Preparaciones CromosómicasJuan Avilés 4-734-911

José Gonzáles 4-750-2003

RESUMEN

Se pueden usar distintos tejidos para obtener preparaciones de cromosomas; por ejemplo, sangre periférica, medula ósea, fluido amniótico y productos de la concepción. Aunque las técnicas específicas difieren según el tejido usado, el método básico para obtener preparaciones de cromosomas es así:

* Recolección de la muestra y preparación inicial.* Cultivo celular.* Adición de un inhibidor de la mitosis para detener las células en metafase.* Recogida de las células. Este paso es muy importante para obtener preparaciones de alta calidad. Implica exponer las células a una disolución hipotónica, seguida de una serie de disoluciones fijadoras. Esto hace que las células se expandan, de modo que los cromosomas se extiendan y puedan examinarse individualmente.* Tinción de las preparaciones cromosómicas para detectar los posibles cambios numéricos y estructurales.

INTRODUCCIÓN

El ADN es el material que controla la determinación de las características hereditarias y está constituido por largas cadenas de nucleótidos, que asociados a proteínas, se organizan en los cromosomas.

Los cromosomas contienen la información genética del organismo. Cada tipo de organismo tiene un número de cromosomas determinado; en la especie humana, por ejemplo, hay 23 pares de cromosomas organizados en 8 grupos según el tamaño y la forma. La mitad de los cromosomas proceden del padre y la otra mitad de la madre.

Cromosomas de la mosca de la fruta

Los cromosomas de la mosca de la fruta o del vinagre, Drosophila melanogaster, se prestan a la experimentación genética. Son sólo 4 pares (frente a los 23 pares de la dotación genética humana), uno de ellos, marcado aquí con las letras X e Y, determina el sexo de la mosca; además, son muy grandes. Thomas Hunt Morgan y sus colaboradores basaron su teoría de la herencia en estudios realizados con Drosophila. Observaron que los cromosomas pasaban de los progenitores a los descendientes según el mecanismo atribuido por Gregor Mendel a los caracteres heredados.

Propusieron que los genes ocupan lugares específicos dentro de los cromosomas.

Varios miles de genes (unidades de la herencia) se disponen en una sencilla línea sobre un cromosoma, una estructura filiforme de ácidos nucleídos y proteínas. Las bandas teñidas de oscuro son visibles en los cromosomas tomados de las glándulas salivares de Drosophila melanogaster, la mosca de la fruta. Su significado no se conoce bien, pero el hecho de que los diseños específicos de las bandas sean característicos de varios cromosomas, constituye una valiosa herramienta de identificación.

Las moléculas de ADN de cualquier forma de vida tienen la misma estructura y están constituidas por las mismas cuatro bases nitrogenadas, por lo que los científicos han utilizado esas similitudes para introducir uno o más genes de un organismo en otro diferente. Estos nuevos genes llegan a ser funcionales en el organismo receptor y a producir la proteína deseada.

METODOLOGIA

Lo primero a realizar fue hacer un raspado suave de mejilla para distribuir las células epidérmicas sobre un portaobjetos bien limpio. Lo que hicimos, fue con un hisopo raspar la mejilla de un compañero y frotar el hisopo sobre el portaobjetos. Procedimos a teñir la preparación con orceína acética sobre el frotis, le colocamos el cubreobjetos y se llevo al microscopio para observar los corpúsculos de bar.El siguiente paso a realizar es observar cromosomas politénicos. Lo que hicimos fue extraer una larva del tercer estadio de un cultivo maduro, se selecciono la más grande y más madura. Con la ayuda de unas agujas de disectar, colocamos una punta de la aguja sobre un extremo de la larva y la otra aguja sobre el otro extremo y con un movimiento rápido separamos la parte cefálica del resto del cuerpo. Luego nos deshicimos de lo que no se utilizaría. Luego transferimos las glándulas a un porta objetos limpio, y le adicionamos una gota de acetorceína y sin dejar secar lo dejamos por 15 minutos aproximadamente para teñir. Luego de esto le colocamos un cubreobjetos y hacemos un squash sobre el tejido con cuidado de no romper el cubreobjetos.

RESULTADOS

Células epidérmicas del raspado de la mejilla

Fig. 1 Células Epidérmicas

Fig. 2 Cuerpos de Barr

Cromosomas politénicos

Fig. 3 Cromosomas Politénicos

Fig. 3.1 En D. Melanogaster

Fig. 4 Bandas

Fig. 5 Cromosomas de una Drosophila melanogaster

Fig. 6 Cromosomas del Macho y la Hembra de D. Melanogaster

Hembra

DISCUSIÓN

Se sabe que los cromosomas son los que transportan la información hereditaria. Entonces en el primer experimento pudimos observar con claridad las células epidérmicas y los corpúsculos de Barr. Esto se logro ver gracias al raspado que le hicimos a una mejilla. Luego con la larva en su tercer estadio se observaron los cromosomas politénicos y gracias a una placa de un compañero, observamos las bandas de los cromosomas politénicos, esto porque se logro teñir con acetorceína.

