veces se observa en estos resultados experimentales y es que este efecto farmacológico no se aumenta proporcionalmente con la dosis sino que al contrario de lo que podría esperarse se puede observar una marcada disminución, lo cual puede deberse a una posible saturación de receptores a nivel de mecanismo de acción del fármaco, mediante una retroalimentación negativa. Sin embargo, esto no se puede demostrar en esta fase de estudio, ya que solamente se podría confirmar esta teoría, al estudiar mas a fondo el mecanismo de acción de estas especies para lo cual se tendrían que conocer las posibles sustancias con efecto farmacológico conociendo su comportamiento especifico dentro del cuerpo de los animales de experimentación y posteriormente en seres humanos.

Para ambos extractos se realizaron estudios de toxicidad aguda, por el efecto farmacológico positivo encontrado, sin embargo no se observó ningún efecto tóxico en los ratones con dosis desde 300 hasta 500 mg/kg de peso.

Como se observa en los resultados, a pesar de que los extractos etanólico y clorofórmico de P. edulis dan positiva la prueba de potenciación del sueño, no se logró identificar ningún metabolito secundario en el análisis fitoquímico realizado, debido a que como se reporta en la literatura, estos se encuentran en bajas concentraciones (ESCOP 2003), tal es el caso de los alcaloides que ha sido detectados únicamente con procedimiento más sensibles y cuantitativos como el HPLC (Cáceres et al., 2006). Por lo tanto se puede concluir que la especie P. edulis es equiparable con la especie oficinal (P. incarnata) únicamente respecto a su actividad terapéutica, mientras que con la composición fitoquímica no se puede concluir ya que el

63

método de cromatografía en capa fina no detecta las concentraciones muy bajas de los metabolitos presentes en esta especie.

Es probable que el efecto farmacológico positivo observado en algunas de estas especies en estudios de fase I (planta en infusión) puedan deberse a un sinergismo entre sustancias con polaridades diferentes, por lo que al separarse de un extracto estas no demuestren un efecto positivo significativo estadísticamente, y sí al utilizarse solamente como una infusión, ya que en varios casos, como se puede observar en las gráficas, si se ve un aumento en el tiempo de sueño, sin embargo no es significativo estadísticamente. Esto podría explicar la actividad demostrada en la infusión (Valladares et al., 2001) y el extracto etanólico de V. prionophylla tanto en animales experimentales (Roca, 2003), como en ensayos clínicos en humanos (Cruz, 2005b), pero no en las fracciones. En el caso de T. tepezapote no se ha encontrado hasta la fecha ninguna prueba farmacológica que justifique su uso popular.

En cuanto a la composición fitoquímica de V. prionophylla se puede decir que si es equiparable con la especie V. officinalis ya que se observó la presencia de aceites esenciales, sesquiterpenlactonas y principios amargos, también se observaron valepotriatos aunque no se puede identificar específicamente de cuales se trata. Como ya se discutió anteriormente las pruebas farmacológicas no presentan resultados estadísticamente significativos, pero la literatura también cita que las sustancias responsables son muy inestables, así como que los estudios farmacológicos no han sido consistentes en sus resultados por lo que es necesario tener las condiciones experimentales y las características de los extractos muy bien controladas para obtener resultados confiables y reproducibles, por estas razones la especie no se pueden equiparar farmacológicamente.

Para la especie T. tepezapote se concluye que no es equiparable ni fitoquimica ni farmacológicamente con la especie oficinal (Tilia platyphyllos).

La citotoxicidad evaluada en el modelo de A. salina se encuentra por encima de 1 mg/mL por lo que se considera que las especies estudiadas no presentan citotoxicidad.

64

PARTE IV

IV.1 CONCLUSIONES

• De los resultados obtenidos se confirma la hipótesis para la especie P. edulis presentando una actividad reguladora del SNC, ya que fue la única que obtuvo resultados positivos para el efecto “hipnótico”, con el extracto etanólico a dosis de 50 y 200 mg/kg de peso corporal y con el extracto clorofórmico presenta un efecto significativo a las dosis de 25 y 50 mg/kg de peso corporal, por lo tanto la especie es equiparable con la especie oficinal (P. incarnata).

• Para las otras especies estudiadas no se confirma ninguna actividad sedante-hipnótica.

• De esas dos especies no se confirma la actividad en los extractos crudos, lo que indica que por lo menos para V. prionophylla la estandarización deberá hacerse con el extracto total, ya que es el que ha dado resultados positivos en estudios anteriores; mientras que para T. tepezapote no se encontró actividad.

