Boletín Informativo - iralabs.com · ferencia Andinoes un análisis muy útil para investigar las...
2
Volumen 5 Nº 2 | Abril-Junio de 2011 Introducción La Hemoglobina es la principal proteina eritrocítica, por cuanto su función transportadora de oxígeno desde los pulmones hasta los más recónditos capilares asegura la superviven- cia celular aerobia en todo el organismo. También su capacidad fijadora de CO2 permite la expulsión de este derivado del metabolismo respiratorio a través de la ruta venosa que llega al tejido pulmonar en donde es exhalado. Boletín Informativo Novedades en el diagnóstico electroforético de las Hemoglobinopatías Los niveles sanguíneos de Hemoglobina Total (Hb), de Hemoglo- bina Corpuscular Media (HCM) y de Concentración Corpuscular Media de Hemoglobina (CCMH), han sido referencia tradicional en el cuadro hemático, y con base en su cuantificación en gramos por ciento (g%), picogramos (pg) o porcentaje (%), respectivamente, se han clasificado y subclasificado diferentes tipos de anemias. El análisis cuantitativo de la Hemoglobina debe complementarse en ocasiones con un análisis cualitativo, puesto que normalmente solo deben evidenciarse tres clases de hemoglobinas en el adulto: HbA (97%), HbA2 (2%) y HbF o Hemoglobina fetal (1%). Esta últi- ma, como su nombre lo indica, predomina en la edad intrauterina cuando asegura la oxigenación transplacentaria. En el momento de nacer, la HbF pasa gradualmente de concentraciones cercanas al 50% a concentraciones de 5% a los 5 meses y 2% a los 2 años. Sin embargo, algunas condiciones como la talasemia, la anemia perniciosa, algunas leucemias, el mieloma múltiple, la anemia aplásica adquirida o bien la anemia falciforme se asocian a niveles elevados de esta variante molecular, y su disminución es indicador de buen pronóstico o de tratamiento exitoso. Se han reportado al menos 10 clases o tipos diferentes de esta proteína eritrocítica compuesta por 4 cadenas globulares que pue- den ser iguales o diferentes. En función de su composición iso o hetero-tetramérica, algunos de estos isotipos se han podido aso- ciar a estadios patológicos particulares: 1- Hemoglobina F (α2γ2) 2- Hemoglobina A o HbA (α2 β2) 3- Hemoglobina A2 o HbA2 (α2 δ2) 4- Hemoglobina H o HbH (β4) 5- Hemoglobina de Bart o HbBart (γ4) 6- Hemoglobina S o HbS (α2 βS2) 7- Hemoglobina C o HbC (α2 βC2) 8- Hemoglobina E o HbE (α2 βE2) 9- Hemoglobina AS o HbAS (α2 ββS) 10- Hemoglobina AC o HbAC (α2 ββC) Las variantes HbS, HbC y HbE, presentan mutaciones específicas en sus cadenas β, y las variantes HbAS (también llamada Hemo- globina Lepore) y HbAC son heterocigotas, con una cadena β nor- mal y otra mutada. Aportes de la electroforesis capilar en la determinación cuali- tativa de la hemoglobina: El sistema usa el principio de electroforesis en solución libre en un par de capilares de sílica, y permite la separación de las moléculas cargadas en función de su movilidad electroforética propia en un medio alcalino. De esta manera se logra su detección en un solo corrido, a diferencia del método tradicional sobre gel de agarosa o acetato de celulosa que exigen realizar la determinación en dife- rentes potenciales de Hidrógeno (pH) con la eventual sobreposi-
Transcript of Boletín Informativo - iralabs.com · ferencia Andinoes un análisis muy útil para investigar las...
Volumen 5 Nº 2 | Abril-Junio de 2011
Introducción
La Hemoglobina es la principal proteina eritrocítica, por cuanto su función transportadora de oxígeno desde los pulmones hasta los más recónditos capilares asegura la superviven-cia celular aerobia en todo el organismo. También su capacidad fijadora de CO2 permite la expulsión de este derivado del metabolismo respiratorio a través de la ruta venosa que llega al tejido pulmonar en donde es exhalado.
Boletín Informativo
Novedades en el diagnóstico electroforético de las Hemoglobinopatías
Los niveles sanguíneos de Hemoglobina Total (Hb), de Hemoglo-bina Corpuscular Media (HCM) y de Concentración Corpuscular Media de Hemoglobina (CCMH), han sido referencia tradicional en el cuadro hemático, y con base en su cuantificación en gramos por ciento (g%), picogramos (pg) o porcentaje (%), respectivamente, se han clasificado y subclasificado diferentes tipos de anemias.
El análisis cuantitativo de la Hemoglobina debe complementarse en ocasiones con un análisis cualitativo, puesto que normalmente solo deben evidenciarse tres clases de hemoglobinas en el adulto: HbA (97%), HbA2 (2%) y HbF o Hemoglobina fetal (1%). Esta últi-ma, como su nombre lo indica, predomina en la edad intrauterina cuando asegura la oxigenación transplacentaria. En el momento de nacer, la HbF pasa gradualmente de concentraciones cercanas al 50% a concentraciones de 5% a los 5 meses y 2% a los 2 años. Sin embargo, algunas condiciones como la talasemia, la anemia perniciosa, algunas leucemias, el mieloma múltiple, la anemia aplásica adquirida o bien la anemia falciforme se asocian a niveles elevados de esta variante molecular, y su disminución es indicador de buen pronóstico o de tratamiento exitoso.