CUESTIONARIO

1. ¿Cuántos pares de cromosomas tiene la Drosophila melanogaster, descríbalos y dibuje como se observan en metafase?

R: La Drosophila melanogaster tiene 4 pares de cromosomas.

Fig. 7 Cromosomas de Drosophila melanogaster en metafase.

2. ¿A que se llama cromocentro?R: Es la zona de fusión de las regiones heterocromatínicas situadas alrededor de los centrómeros de los pares cromosómicos.

3. ¿Qué número cromosómico tienen las células somáticas en metafase y las células de las glándulas salivales?

R: Un mosquito tiene seis cromosomas en cada célula somática; el ciruelo, cuarenta y ocho; el ser humano, cuarenta y seis; la papa, cuarenta y seis; el gato, treinta y ocho. Sin embargo en cada una de estas especies las células sexuales o gametos, tienen exactamente la mitad del número de cromosomas que caracteriza a las células somáticas del organismo.

4. ¿Qué es endomitosis?R: La endomitosis es la replicación cromosómica que no va acompañada por división nuclear o citoplásmica. La endomitosis es una variante de la mitosis sin división nuclear o celular, lo que da lugar a células con muchas copias del mismo cromosoma en el mismo núcleo. Este proceso también se denomina endoreduplicación, y las células resultantes endoploides. Un ejemplo de una célula que sufre endomitosis es el megacariocito.

5. ¿Qué representan las bandas y los “puft” de los cromosomas politénicos?

R: En D. melanogaster el patrón de bandeo no se distingue en aquellas regiones heterocromáticas presentes en región centromérica de todos sus cromosomas (n=4). Las regiones heterocromáticas están asociadas formando un cromocentro. Ya que dos miembros del complemento haploide de esta especie son metacéntricos (los cromosomas II y III) y dos son acrocéntricos (cromosoma sexual X o Y, y el cromosoma IV), los cromosomas politénicos en esta especie aparecen como cinco brazos desiguales que irradian del cromocentro: un brazo correspondiente al cromosoma X, los dos brazos del cromosoma II y los dos brazos del cromosoma III (3L y 3R). En algunos casos se puede visualizar un sexto brazo muy pequeño que representa el cromosoma IV.

6. ¿Qué es una aberración cromosómica?R: Aberración cromosómica es un error durante la meiosis de los gametos o de las primeras divisiones del huevo y que provoca una anomalía de número o estructura de los cromosomas.

7. Explique los términos siguientes: duplicaciones, inversiones y translocaciones cromosómicas.

R: Duplicaciones: Las duplicaciones pequeñas para heterocigotos y homocigotos suelen ser viables, aunque el llevar una duplicación puede provocar modificaciones fenotípicas y comportarse como una mutación génica. El que una duplicación sea viable implica un gran potencial evolutivo, pues implica que cuando ese fragmento duplicado está presente, mientras que el fragmento original puede seguir con las funciones básicas, el fragmento duplicado puede sufrir mutaciones génicas, lo que permite diversidad de las zonas duplicadas, lo que puede resultar ventajoso para la evolución genómica, aunque los segmentos también pueden mutar desfavorablemente, de forma que obtendremos un pseudogen que se perderá y no ejercerá ningún tipo de función (será un gen que ha perdido su función). Inversiones: Las inversiones son rotaciones de 180º de un segmento cromosómico que se separa, volviéndose a unir luego al mismo cromosoma. Suelen ser mutaciones viables que no implican anormalidad fenotípica alguna. Puede ocurrir que una de las roturas de la inversión, se produzca en un gen esencial, de forma que el sitio de ruptura, actuará como una mutación génica letal ligada a la inversión, ello provoca que no pueda darse en homocigosis; pueden ser de dos tipos; pericéntricas cuando implican la inversión del centrómero, y paracéntricas, que implican inversión de genes que no incluyen el centrómero. Translocaciones cromosómicas: Las translocaciones son el intercambio de dos fragmentos de cromosomas no homólogos. Pueden ser recíprocas, que son las más frecuentes. En estas, un segmento de un cromosoma se intercambia con otro de un cromosoma no homólogo, de forma que se producen simultáneamente dos cromosomas portadores de translocación. En las no recíprocas únicamente tenemos traspaso de un fragmento cromosómico en una dirección, sin que recíprocamente se traspase otro; este caso, se denomina transposición.