• Los extractos con mayor rendimiento son los extractos etanólicos siendo 5.85% para P. edulis, 12.22% para V. prionophylla, 7.64% para el extracto de flor de T. tepezapote y 12.19% para el extracto de hojas de T. tepezapote, debido a que este extracto arrastra la mayoría de componentes presentes en la planta.

• En la especie P. edulis a través de cromatografía en capa fina se identificaron sesquiterpenlactonas en los extractos etanólico, de acetato de etilo y clorofórmico; principios amargos en los extractos de acetato de etilo y cloroformo y aceites esenciales en los extractos acetato de etilo, clorofórmico y hexánico.

• Los extractos de P. edulis no se puede equiparar fitoquímicamente con la especie oficinal (P. incarnata) debido a que los componentes responsables de su actividad farmacológica están en bajas concentraciones por lo que los métodos de análisis utilizados en el estudio no los logran detectar.

• Los extractos de V. prionophylla son equiparables con los de la especie oficinal en lo que se refiere a la parte fitoquímica debido a que se encuentran la misma clase de componentes, aunque no se puede dilucidar de que compuestos químicos específicos se trata.

• En la especie V. prionophylla a través de cromatografía en capa fina se identificaron metabolitos secundarios como, valepotriatos, sesquiterpenlactonas, principios amargos y aceites esenciales en los cuatro extractos analizados, mientras que saponinas se encontraron únicamente en los extractos acetato de etilo y cloroformo y cardenólidos y bufadienólidos en los extractos clorfórmico y hexánico.

• Los extractos de T. tepezapote no son equiparables con los de la especie oficinal debido a que no se encontró ninguna equivalencia entre los componentes del extracto experimental con los del extracto oficinal, además no presenta actividad terapéutica a nivel del SNC.

65

• En la flor de la especie T. tepezapote se identificaron sesquiterpenlactonas, cardenólidos y bufadienólidos en el extracto acetato de etilo; principios amargos en el extracto acetato de etilo, clorofórmico y hexánico; flavonoides en el extracto acetato de etilo y clorofórmico; y, saponinas en los extractos etanólicos y clorofórmico; en la hoja de la misma especie se encontraron sesquiterpenlactonas en los extractos clorofórmico y hexánico; cardenólidos, bufadienólidos y principios amargos en el extracto clorofórmico; y, aceites esenciales únicamente en el extracto hexánico.

• Los datos del proyecto permiten el acceso a tratamientos para afecciones nerviosas únicamente para P. edulis ya que podrían ser aprovechados en forma directa en la atención primaria de salud, o bien en la siembra comercial y producción industrial de fitofármacos naturales para aplicarlos a la terapia del sueño.

66

IV.2 RECOMENDACIONES

• De los resultados obtenidos se recomienda hacer una tercera fase para obtener las fracciones de principios activos de la planta P. edulis, a las dosis indicadas para el estudio de la potenciación del sueño, para determinar cuál o cuales son los principios activos responsables de dicha acción hipnótica, con los extractos etanólico y clorofórmico.

• En el caso de V. prionophylla deberán continuarse los estudios ya que en la respuesta estadística no dio resultado significativo pero muy cercano a una respuesta positiva, mientras que en el caso de T. tepezapote los extractos deberán estudiarse en otros modelos experimentales para saber si realmente presenta la actividad sobre el SNC atribuida popularmente.

• Cuantificar por métodos más sensibles y cuantitativos (HPLC) los alcaloides y flavonoides que no se detectaron en esa oportunidad en los extractos de P. edulis para verificar su equiparabilidad fitoquimica.

• Para poder equiparar mejor la especie V. prionophylla con la especie oficinal se recomienda realizar otras técnicas que evalúen la actividad farmacológica a nivel de SNC in vitro e in vivo ya que en este estudio se demostró su equiparabilidad fitoquímica.

• Dada la biodiversidad del país se recomienda repetir este tipo de investigación usando cultivos provenientes de otras zonas geográficas, que pudieran tener composición química o actividad farmacológica más parecida a las de las de las especies oficinales.

• Durante la ejecución del proyecto se encontraron algunas deficiencias en la ejecución financiera sin embargo dada la colaboración del personal y las adecuaciones de las regulaciones nos permitieron ejecutarlo satisfactoriamente, situación que ha mejorado en los últimos años.