Se han reportado al menos 10 clases o tipos diferentes de esta proteína eritrocítica compuesta por 4 cadenas globulares que pue-den ser iguales o diferentes. En función de su composición iso o hetero-tetramérica, algunos de estos isotipos se han podido aso-ciar a estadios patológicos particulares:
1- Hemoglobina F (α2γ2)
2- Hemoglobina A o HbA (α2 β2)
3- Hemoglobina A2 o HbA2 (α2 δ2)
4- Hemoglobina H o HbH (β4)
5- Hemoglobina de Bart o HbBart (γ4)
6- Hemoglobina S o HbS (α2 βS2)
7- Hemoglobina C o HbC (α2 βC2)
8- Hemoglobina E o HbE (α2 βE2)
9- Hemoglobina AS o HbAS (α2 ββS)
10- Hemoglobina AC o HbAC (α2 ββC) Las variantes HbS, HbC y HbE, presentan mutaciones específicas en sus cadenas β, y las variantes HbAS (también llamada Hemo-globina Lepore) y HbAC son heterocigotas, con una cadena β nor-mal y otra mutada.
Aportes de la electroforesis capilar en la determinación cuali-tativa de la hemoglobina:
El sistema usa el principio de electroforesis en solución libre en un par de capilares de sílica, y permite la separación de las moléculas cargadas en función de su movilidad electroforética propia en un medio alcalino. De esta manera se logra su detección en un solo corrido, a diferencia del método tradicional sobre gel de agarosa o acetato de celulosa que exigen realizar la determinación en dife-rentes potenciales de Hidrógeno (pH) con la eventual sobreposi-
ción de algunas bandas de hemoglobinas, además de no obtener la presencia de la banda de la anhidrasa carbónica lo que permite identificar algunas otras variantes de A2 en su zona de migración.
El orden de migración de las principales hemoglobinas, tanto normales como anormales, es el siguiente: dA´2 (variante de A2), C, A2/O-Arabe, E, S, D, G-Filadelfia, F, A, Hope, Bart, J, N-Baltimore y H.
Se puede apreciar la separación de las HbA1, F, S, A2 y C en la composición electroforética 1, y en la composición electroforética 2 se puede ver un ejemplo de la identificación de Hb indeterminada en la zona 6.
Este método separa la HbA de la HbF y de la HbA2, y a la vez las cuantifica, convirtiéndose en fundamento importante para el diag-nóstico de las talasemias. En los casos de hemoglobinopatías es-tructurales, también se obtienen ventajas comparativas, dado que el corrido en soporte capilar permite separar la HbC y la HbE de la HbA2, las cuales, tal y como se mencionó, tienen la misma movili-dad electroforética por los métodos habituales y en consecuencia no se pueden identificar.
Además de algunos casos probables de Hb Lepore, heterocigotos para HbA + HbS o HbAS, hemoglobinas de movilidad rápida, con posibilidad de confundirse con las HbJ y HbH.
El manejo de las muestras para el análisis se realiza en muestras frescas, recolectadas con EDTA, citrato o heparina. No se debe usar anticoagulantes que contengan yodoacetato en su composición. Las muestras deben ser almacenadas máximo por 7 días de 2 a 8 Cº, en caso de ser conservadas por más tiempo debe realizarse a – 80 Cº después de haber lavado los glóbulos rojos dentro de las 8 horas siguientes; las muestras serán estables hasta por 3 meses en estas condiciones. Las Hemoglobinas de las muestras refrigeradas entre 2 a 8 Cº son degradadas progresivamente y como consecuencia aparece una fracción débil correspondiente a la metahemoglobina, en la zona de migración de la HbS, o, en caso de ser HbC, puede aparecer una fracción degradada correspondiente a la HbC en po-sición anódica respecto a la HbA2; también la HbO-Arabe se pude degradar y migrar en la zona de HbS.
Conclusión
En conclusión, la electroforesis capilar estandarizada y validada actualmente en el Instituto de Re-ferencia Andinoes un análisis muy útil para investigar las anomalías cualitativas y cuantitativas de la Hemoglobina. La técnica de electroforesis capilar ofrece ventajas en automatización completa del análisis, separaciones rápidas y una excelente y eficiente resolución. Se considera una tecnología intermedia entre la electroforesis en zona en soporte y la cromatografía líquida. Elimina la realización de electroforesis a diferentes pH para la identificación de hemoglobinas con movilidades electrofo-réticas parecidas.
Composición electroforética 1
HbA1: 88.3%; HbF: 23%, HbS:20.8%; HbA2: 3.1%; y HbC: 4.8%.
Composición electroforética 2
HbA1: 67.2%; Hb indeterminada: 30.2%, HbA2: 2.6 %; En la zona 6 pueden ubicarse las siguientes variantes de la Hemoglobina:
D-Punjab, Stenleyville II, Osu Chistiansborg, Leiden, G-Philadelphia, Muravera, D-Bushman, G-Norfolk, entre otras.
Para mayor información contáctenos a través de los siguientes correos, en Colombia: [email protected] ; [email protected]; [email protected]: [email protected]; Perú: [email protected]; Panamá: panamá@iralabs.com; PBX: 290 0077; Calle 13 No 60-49, Bogotá-Colombia