8. Investigue cuantos cromosomas tiene la vaca, el perro, el caballo y el mono.

R: Cromosomas de la vaca: 60 cromosomas. Cromosomas del perro: 78 cromosomas. Cromosomas del caballo: 64 cromosomas. Cromosomas del mono: 48 cromosomas.

BIBLIOGRAFÌA

Batista O. David, Agosto de 2006. Manual de laboratorio de Genética. Universidad Autónoma de Chiriquí. Facultad de Ciencias Naturales y Exactas. Departamento de Genética. Panamá, p.p. 29, 30, 31, 32, 33. http://www.analisisclinico.es/general/analisis-cromosomico

MitosisJuan Avilés 4-734-911

José Gonzáles 4-750-2003

RESUMENLa mitosis es el tipo de división celular de las células somáticas a partir

de una célula madre diploide se originan dos células con la misma cantidad de cromosomas y material genético. Utilizando tejidos vegetales o animales respectivamente se pueden observar las distintas fases de la división mitótica, las diferencias en cada una de estas y se puede saber el porqué de estas diferencias entre un tejido y otro.

INTRODUCCIÒN

La mitosis es el tipo de división celular por el cual se conservan los orgánulos y la información genética contenida en sus cromosomas, que pasa de esta manera a las células hijas resultantes de la mitosis. La mitosis es igualmente un verdadero proceso de multiplicación celular que participa en el desarrollo, el crecimiento y la regeneración del organismo. Este proceso tiene lugar por medio de una serie de operaciones sucesivas que se desarrollan de

una manera continua, y que para facilitar su estudio han sido separadas en varias etapas.

El resultado esencial de la mitosis es la continuidad de la información hereditaria de la célula madre en cada una de las dos células hijas. El genoma se compone de una determinada cantidad de genes organizados en cromosomas, hebras de ADN muy enrolladas que contienen la información genética vital para la célula y el organismo. Dado que cada célula debe contener completa la información genética propia de su especie, la célula madre debe hacer una copia de cada cromosoma antes de la mitosis, de forma que las dos células hijas reciban completa la información. Esto ocurre durante la fase S de la interface, el período que alterna con la mitosis en el ciclo celular y en el que la célula entre otras cosas se prepara para dividirse.

Tras la duplicación del ADN, cada cromosoma consistirá en dos copias idénticas de la misma hebra de ADN, llamadas cromátidas hermanas, unidas entre sí por una región del cromosoma llamada centrómero. Cada cromátida hermana no se considera en esa situación un cromosoma en sí mismo, sino parte de un cromosoma que provisionalmente consta de dos cromátidas.

En animales y plantas, pero no siempre en hongos o protistas, la envoltura nuclear que separa el ADN del citoplasma se desintegra, desapareciendo la frontera que separaba el contenido nuclear del citoplasma. Los cromosomas se ordenan en el plano ecuatorial de la célula, perpendicular a un eje definido por un huso acromático. Éste es una estructura citoesquelética compleja, de forma ahusada, constituido por fibras que son filamentos de microtúbulos. Las fibras del huso dirigen el reparto de las cromátidas hermanas, una vez producida su separación, hacia los extremos del huso. Por convenio científico, a partir de este momento cada cromátida hermana sí se considera un cromosoma completo, y empezamos a hablar de cromosomas hermanos para referirnos a las estructuras idénticas que hasta ese momento llamábamos cromátidas. Como la célula se alarga, las fibras del huso “tiran” por el centrómero a los cromosomas hermanos dirigiéndolos cada uno a uno de los polos de la célula. En las mitosis más comunes, llamadas abiertas, la envoltura nuclear se deshace al principio de la mitosis y se forman dos envolturas nuevas sobre los dos grupos cromosómicos al acabar. En las mitosis cerradas, que ocurren por ejemplo en levaduras, todo el reparto ocurre dentro del núcleo, que finalmente se estrangula para formar dos núcleos separados.

La mitosis se completa casi siempre con la llamada citocinesis o división del citoplasma. En las células animales la citocinesis se realiza por estrangulación: la célula se va estrechando por el centro hasta que al final se separa en dos. En las células de las plantas se realiza por tabicación, es decir, las células hijas “construyen” una nueva región de pared celular que dividirá la una de la otra dejando puentes de citoplasma (plasmodesmos). Al final, la célula madre se parte por la mitad, dando lugar a dos células hijas, cada una con una copia equivalente y completa del genoma original.

Cabe señalar que las células procariotas experimentan un proceso similar a la mitosis llamado fisión binaria. No se puede considerar que las células procariotas experimenten mitosis, dado que carecen de núcleo y únicamente tienen un cromosoma sin centrómero.