67

IV. 3. REFERENCIAS Abreu, F. J., (2000). Plantas Medicinais. Fortaleza: Impresa Universitaria, p. 251.

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70

IV.4 ANEXOS 4.4 GRAFICAS DE TUCKEY 4.4.1 Passiflora edulis 4.4.1.1 Extracto Etanólico 4.4.1.1.1 Tabla agujereada dosis 25 mg/kg y 50 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0001). Las dosis 25 y 50 del extracto no dan diferencia significativa. Gráfica

0

10

20

30

40 a25-50

1 2 3 4 4.4.1.1.2 Tabla agujereada dosis 100 mg/kg y 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.0001). Las dosis 100 y 200 del extracto no dan diferencia significativa.

71

Gráfica:

0

10

20

30

40 a100-200

1 2 3 4 4.4.1.1.3. Rota Rod dosis 25 mg/kg y 50 mg/kg Tanto el control positivo como la dosis 50, dan diferencia significativa con el control negativo (p<0.05. La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10000

20000

30000 a25-50

1 2 3 4 4.4.1.1.4 Rota Rod dosis 100 mg/kg y 200 mg/kg Tanto el control positivo como la dosis 100, dan diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). La dosis 200 del extracto no da diferencia significativa.

72

Gráfica:

0

10000

20000

30000 a100-200

1 2 3 4 4.4.1.1.4 Chimenea dosis 25 mg/kg y 50 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). Las dosis 25 y 50 del extracto no dan diferencia significativa. Gráfica:

1000

2000

3000

4000

5000 a25-50

1 2 3 4 4.4.1.1.5 Chimenea dosis 100 mg/kg y 200 mg/kg Solamente la dosis 100 da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). El control positivo y la dosis 200 del extracto no da diferencia significativa. Dado que el control positivo no dio la respuesta esperada, el ensayo debe repetirse.

73

Gráfica:

0

2000

4000

6000 a100-200

1 2 3 4 4.4.1.1.6 Potenciacion del sueño dosis 25 mg/kg, 50 mg/kg, 100 mg/kg y 200 mg/kg Tanto el control positivo como las dosis 50 y 200, dan diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). Las dosis 25 y 100 del extracto no dan diferencia significativa. Gráfica:

0

50

100

150 a25-200

1 2 3 4 5 6 4.4.1.2 Extracto Hexánico 4.4.1.2.1 Tabla agujereada dosis 25 mg/kg y 50 mg/kg

74

Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.0001). Las dosis 25 y 50 del extracto no dan diferencia significativa. Gráfica:

0

10

20

30

40 h25-50

1 2 3 4 4.4.1.2.2 Tabla agujereada dosis 100 mg/kg y 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.0001). Las dosis 100 y 200 del extracto no dan diferencia significativa. Gráfica:

0

10

20

30

40 h100-200

1 2 3 4

75

4.4.1.2.3 Rota Rod dosis 25 mg/kg y 50 mg/kg No existe diferencia significativa entre los tratamientos (p=0.1419) Gráfica:

0

10000

20000

30000 h25-50

1 2 3 4 4.4.1.2.4 Rota Rod dosis 100 mg/kg y 200 mg/kg Tanto el control positivo como la dosis 100, dan diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). La dosis 200 del extracto no da diferencia significativa.

76

Gráfica:

0

10000

20000

30000 h100-200

1 2 3 4 4.4.1.2.5 Chimenea dosis 25 mg/kg y 50 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). Las dosis 25 y 50 del extracto no dan diferencia significativa. Gráfica:

0

2000

4000

6000 h25-50

1 2 3 4

77

4.4.1.2.6 Chimenea dosis 100 mg/kg y 200 mg/kg No existe diferencia significativa entre los tratamientos (p=0.2604) Gráfica:

0

2000

4000

h100-200

1 2 3 4

4.4.1.2.7 Potenciación del Sueño dosis 25 mg/kg, 50 mg/kg, 100 mg/kg y 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). Las cuatro dosis del extracto no dan diferencia significativa.

