Material de Estudio Microbiología

7/25/2019 Material de Estudio Microbiología

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TÉCNICAS DE CONTEO

BACTERIANO



Conteo bacteriano

CARACTERÍSTICASSeñala la magnitud

de la población totalde microorganismos.

Los númerosobtenidos deben ser

calificados por latécnica.

Cada uno de losmétodos esdiferente.

Bacterias psicrófilas obacterias anaerobiasestrictas técnicas

especiales

Ocasionalmente constituyentes

químicos BIOMASA

Colonias rojo violeta típicas del crecimiento de Enterobacterias



PROCESOS

Definir los microorganismos a ser cuantificados

No se debe aplicar un método universal a cualquiermicroorganismo o hábitat

Dividir las tres fases: muestreo, procesado de muestras, y

el proceso de recuento.

Considerar el conteo para la interpretación de losresultados



Recuento de células totales

Recuento

Microscópico

directo

En

muestrassecas

Deben teñirse

En muestraslíquidas

Cámaras derecuento

(Petroff-Hausser)

Citómetro de flujo



Métodos directos

Métodos directos

FiltraciónCuando la cantidadde bacterias es muy

baja

NMP Los organismospor contar no

crecen en unmedio sólido.



PEtroff Hauser

Imagen 1



VENTAJAS:• No requiere un tiempo de incubación.

• Válida para los contadores electrónicos de células.

DESVENTAJAS:• Bacterias móviles son difíciles de contar.

• Células muertas presentan un aspecto similar al de

las vivas.• Concentración bastante elevada de células.



Recuento de células viables

• La célula viable es aquellacapaz de dividirse y formar unacolonia en el medio de cultivo.

• Se basa en que cada colonia

surge de una simple célula.• Posee dos enfoques

(Métodos) básicos

Imagen 2



1) Recuento en placa

método determinael número decélulas de la

muestra

formar colonias

sobre un mediosólido

mide el número decélulas viables

Procedimientopostula

cada célula viablepuede crecer y

dividirseformar una colonia

Desventajarequieren bastantetiempo lapso de 24

h

observación decolonias visibles



2)Vertido en placa

• Esta técnica se usa generalmente para bacterias aerobiasobligatorias.

Imagen 3



Imagen 4



Métodos indirectos

• BASADOS EN POBLACIONES BACTERIANAS YACTIVIDAD DE LAS MISMAS

M. Turbidez

Imagen 5



Turbidimetría

• “Turbidez” medida pormedio de unespectrofotómetro ocolorímetro

• Cantidad de luz quealcanza una célulafotoeléctrica

• No es un método útil paramedir la contaminación

en un líquido

Imagen 6



Actividad Metabólica

• La cantidad de ciertoproducto metabólico (Ej.CO2) es directamente

proporcional a lacantidad de bacteriaspresentes.

Imagen 7



Peso en seco

• Se extraen los hongos filamentosos o bacterias

• Se filtran de materiales extraños

• Se secan en un desecador

•

Se procede a pesar

Imagen 8



TEMPERATURA Y CRECIMIENTO

L t t f t l l id d d



La temperatura afecta a la velocidad decrecimiento

Cada bacteria muestra una curvacaracterística de tasa de crecimiento enfunción de la temperatura.

Donde podemos distinguir tres puntoscaracterísticos llamados temperaturascardinales

La temperatura ejerce dostipos de efectos opuestossobre los organismos vivos.



CLASES DE MICROORGANISMOS SEGÚN LA TEMPERATURA

Cada especie bacteriana tiene temperaturas cardinales distintas. Según elrango de temperaturas al que pueden crecer las distintas bacterias, se puedenestablecer 4 tipos principales:



Microorganismos psicrófilos

•Crecen a partir deentre -5 a 5ºC.•Temperaturas bajasóptimas.•Enzimas resistentes al

frío.•Gran cantidad deácidos grasosinsaturados en lamembrana plasmática

Existen colonias creciendo a los 0°c perono crecen bien a esa temperatura.