METODOLOGIA

Se colocó con anticipación una cebolla y porotos en algodón con agua para que emergieran las raíces con cuidado que el algodón no se secara. Esto durante ocho días aproximadamente. A los ocho días de esto, se recortaron las raíces más nuevas y blancas, con bisturí. Luego la fijamos en tres partes de alcohol y una en ácido acético. Esto se recomienda hacer entre 11 y 12 del día.

Una vez esto, en el laboratorio procedimos a tomar un meristemo y lo colocamos en un portaobjetos limpio. Una vez colocado en el portaobjetos, medimos 3 mm del extremo y cortamos. Se elimina el resto de la raíz que quedo. Adicionamos una gota de acido clorhídrico (HCl) y lo dejamos por 3 minutos, luego procedimos a lavar el meristemo 3 veces con agua. Se debe lavar muy bien y que no quede nada de acido clorhídrico en el meristemo.

Una vez listo esto, se le adiciona una gota de colorante orceína acética. Cuando se le adiciono la gota del colorante, con una varilla de vidrio, presionamos firmemente y con cuidado sobre el meristemo, de tal manera que este quede aplastado y que el material quede bien distribuido y se le coloca el cubreobjetos en forma de squash. Realizado esto, se lleva la preparación al microscopio para observar las diferentes fases.

RESULTADOS

Fig. 1 Se observan las fases del ciclo celular: profase, metafase, anafase,

telofase

Fig. 2 Fases del ciclo celular de una cebolla

Fig. 3 Fases del ciclo celular de una cebolla

Fig. 4 Meristemo apical de una cebolla

Fig. 5 Fases de la Mitosis

DISCUSIÓN

Gracias al meristemo de la cebolla, logramos el objetivo de observas las distintas fases del ciclo celular, y poder comprender los pasos que se realizan para poder dar orígenes a otros seres.

Mitosis o Cariocinesis, es el proceso de división del núcleo de las células somáticas (no sexuales) cuyo resultado es la división exacta de la información genética que previamente se había duplicado durante la interface del ciclo celular. La mitosis garantiza que el número de cromosomas de las células se mantenga constante de generación en generación. La célula progenitora da origen a dos células hijas, genéticamente idénticas a la madre, que contienen un número diploide de cromosomas característico de la especie.

Los organismos pluricelulares necesitan la mitosis para desarrollarse, crecer y reemplazar células de tejidos u órganos dañados. Todos estos organismos provienen de una célula única. Esto incluye tanto animales como las plantas.

BIBLIOGRAFÌA

Batista O. David, Agosto de 2006. Manual de laboratorio de Genética. Universidad Autónoma de Chiriquí. Facultad de Ciencias Naturales y Exactas. Departamento de Genética. Panamá, p.p. 29, 30, 31, 32, 33. http://es.wikipedia.org/wiki/Mitosishttp://www.biologia.arizona.edu/cell/tutor/mitosis/cells3.html

Profase

Metafase

Anafase

Telofase

MeiosisJuan Avilés 4-734-911

José Gonzáles 4-750-2003

RESUMEN

Es el proceso mediante el cual se obtienen células especializadas para intervenir en la reproducción sexual. Reduce a la mitad el número de cromosomas, y así al unirse las dos células sexuales, vuelve a restablecerse el número cromosómico de la especie. Se produce una recombinación de la información genética. La meiosis origina una gran variación de gametos, debido al entrecruzamiento de segmentos de los cromosomas homólogos. Con la experiencia a realizar pudimos diferenciar las fases y etapas de cada una de estas. Debe destacarse que si bien en la espermatogénesis las cuatro células derivadas de la meiosis se diferencian en espermatozoide.

INTRODUCCIÒN

En biología, meiosis (del griego μείωσις, disminución) es una de las formas de reproducción celular. Es un proceso divisional celular, en el cual una célula diploide (2n) experimentará dos divisiones celulares sucesivas, con la capacidad de generar cuatro células haploides (n).

Este proceso se lleva a cabo en dos divisiones nucleares y citoplasmáticas, llamadas primera y segunda división meiótica o simplemente Meiosis I y Meiosis II. Ambas comprenden Profase, Metafase, Anafase y Telofase.

Durante la meiosis I, los miembros de cada par homólogo de cromosomas se unen primero y luego se separan y se distribuyen en diferentes núcleos. En la Meiosis II, las cromátidas hermanas que forman cada cromosoma se separan y se distribuyen en los núcleos de las células hijas. Entre estas dos etapas sucesivas no existe la etapa S (duplicación del ADN).