78

Gráfica:

0

50

100

150 H25-200

1 2 3 4 5 6 4.4.1.3. Extracto Clorofórmico 4.4.1.3.1 Tabla agujereada dosis 25 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.0001). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10

20

30

c25

1 2 3

79

4.4.1.3.2. Tabla agujereada dosis 50 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.0001). La dosis 50 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10

20

30

40 c50

1 2 3 4.4.1.3.3 Tabla agujereada dosis 100 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.0001). La dosis 100 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10

20

30

40 c100

1 2 3

80

4.4.1.3.4 Tabla agujereada dosis 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.0001). La dosis 200 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10

20

30 c200

1 2 3 4.4.1.3.5 Rota Rod dosis 25 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10000

20000

30000 c25

1 2 3

81

4.4.1.3.6 Rota Rod dosis 50 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). La dosis 50 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10000

20000

30000 c50


0

10000

20000

30000 c100

1 2 3

82


0

10000

20000

30000 c200

1 2 3 4.4.1.3.9 Chimenea dosis 25 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

1000

2000

3000

4000

5000 c25

1 2 3

83

4.4.1.3.10 Chimenea dosis 50 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). La dosis 50 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

1000

2000

3000

4000

5000 c50

1 2 3 4.4.1.3.11 Chimenea dosis 100 mg/kg Solamente la dosis 100 da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). El control positivo no da diferencia significativa. Gráfica:

0

2000

4000

6000 c100

1 2 3

84


0

2000

4000

6000 c200

1 2 3 4.4.1.3.13 Potenciación del sueño dosis 25 mg/kg y 50 mg/kg Tanto las dosis 25 y 50, como el control positivo dan diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). Gráfica:

0

50

100

150 c25-50

1 2 3 4

85

4.4.1.3.14 Potenciación del sueño dosis 100 mg/kg y 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). Las dosis 100 y 200 del extracto no dan diferencia significativa. Gráfica:

0

50

100

150

200 c100-200

1 2 3 4 4.4.1.4. Extracto Acetato de etilo 4.4.1.4.1 Tabla agujereada dosis 25 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.0001). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

20

40

60 ae25

1 2 3

86

4.4.1.4.2 Tabla agujereada Dosis 50 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.0001). La dosis 50 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10

20

30

40 ae50

1 2 3 4.4.1.4.3 Tabla agujereada dosis 100 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.0001). La dosis 100 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10

20

30 ae100

1 2 3

87

4.4.1.4.4. Tabla agujereada dosis 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.0001). La dosis 200 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10

20

30 ae200


0

10000

20000

30000 ae25

1 2 3

88


0

10000

20000

30000 ae50


0

10000

20000

30000 ae100

1 2 3

89


0

10000

20000

30000 ae200

1 2 3 4.4.2 Valeriana prionophylla 4.4.2.1 Extracto Etanólico 4.4.2.1.1 Tabla agujereada dosis 25 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0009). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10

20

30

40 a25

1 2 3

90

4.4.2.1.2 Tabla agujereada dosis 50 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0015). La dosis 50 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

20

40

60 a50

1 2 3 4.4.2.1.3 Tabla agujereada dosis 100 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0147). La dosis 100 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10

20

30

40 a100

1 2 3

91

4.4.2.1.4 Tabla agujereada dosis 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0099). Las dosis 200 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10

20

30 a200


0

10000

20000

30000 a25

1 2 3

92

4.4.2.1.6 Rota Rod dosis 50 mg/kg No existe diferencia significativa entre los tratamientos (p=0.2749). Gráfica:

0

100000

200000

300000 a50


0

10000

20000

30000 a100

1 2 3

93

4.4.2.1.8 Rota Rod dosis 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=<0.05). Las dosis 200 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10000

20000

30000 a200


0

2000

4000

6000 a25

1 2 3

94


0

2000

4000

6000 a50

1 2 3 4.4.2.1.11 Chimenea dosis 100 mg/kg No existe diferencia significativa entre los tratamientos (p=0.3647). Gráfica:

0

2000

4000

6000 a100

1 2 3

95


0

2000

4000

6000 a200

1 2 3 4.4.2.1.13 Potenciación del sueño dosis 25 mg/kg, 50 mg/kg, 100 mg/kg y 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). Las cuatro dosis del extracto no dan diferencia significativa. Gráfica:

0

50

100

150 a25-200

1 2 3 4 5 6

96

4.4.2.2 Extracto Hexánico 4.4.2.2.1Tabla agujereada dosis 25 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0284). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10