Psicrófilasobligadas

Tienen unatemperatura

óptima de 0-18ºC

Flavobacterium,Tiene un crecimiento

óptimo 13°C

Psicrófilasfacultativas o

psicrotolerantes OPSICRÓTROFAS

Tienen unatemperatura óptima

en torno a los 20-30ºC y máximas a los 35ºC.

Bacterias y hongospsicrotrofos



Microorganismos

mesófilos

• Temperaturas óptimas a los 25-40ºC y máximas entre 35 y 47ºC.•

Microorganismos que viven en ambientestemplados y tropicales.• Los simbiontes y parásitos, pertenecen a estacategoría.

Escherichia coli, Tieneuna temperatura

mínima es de 8°C,óptima de 39°C ymáxima de 48°C.



MicroorganismosTermófilos

• Únicas capaces de vivir por encima de 65ºCson todas procariotas.• Presentan temperaturas óptimas a 50-75ºC y

máximos entre 80 y 113ºC.

•Hipertermófilas.•Pueden presentar óptimoscercanos a los 100ºC.•Taxonómicamente pertenecenal dominio de las Archaea.

Termófilas

extremas



Microorganismoshipertermófilos

•Especies Quimioorganótrofas yQuimiolitótrofas.

• Velocidades de crecimiento rápidas y

tiempo de generación cortos (1h).• Archaeas > 100 o C→ cámaraspresurizadas



OXÍGENO Y CRECINIENTOBACTERIANO

• Formas de vida

• Hábitats microbianos anóxicos como:

-Fangos

-Pantanos-Suelos forestales inundados

-Vertidos de aguas negras

-Zonas profundas de la corteza terrestreEn estos hábitats anóxicos proliferanmicroorganismos, particularmente procariotas.



TIPOS DE

MICROORGANISMOS CONRELACIÓN AL OXIGENO

Microorganismos son muy variados encuanto a la necesidad o tolerancia deloxígeno.



DEPENDIENDO DEL EFECTO DEL

OXÍGENOAEROBIOS

• Son especies capaces de crecer a tensiones normales deoxígeno

• Respiran oxígeno en su metabolismo• Muchos aerobios pueden tolerar concentraciones mas elevadas

de oxigeno (oxígeno hiperbárico)

Clasificación

-Microaerofilos-Obligados o estrictos-Facultativos



AEROBIOS MICROAEROFILOS

Usan el oxígeno a niveles mas bajos que en el aire(requieren alrededor de 12%)

Causas-Limitada capacidad para respirar

-Portan alguna molécula sensible al oxígeno

Fig.1

Fig.2



AEROBIOS FACULTATIVOS

A condiciones apropiadas nutritivas y de cultivopueden crecer en condiciones:

-óxicas

-anóxicas

Fig.3 Fig.4



AEROBIOS OBLIGADOS O

ESTRICTOS

Microorganismos que necesariamente requierenoxígeno para su crecimiento.

Fig.5

Fig.6



ANAEROBIOSMicroorganismos que no pueden respiraroxígeno

Clasificación

-Aerotolerantes

-Obligados o estrictos



ANAEROBIOS AEROTOLERANTES

• Aquellos microorganismos que toleran eloxígeno

•

Pueden crecer en presencia de oxígeno• No pueden usarlo

Fig.7

Fig.8



ANAEROBIOS OBLIGADOS O

ESTRICTOSMueren en presencia de oxígeno

Hipótesis de su mortalidad:

•

Puede deberse a que son capases de eliminar algunosproductos que se originan en el metabolismo del oxígeno

Fig.9

Fig.10



CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS SEGÚN SU NECESIDADDE OXÍGENO



CRECIMIENTO MICROBIANO Y PH

• El ph es una funciónlogarítmica: cambio de 10

veces en la concentración dehidrogeniones.

• Ph neutro: =7

• Ph ácido: <7

•

Ph básico o alcalino: >7



Cada microorganismo tiene unrango de ph óptimo bien definidopara su crecimiento. Los ambientes naturales: ph 4-9

Pocas especies crecen por debajode 3 o por encima de 9 en ph.

Clasificación de bacterias según su ph:

Ácidófilos

Alcalófilos

Neutrófilos



ACIDÓFILOS

Organismos que crecen en ph bajo,generalmente hongos: ph 5 o inferior.