La meiosis no siempre es un proceso preciso; a veces los errores en la meiosis son responsables de las principales anomalías cromosómicas. La meiosis consigue mantener constante el número de cromosomas de las células de la especie para mantener la información genética.

Meiosis I

Profase I

La profase I de la primera división meiótica es la etapa más compleja del proceso y a su vez se divide en 5 subetapas, que son:

Leptoteno:

La primera etapa de Profase I es la etapa del leptoteno, durante la cual los cromosomas individuales comienzan a condensar en filamentos largos dentro del núcleo. Cada cromosoma tiene un elemento axial, un armazón proteico que lo recorre a lo largo, y por el cual se ancla a la envuelta nuclear. A lo largo de los cromosomas van apareciendo unos pequeños engrosamientos denominados cromómeros.

Zigoteno :

Los cromosomas homólogos comienzan a acercarse hasta quedar apareados en toda su longitud. Esto se conoce como sinapsis (unión) y el complejo resultante se conoce como bivalente o tétrada (nombre que prefieren los citogenetistas), donde los cromosomas homólogos (paterno y materno) se aparean, asociándose así cromátidas homólogas. Producto de la sinapsis, se forma una estructura observable solo con el microscopio electrónico, llamada complejo sinaptonémico, unas estructuras, generalmente esféricas, aunque en algunas especies pueden ser alargadas.

La disposición de los cromómeros a lo largo del cromosoma parece estar determinado genéticamente. Tal es así que incluso se utiliza la disposición de estos cromómeros para poder distinguir cada cromosoma durante la profase I meiótica.

Además el eje proteico central pasa a formar los elementos laterales del complejo sinaptonémico, una estructura proteica con forma de escalera formada por dos elementos laterales y uno central que se van cerrando a modo de cremallera y que garantiza el perfecto apareamiento entre homólogos. En el apareamiento entre homólogos también está implicada la secuencia de genes de cada cromosoma, lo cual evita el apareamiento entre cromosomas no homólogos. Además durante el zigoteno concluye la replicación del ADN (2% restante) que recibe el nombre de zig-ADN.

Paquiteno:

Una vez que los cromosomas homólogos están perfectamente apareados formando estructuras que se denominan bivalentes se produce el fenómeno de entrecruzamiento (crossing-over) en el cual las cromátidas homólogas no hermanas intercambian material genético. La recombinación genética resultante hace aumentar en gran medida la variación genética entre la descendencia de progenitores que se reproducen por vía sexual.

La recombinación genética está mediada por la aparición entre los dos homólogos de una estructura proteica de 90 nm de diámetro llamada nódulo de

recombinación. En él se encuentran las enzimas que medían en el proceso de recombinación.

Durante esta fase se produce una pequeña síntesis de ADN, que probablemente está relacionada con fenómenos de reparación de ADN ligados al proceso de recombinación.

Diploteno:

Los cromosomas continúan condensándose hasta que se pueden comenzar a observar las dos cromátidas de cada cromosoma. Además en este momento se pueden observar los lugares del cromosoma donde se ha producido la recombinación. Estas estructuras en forma de X reciben el nombre quiasmas. Cada quiasma se origina en un sitio de entrecruzamiento, lugar en el que anteriormente se rompieron dos cromátidas homólogas que intercambiaron material genético y se reunieron.

En este punto la meiosis puede sufrir una pausa, como ocurre en el caso de la formación de los óvulos humanos. Así, la línea germinal de los óvulos humanos sufre esta pausa hacia el séptimo mes del desarrollo embrionario y su proceso de meiosis no continuará hasta alcanzar la madurez sexual. A este estado de latencia se le denomina dictiotena.

Diacinesis:

Esta etapa apenas se distingue del diploteno. Podemos observar los cromosomas algo más condensados y los quiasmas. El final de la diacinesis y por tanto de la profase I meiótica viene marcado por la rotura de la membrana nuclear. Durante toda la profase I continuó la síntesis de ARN en el núcleo. Al final de la diacinesis cesa la síntesis de ARN y desaparece el nucléolo.

Prometafase I

La membrana nuclear desaparece. Un cinetocoro se forma por cada cromosoma, no uno por cada cromátida, y los cromosomas adosados a fibras del huso comienzan a moverse. Algunas veces las tétradas son visibles al microscopio. Las cromátidas hermanas continúan estrechamente alineadas en toda su longitud, pero los cromosomas homólogos ya no lo están y su centrómeros y cinetocoros encuentran separados entre sí.

Metafase I

Los cromosomas homólogos se alinean en el plano de ecuatorial. La orientación es al azar, con cada homologo paterno en un lado. Esto quiere decir que hay un 50% de posibilidad de que las células hijas reciban el homólogo del padre o de la madre por cada cromosoma. Los microtúbulos del huso de cada centriolo se unen a sus respectivos cinetocoros.