20

30

h25


0

10

20

30

h50

1 2 3

97


0

10

20

30

40 h100


0

10

20

30

h200

1 2 3

98


0

10000

20000

30000 h25


0

10000

20000

30000 h50

1 2 3

99


0

10000

20000

30000 h100


0

10000

20000

30000 h200

1 2 3

100


0

2000

4000

6000 h25


0

2000

4000

6000 h50

1 2 3

101


0

2000

4000

6000 h100


0

2000

4000

6000 h200

1 2 3

102

4.4.2.2.13 Potenciacion del sueño dosis 25 mg/kg, 50 mg/kg, 100 mg/kg y 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). Las cuatro dosis del extracto no dan diferencia significativa. Gráfica:

0

50

100

150

200 H25-200

1 2 3 4 5 6 4.4.2.3. Extracto Clorofórmico 4.4.2.3.1 Tabla agujereada dosis 25 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0072). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10

20

30 c25

1 2 3

103


0

10

20

30

c50


0

10

20

30

40 c100

1 2 3

104


0

10

20

30 c200


0

10000

20000

30000 c25

1 2 3

105


0

10000

20000

30000 c50


0

10000

20000

30000 c100

1 2 3

106


0

10000

20000

30000 c200


1000

2000

3000

4000

5000 c25

1 2 3

107

4.4.2.3.10 Chimenea dosis 50 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). La dosis 50 del extracto no da diferencia significativa, además que presenta mucha variación (los resultados van desde datos similares al control negativo hasta similares al control positivo). Gráfica:

0

2000

4000

6000 c50


0

2000

4000

6000 c100

1 2 3

108

4.4.2.3.12 Chimenea dosis 200 mg/kg Tanto el control positivo como la dosis 200 no dan diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). La diferencia significativa encontrada en el análisis de varianza, se debe a la inusual respuesta más baja de la dosis 200 del extracto. Gráfica:

0

2000

4000

6000 c200

1 2 3 4.4.2.3. 13 Potenciación del sueño dosis 25 mg/kg, 50 mg/kg, 100 mg/kg y 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). Las cuatro dosis del extracto no dan diferencia significativa. Gráfica:

0

50

100

150 c

1 2 3 4 5 6

109

4.4.2.4. Extracto Acetato de etilo 4.4.2.4.1 Tabla agujereada dosis 25 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0133). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10

20

30 ae25


0

10

20

30 ae50

1 2 3

110


0

10

20

30

40 ae100


0

10

20

30 ae200

1 2 3

111

4.4.2.4. 5 Rota Rod dosis 25 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10000

20000

30000 ae25


0

10000

20000

30000 ae50

1 2 3

112


0

10000

20000

30000 ae100


0

10000

20000

30000 ae200

1 2 3

113


0

2000

4000

6000 ae25

1 2 3 4.4.2.4.10 Chimenea dosis 50 mg/kg No existe diferencia significativa entre los tratamientos (p=0.1403). Gráfica:

0

2000

4000

6000 ae50

1 2 3

114


0

2000

4000

6000 ae100


0

2000

4000

6000 ae200

1 2 3

115

4.4.2.4.13 Potenciación del sueño dosis 25 mg/kg, 50 mg/kg, 100 mg/kg y 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). Las cuatro dosis del extracto no dan diferencia significativa. Gráfica:

0

50

100

150 ae

1 2 3 4 5 6 Debido a que en la mayoría de los casos no se obtuvo una respuesta adecuada, los ensayos deben realizarse de manera similar a los otros ensayos, es decir, en grupos de 3 ó 4 tratamientos. 4.4.3 Ternstroemia tepezapote hoja 4.4.3.1. Extracto Alcoholico 4.4.3.1.1 Tabla agujereada dosis 25 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0010). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa (p=0.2030).

116

Gráfica:

0

10

20

30

40 a25

1 2 3 4.4.3.1.2. Tabla agujereada dosis 50 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0109). La dosis 50 del extracto no da diferencia significativa (p=0.8321). Gráfica:

0

10

20

30

a50

1 2 3

117

4.4.3.1.3. Tabla agujereada dosis 100 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0236). La dosis 100 del extracto no da diferencia significativa (p=0.4366). Gráfica:

0

10

20

30

40 a100

1 2 3 4.4.3.1.4 Tabla agujereada dosis 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0019). Las dosis 200 del extracto no da diferencia significativa (p=0.3581). Gráfica:

0

10

20

30 a200

1 2 3

118


0

10000

20000

30000 a25


0

10000

20000

30000 a50

1 2 3

119


0

10000

20000

30000 a100

1 2 3 4.4.3.1.8 Rota Rod dosis 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=<0.05). Las dosis 200 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10000