Acidófilos obligados: incapaces de creceren ph neutro.

Algunas especies:

Archaea: Sulfolobus, Thermoplasma yFerroplasma

Procariota+Acidófilo: Picrophilus oshimae(Ph 0.7)

Picrophilus oshimae



características

Lactobacillus acidophilus (probiótico).

La acidez y la solubilidad del metal que producen las bacteriasacidófilas desempeñan una función benéfica en minería.

Las bacterias Lactobacillus acidophilus tienen un crecimiento óptimo

en niveles bajos de pH, causando infecciones vaginales. Producen caries.



ALCALÓFILOS

Ph óptimo de crecimiento elevado: ph 10

Se encuentran en hábitats como: lagos

sódicos, suelos ricos en carbonatos. Alcalófilos mejor estudiados: Bacillus

firmus

Amplio rango de crecimiento: 7.5-11 ph

Son también alófilos (amantes de la sal) Bacillus firmus



APLICACIONES

• Enzimas Microbianas

• Proteasas y Lipasas

• Tienen aplicación industrial: Aditivos de detergentesdomésticos.

• Bacillus licheniformis

• Catalasas:

• Industria alimentaria: fermentación

• Industria textil: proceso de secado

• Vibrio cholerae causa el cólera en los seres humanos.



NEUTRÓFILOS

El citoplasma permanece neutroo próximo a la neutralidad. pH óptimo: 6-8

Intercambian potasio porprotones mediante un sistematransportador del tipo antiporte. Incluyen la mayoría de las

especies de microalgas y otrosorganismos que forman elfitoplancton , así como algunas

bacterias y levaduras que vivenen el suelo.



tampones

Sustancias amortiguadoras quemantienen el ph relativamenteconstante.

Se usan diferentes tampones paramantener diferentes valores de ph.

Por ejemplo: Fosfato potásico(KH2PO4), Carbonato Cálcico (CaCO3).

Péptidos y Aminoácidos de los medioscomplejos también tienen un fuerte

efecto amortiguador de pH.



EFECTO OSMÓTICOS SOBRE EL CRECIMIENTO BACTERIANO

Agua determina crecimiento de microorganismos.

Depende concentración de solutos.

Disponibilidad del agua se expresa como actividad de agua.

Agua se difunde desde regiones de alta a baja concentración de agua.

Balance de agua positivo.

Actividad hídrica y osmosis



Halófilos y organismos relacionados

Microorganismos tienen generalmente dependencia por NaCl.

Hálófilos: Necesitan NaCl.

Discretos y moderados.

Mayoria de microorganismos no prosperan en ambientes Halófilos.

Halotolerantes: Crecen mejor en ausencia de solutos.

Organismos con baja actividad hídrica son importantes para industriaalimenticia.

Halófilos extremos: ambientes salinos.

Osmófilos: alta concentración de azucares. Xerófilos: ambientes muy secos.



Solutos compatibles

Organismos en un medio con baja actividad hídrica obtienen aguaaumentando su concentración de solutos

Son sustancias orgánicas de bajo peso molecular utilizados pararegular el equilibrio osmótico que no deben inhibir procesos

bioquímicos Azúcares, alcoholes derivados de azúcares, aminoácidos y derivados



VIROLOGÍA

GENERALIDADES



Un virus es un conjunto de genes,compuestos de ADN o ARN. Unamembrana de lípidos de doble capaexterna al recubrimiento a la se llamaenvoltura. Los virus más pequeños, lostamaño virión (parvovirus) tienen cerca de20nm de diámetro, mientras que los virushumanos de mayor tamaño (poxvirus)tienen un diámetro aproximado de 300nm.

La partícula viral completa resultantese denomina virión. Los virus sehacen parásitos intracelulares

obligados los virus no tienen núcleo,citoplasma, mitocondria u organeloscelulares solo se reproducen en elinterior de células vivas

Su organización simple y acelularLa presencia de ADN o ARN perono ambos en la mayoría deviriones con algunas excepciones.

Su capacidad para reproducirse deforma independiente de lascélulas.

Fig 1 Fig2 2



Fig# 1

Fig# 2 6

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