Anafase I

Los quiasmas se separan. Los microtúbulos del huso se acortan en la región del cinetocoro, con lo que se consigue remolcar los cromosomas homólogos a lados opuestos de la célula, junto con la ayuda de proteínas motoras. Ya que cada cromosoma homólogo tiene solo un cinetocoro, se forma un juego haploide (n) en cada lado. En la repartición de cromosomas homólogos, para cada par, el cromosoma materno se dirige a un polo y el paterno al contrario. Por tanto el número de cromosomas maternos y paternos que haya a cada polo varía al azar en cada meiosis. Por ejemplo, para el caso de una especie 2n = 4 puede ocurrir que un polo tenga dos cromosomas maternos y el otro los dos paternos; o bien que cada polo tenga uno materno y otro paterno.

Telofase I

Cada célula hija ahora tiene la mitad del número de cromosomas pero cada cromosoma consiste en un par de cromátidas. Los microtúbulos que componen la red del huso mitótico desaparece, y una membrana nuclear nueva rodea cada sistema haploide. Los cromosomas se desenrollan nuevamente dentro de la cromatina. Ocurre la citocinesis (proceso paralelo en el que se separa la membrana celular en las células animales o la formación de esta en las células vegetales, finalizando con la creación de dos células hijas). Después suele ocurrir la intersinesis, parecido a una segunda interface, pero no es una interface verdadera, ya que no ocurre ninguna réplica del ADN. Este proceso es breve en todos los organismos, pero en algunos generalmente no ocurre.

Meiosis II

Profase II

Profase Temprana II

Comienza a desaparecer la envoltura nuclear y el nucleolo. Se hacen evidentes largos cuerpos filamentosos de cromatina, y comienzan a condensarse como cromosomas visibles

Profase Tardía II

Los cromosomas continúan acortándose y engrosándose. Se forma el huso entre los centriolos, que se han desplazado a los polos de la célula

Metafase II

Las fibras del huso se unen a los cinetocoros de los cromosomas. Éstos últimos se alinean a lo largo del plano ecuatorial de la célula. La primera y segunda metafase pueden distinguirse con facilidad, en la metafase I las cromátidas se disponen en haces de cuatro (tétrada) y en la metafase II lo hacen en grupos de dos (como en la metafase mitótica). Esto no es siempre tan evidente en las células vivas.

Anafase II

Las cromátidas se separan en sus centrómeros, y un juego de cromosomas se desplaza hacia cada polo. Durante la Anafase II las cromátidas, unidas a fibras del huso en sus cinetocoros, se separan y se desplazan a polos opuestos, como lo hacen en la anafase mitótica. Como en la mitosis, cada cromátida se denomina ahora cromosoma.

Telofase II

En la telofase II hay un miembro de cada par homologo en cada polo. Cada uno es un cromosoma no duplicado. Se re ensamblan las envolturas nucleares, desaparece el huso acromático, los cromosomas se alargan en forma gradual para formar hilos de cromatina, y ocurre la citocinesis. Los acontecimientos de la profase se invierten al formarse de nuevo los nucleolos, y la división celular se completa cuando la citocinesis ha producidos dos células hijas. Las dos divisiones sucesivas producen cuatro núcleos haploide, cada uno con un cromosoma de cada tipo. Cada célula resultante haploide tiene una combinación de genes distinta. Esta variación genética tiene dos fuentes: 1 – Durante la meiosis, los cromosomas maternos y paternos se barajan, de modo que cada uno de cada par se distribuye al azar en los polos de la anafase I. 2 - se intercambian segmentos de ADN entre los homólogos paternos y maternos durante el entrecruzamiento.

METODOLOGIA

Para este laboratorio procedimos a observar placas fijadas. La cuales contenían folículo primario, folículo secundario, folículo terciario, espermatogénesis de perro, espermatozoides, túbulos seminíferos y ovario.

RESULTADOS

Fig. 1 Meiosis

DISCUSIÒN

La meiosis es aquella que se caracteriza por 2 divisiones nucleares y 2 divisiones citoplasmáticas. En la placa del folículo secundario se observan las zonas pelusidas, el ovulo y unas células foliculares de segundo orden. En la placa de espermatozoides, se observan los espermatozoides teñidos. Se observan claramente la cola y la cabeza del mismo. El la placa de túbulos seminíferos se observa en la parte central. La cabeza de los espermatozoides y así dentro la cola de los espermatozoides. En la placa de folículo secundario maduro se observan el ovulo, el liquido folicular y el estroma ovárico. Una de las diferencias entre el folículo primario, secundario y terciario es la cantidad de células que rodean al folículo.