20000

30000 a200

1 2 3

120


0

2000

4000

6000 a25


0

2000

4000

6000 a50

1 2 3

121

4.4.3.1.10 Chimenea dosis 100mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). La dosis 100 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

2000

4000

6000 a100


0

2000

4000

6000 a200

1 2 3

122


0

50

100

150

200 a25-200

1 2 3 4 5 6 4.4.3.2. Extracto Hexánico 4.4.3.2.1. Tabla agujereada dosis 25mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0133). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa (p=0.7233). Gráfica:

0

10

20

30

40 h25

1 2 3

123

4.4.3.2.2 Tabla agujereada dosis 50 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0147). La dosis 50 del extracto no da diferencia significativa (p=0.6712). Gráfica:

0

10

20

30

40 h50

1 2 3 4.4.3.2.3 Tabla agujereada dosis 100 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0027). La dosis 100 del extracto no da diferencia significativa (p=0.4795). Gráfica:

0

10

20

30

40 h100

1 2 3

124


0

10

20

30

40 h200


0

10000

20000

30000 h25

1 2 3

125


0

10000

20000

30000 h50


0

10000

20000

30000 h100

1 2 3

126


0

10000

20000

30000 h200


0

2000

4000

6000 h25

1 2 3

127


0

2000

4000

6000 h50


1000

2000

3000

4000

5000 h100

1 2 3

128


0

2000

4000

6000 h200


0

50

100

150

200 h50-200

1 2 3 4 5 6

129

4.4.3.3. Extracto Clorofórmico 4.4.3.3.1.Tabla agujereada dosis 25 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0027). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa p=0.4795). Gráfica:

0

10

20

30

c25


0

10

20

30

40 c50

1 2 3

130


0

10

20

30

40 c100


0

10

20

30 c200

1 2 3

131


0

10000

20000

30000 c25


0

10000

20000

30000 c50

1 2 3

132


0

10000

20000

30000 c100


0

10000

20000

30000 c200

1 2 3

133


0

2000

4000

6000 c25


1000

2000

3000

4000

5000 c50

1 2 3

134


1000

2000

3000

4000

5000 c100


0

2000

4000

6000 c200

1 2 3

135


0

50

100

150 c25-200

1 2 3 4 5 6 4.4.3.4. Extracto Acetato de etilo 4.4.3.4.1 Tabla agujereada dosis 25 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0065). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa (p=0.8876). Gráfica:

0

10

20

30

40 ae25

1 2 3

136


0

10

20

30

40 ae50


0

10

20

30 ae100

1 2 3

137


0

10

20

30 ae200


0

10000

20000

30000 ae25

1 2 3

138


0

10000

20000

30000 ae50


0

10000

20000

30000 ae100

1 2 3

139


0

10000

20000

30000 ae200


1000

2000

3000

4000

5000 ae25

1 2 3

140


1000

2000

3000

4000

5000 ae50


1000

2000

3000

4000

5000 ae100

1 2 3

141


0

2000

4000

6000 ae200


0

50

100

150

ae25-200

1 2 3 4 5 6

142

4.4.4. Ternstroemia tepezapote flor 4.4.4.1 Extracto etanólico 4.4.4.1.1 Tabla agujereada dosis 25 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0133). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa (p=0.772). Gráfica:

0

10

20

30

40 a25


0

10

20

30

a50

1 2 3

143


0

10

20

30

40 a100

1 2 3 4.4.4.1.4 Tabla agujereada dosis 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0033). Las dosis 200 del extracto no da diferencia significativa (p=0.4366). Gráfica:

0

20

40

60 a200

1 2 3

144


0

10000

20000

30000 a25


0

10000

20000

30000 a50

1 2 3

145

4.4.4.7 Rota Rod dosis 100 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). La dosis 100 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10000

20000

30000 a100

1 2 3 4.4.4.8 Rota Rod dosis 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=<0.05). Las dosis 200 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

10000

20000

30000 a200

1 2 3

146


0

2000

4000

6000 a25


0

2000

4000

6000 a50

1 2 3

147


0

2000

4000

6000 a100


0

2000

4000

6000 a200

1 2 3

148

4.4.4.1. 13 Potenciación del sueño dosis 25 mg/kg, 50 mg/kg, 100 mg/kg y 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). Las cuatro dosis del extracto no dan diferencia significativa. Gráfica:

50

100

150

200 a25-200

1 2 3 4 5 6 4.4.4.2. Extracto Hexánico 4.4.4.2.1 Tabla agujereada dosis 25 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0058). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa (p=0.8321). Gráfica:

0

10

20

30

40 h25

1 2 3

149

4.4.4.2.2. Tabla agujereada dosis 50 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0058). La dosis 50 del extracto no da diferencia significativa (p=0.8321). Gráfica:

0

20

40

h50


0

10

20

30

40 h100

1 2 3

150


0

10

20

30 h200


0

10000

20000

30000 h25

1 2 3

151


0

10000

20000

30000 h50


0

10000

20000

30000 h100

1 2 3

152


0

10000

20000

30000 h200


0

2000

4000

6000 h25

1 2 3

153


0

2000

4000

6000 h50


0

2000

4000

6000 h100

1 2 3

154

4.4.4.2.12 Chimenea Rosis 200 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p<0.05). La dosis 200 del extracto no da diferencia significativa. Gráfica:

0

2000

4000

6000 h200


50

100

150

200 h50-200

1 2 3 4 5 6

155

4.4.4.3. Extracto Clorofórmico 4.4.4.3.1. Tabla agujereada dosis 25 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0080). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa p=1.0000). Gráfica:

0

10

20

30 c25


0

20

40

60 c50

1 2 3

156


0

5

10

15

20

c100


0

10

20

30

40 c200

1 2 3

157


0

10000

20000

30000 c25


0

10000

20000

30000 c50

1 2 3

158


0

10000

20000

30000 c100


0

10000

20000

30000 c200

1 2 3

159


1000

2000

3000

4000

5000 c25


0

2000

4000

6000 c50

1 2 3

160


0

2000

4000

6000 c100


0

2000

4000

6000 c200

1 2 3

161

4.4.4.3.13 Potenciación del sueño dosis 25 mg/kg, 50 mg/kg, 100 mg/kg y 200 mg/kg No existe diferencia significativa entre los tratamientos (p=0.1073). Gráfica:

0

50

100

150 c25-200

1 2 3 4 5 6 4.4.4.4. Extracto acetato de etilo 4.4.4.4.1 Tabla agujereada dosis 25 mg/kg Solamente el control positivo da diferencia significativa con el control negativo (p=0.0196). La dosis 25 del extracto no da diferencia significativa (p=0.5245). Gráfica:

0

10

20

30 ae25

1 2 3

162


0

10

20

30

40

ae50


0

10

20

30

ae100

1 2 3

163


0

10

20

30

40 ae200


0

10000

20000

30000 ae25

1 2 3

164


0

10000

20000

30000 ae50


0

10000

20000

30000 ae100

1 2 3

165


0

10000

20000

30000 ae200


0

2000

4000

6000 ae25

1 2 3

166


0

2000

4000

6000 ae50


0

2000

4000

6000 ae100

1 2 3

167


0

2000

4000

6000 ae200


0

50

100

150

200 ae25-200

1 2 3 4 5 6

168

FOTOGRAFÍAS DE LAS PLANTAS MEDICINALES UTILIZADAS Pasiflora (Pasassiflora edulis) (flor y fruto) procedente de Samayac, Suchitepequez

169

Tilo (Terstroemia tepezapote) (botón floral, flores frescas, flores secas) procedentes de Jalapa

170

Valeriana (Valeriana prionophylla) en flor y rizomas secos provenientes de Nebaj, El Quiché

171

ESTUDIO FITOQUÍMICO

172

Aceites esenciales

Saponinas

173

Sesquiterpenlactonas

Valepotriatos

174

BIOTERIO Y ENSAYOS FARMACOLÓGICOS EXPERIMENTALES

175

Administración vía oral (P.O) Administración intramuscular (I.M.)

176

Placa agujereada (test de la curiosidad)

Rota Rod (test del equilibrio)

Chimenea (test de coordinación) Potenciación del Sueño

177

PARTE V V.1 INFORME FINANCIERO Del proyecto se ejecutó casi el 100 % del presupuesto, ya que compraron todos los materiales y equipos que señala la ficha presupuestaria, quedando dinero en pocos reglones que no se pudieron ejecutar o el proveedor no cobró por algún reactivo, el caso de Q1,500.00 quetzales que quedan en el renglón 122 sobre impresión , encuadernación y reproducción, no se han ejecutado pues hasta ahora se presenta este informe final, esperando sea aceptado el poder utilizarlos, una vez este informe sea aprobado.

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