BIBLIOGRAFÌA

Batista O. 2006. Manual de laboratorio de Genética. Universidad Autónoma de Chiriquí. Facultad de Ciencias Naturales y Exactas. Departamento de Genética. Panamá, p.p. 38, 39, 40. http://www.altillo.com/examenes/uba/cbc/biologia/biologresumenmeiosis.asphttp://www.efn.uncor.edu/dep/biologia/intrbiol/meiosis.htm

Fig. 2 Meiosis II

EXTRACCIÓN DEL ADN

Juan Avilés 4-734-911

José Gonzáles 4-750-2003

RESUMEN

El proceso de extracción del ADN geonómico sigue ciertas pautas para su correcta purificación que son muy diferentes a los empleados en la purificación de proteínas, lo que refleja las diferencias básicas en la estructura de estos dos tipos de macromoléculas. El primer paso en la purificación del ADN por lo general consiste en homogeneizar las células y aísla los núcleos de los cuales se extrae el ADN. El medio de extracción ordinario contiene un detergente (SDS); a continuaciones le agrega solución de te para resuspender el ADN, luego los ácidos nucleicos se precipitan añadiendo etanol .Para concluir el análisis de la extracción del ADN hay que resaltar que e n este proceso ocurre una lisis celular lo cual significa que el ADN queda libre por consiguiente hay que protegerlo de las enzimas porque estas podrían degradarlo.

La electroforesis es el movimiento de partículas eléctricamente cargadas a través de un gel de agarosa como resultado de un campo eléctrico formado entre unos electrodos sumergidos en el medio, este procedimiento permite la separación de moléculas como consecuencia de su diferente movilidad en un campo eléctrico.

INTRODUCCIÒN

La molécula de ADN (que es la que se va a extraer en este laboratorio) está constituida por dos largas cadenas de nucleótidos unidas entre sí formando una doble hélice. Las dos cadenas de nucleótidos que constituyen una molécula de ADN, se mantienen unidas entre sí porque se forman enlaces entre las bases nitrogenadas de ambas cadenas que quedan enfrentadas.

La unión de las bases se realiza mediante puentes de hidrógeno, y este apareamiento está condicionado químicamente de forma que la adenina (A) sólo se puede unir con la Timina (T) y la Guanina (G) con la Citosina (C).

La estructura de un determinado ADN está definida por la "secuencia" de las bases nitrogenadas en la cadena de nucleótidos, residiendo precisamente en esta secuencia de bases la información genética del ADN. El orden en el que aparecen las cuatro bases a lo largo de una cadena en el ADN es, por tanto, crítico para la célula, ya que este orden es el que constituye las instrucciones del programa genético de los organismos.

Conocer esta secuencia de bases, es decir, secuenciar un ADN equivale a descifrar su mensaje genético.

La estructura en doble hélice del ADN, con el apareamiento de bases limitado (A-T; G-C), implica que el orden o secuencia de bases de una de las cadenas delimita automáticamente el orden de la otra, por eso se dice que las cadenas son complementarias. Una vez conocida la secuencia de las bases de una cadena, se deduce inmediatamente la secuencia de bases de la complementaria.

METODOLOGÌA

PROTOCOLO PARA EXTRACCIÓN DE ADN GENÓMICO A PARTIR DE SANGRE

(KIT MASTER PURE DE EPICENTRE)

1. Obtenga 5 mL de sangre fresca en un tubo Vacutainer con EDTA con otra alternativa se puede usar sangre que ha sido guardada a 4 ºC por cerca de tres días o sangre congelada pero, la reacción puede disminuir.

2. Mezcle la sangre invirtiendo el tubo y transfiera 325 µl a un tubo de microcentrifuga que contenga 1 mL de buffer de lisis 1, mezcle en tubo 3 veces invirtiendo para mezclar las soluciones.

3. Incube a temperatura ambiente por 5 minutos y mezcle en un vortex brevemente. Continúe incubando a temperatura ambiente por otros 5 minutos y nuevamente vuelva a vortecear brevemente.

4. Obtenga el pelet de células blancas por centrifugación a 25 segundos en una microcentrifuga.

5. Deseche la mayor cantidad de sobrenadante dejando aproximadamente 25 µl en el tubo, luego mezcle utilizando el vortex para suspender el pelet o precipitar.

6. Resuspenda las células blancas añadiendo 500 µl de buffer de lisis 2, pipeteando las células de 5 a 7 veces.

7. Proceda entonces a añadir 200 µl de la solución de precipitación. Y mezcle con el vortex vigorosamente por al menos 30 segundos.

8. Obtenga un pelet de desecho centrifugando por 10 minutos a 10 000 rpm en un a microcentrifuga.

9. Coloque el sobrenadante en un tubo limpio de microcentrifuga y añada 500 µl de isopropanol o 2 propanol. Luego invierta el tubo entre 30 y 40 veces para mezclar, durante este procedimiento se debe observar un precipitado filamentoso dentro del tubo (ADN).

10.Obtenga el pelet o precipitado de ADN centrifugando a 4 ºC por 10 minutos en un a centrifuga.

11.Deseche con mucho cuidado el sobrenadante sin tocar el pelet, posteriormente lave dos veces el pelet con alcohol al 70% siendo muy cuidadoso de no perder el pelet, remueva todo el residuo de etanol con una pipeta.

12.Resuspenda el ADN en 50 µl de buffer TE, e incube toda la noche a temperatura ambiente resuspendiendo el ADN, pipeteando repetidas veces y vorteceando para mezclar por 10 segundos.

13.Guarde el ADN purificado a – 20 ºC.14.Cuantifique el ADN usando electroforesis, espectrofotometría, o fluorimetria. La

concentración debe ser aproximadamente 100 a 200 µg/mL.

RESULTADOS

Fig.1 Se obtiene la muestra de sangre para realizar la extracción del ADN.

Fig. 2 Aquí se extraen los 5 µl de sangre fresca.

Fig. 3 Aquí se colocan las muestras de sangre en un tubo para ser vorteceados.

Fig. 4 Se vortecea para suspender, mezclar y separar

Fig. 5 Microcentrifuga, dentro de ella estan los pocillos. Aquí se obtiene el pelet de celulas blancas, centrifugando por 25 segundos.

Fig. 6 Obtención del pelet, aquí se observa también el sobrenadante.

Fig. 7 TBE (Buffer)

Sobrenadante

Precipitado

TBE 1x

Fig. 8 AGAROSA

Fig. 9 Aquí se prepara para hacer el gel de agarosa.

fig.10 Aquí se coloca el peine que es lo se observa de color morado, dentro de este se coloca el gel de agarosa, para luego observar la extracción del ADN con la exposición a la luz ultravioleta.

Fig. 11 Resultado final de la extracción del ADN. Aquí se observa claramente las Bandas por exposición a la luz ultravioleta.

DISCUSIÓN La extracción del ADN es una manera para aislar los glóbulos rojos de los blanco. En esta experiencia, lo que se preparó primero, fue el gel de agarosa, ya que había que dejarlo reposar o cuajar, porque queda como

Para preparar agarosa

especie de una gelatina para luego hacer la extracción, hay que recordar que la corriente eléctrica se da del Ánodo al Cátodo. Para poder introducir el ADN al gel, se necesitan unos pocillos, para esto se coloca un peine. Entonces, si hay más ADN se coloca la peinilla en la parte más gruesa y si hay menos ADN se coloca en la parte más delgada. Lo colocamos en la parte más gruesa para que el pocillo fuera visible. La agarosa es un polvillo y para esto se debe utilizar guantes porque utilizamos Bromuro de etidio ya que este es tóxico y cancerino, por eso cuando estamos cerca del gel o de la cámara, no colocar nuestra piel desnuda. Se prepara un gel de agarosa al 2 %, le añadimos TBE 1x que es un buffer, con el cual se disuelve la agarosa. Luego se llevó a la microonda porque tiene que quedar traslucida. Se dejó por 70 segundos. Luego de esto se adiciona 3 µl de Bromuro de etidio a la agarosa, el Bromuro de etidio es el que permite que se observen las bandas de ADN por exposición a la luz ultravioleta. Luego de esto se extrajo la muestra de sangre para extraer el ADN genómico a partir de la sangre. Lo primero que se procede a hacer, es rotular los tubos de sangre. Y se utilizarán tubos de micro centrífugo. Tomamos una muestra. Mezclamos la sangre. Se vortecea para mezclar la sangre con el buffer de lisis. Estamos lisando los glóbulos blancos. Porque en los glóbulos rojos no hay núcleo y por eso no hay ADN, en cambio en los glóbulos blancos si hay. Se obtiene un pelet que es un agregado de glóbulos blancos. Una vez se es extraído esto, se procede a colocar en el gel de agarosa para luego ser observados. Se observaran bandas de ADN, bandas que se verán claramente por la exposición a la luz ultravioleta

BIBLIOGRAFÌA

Batista O. 2006. Manual de laboratorio de Genética. Universidad Autónoma de Chiriquí. Facultad de Ciencias Naturales y Exactas. Departamento de Genética. Panamá, p.p. http://learn.genetics.utah.edu/es/units/activities/extraction/http://www.microbial-systems.com/web/docs/Newsletter_Microbial_03.pdf