CONTAMINACION MICROBIANA DE CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISISAGUA PARA HEMODIALISIS

RELEVAMIENTORELEVAMIENTOPERIODO 7/02 - 06/05PERIODO 7/02 - 06/05

CONTAMINACION MICROBIANA DE CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISISAGUA PARA HEMODIALISIS

RELEVAMIENTORELEVAMIENTOPERIODO 7/02 - 06/05PERIODO 7/02 - 06/05

LABORATORIO BELTRAN - ZUNINOLABORATORIO BELTRAN - ZUNINOLABORATORIO BELTRAN - ZUNINOLABORATORIO BELTRAN - ZUNINO

- Número de centros evaluados: 31

- Número total de muestras: 4.107

- Período de estudio: 1/7/02 - 30/6/05

- Número de centros evaluados: 31

- Número total de muestras: 4.107

- Período de estudio: 1/7/02 - 30/6/05

Evaluación de calidad microbiológica de agua para hemodiálisis

Evaluación de calidad microbiológica de agua para hemodiálisis

Requisitos microbiológicos/ metodología Requisitos microbiológicos/ metodología

Fuente Especificación PuntodeMuestreo

Método

AAMIRD 62

Heterotróficos: < 200 ufc/mlEndotoxinas:< 2 UE/ml

Heterotróficos < 2,000/ml

Punto deentrada alequipo ozonareprocesado

Dializado

Medio:TSA o equivalenteMétodo: filtración osuperficie; No ansa;No Agar SangreTemp: 35-37ºCTiempo: mín 48 hs

Requisitos microbiológicos/ metodología Requisitos microbiológicos/ metodología

Fuente Especificación PuntoDeMuestreo

Método

NormaISO13959(2002)

Heterotróficos: 100 ufc/ml

Endotoxinas: 5 UE/ml 1 UE/ml

Punto deentrada antesde dilución

Medio:TSA o equivalenteNo ansa;No Agar SangreTemp: 35-37ºCTiempo: mín 48 hsOpción: filtración eincubación R2A, 5días, 28 -32ºC

Requisitos microbiológicos/ metodología Requisitos microbiológicos/ metodología

Fuente Especificación Puntode Muestreo

Método

USP27 2004

Heterotróficos:máx 100 ufc/mlEndotoxinas:máx.2 UE/ml

Punto deentrada alequipo

Medio: TSA oequivalente (PCA)Temp.: 30-35 ºCTiempo: mín 48 hs(A.P.H.A.)

Farm.Europea2004

Aerobios viablestotales:Máx 100 ufc/mlEndotoxinas: 0,25 IUE/ml agua 0,5 IU/ml soluciónde uso

Agua paradilución deconcentradosde hemodiálisis

Método: generalde la farmacopeapara recuento(placa o filtración)Medio: Agarcaseina Soya osimilarTemp.: 30-35ºCTiempo: 5 días omenos

Análisis microbiológicosAnálisis microbiológicos

- Recuento de heterotróficos/ml

- Búsqueda de Pseudomonas fluorescens, putida y aeruginosa / 10 ml

- Recuento de coliformes totales /100 ml

- Búsquedas eventuales de microorganismos específicos

- Recuento de heterotróficos/ml

- Búsqueda de Pseudomonas fluorescens, putida y aeruginosa / 10 ml

- Recuento de coliformes totales /100 ml

- Búsquedas eventuales de microorganismos específicos

Análisis biológicosAnálisis biológicos

- Endotoxinas bacterianas- Endotoxinas bacterianas- Endotoxinas bacterianas- Endotoxinas bacterianas

Metodología de Referencia :Metodología de Referencia : Metodología de Referencia :Metodología de Referencia :

Alcance y aplicación: métodos destinados al análisis de aguaAlcance y aplicación: métodos destinados al análisis de aguapertenecientes a un amplio rango de calidad: agua potable, pertenecientes a un amplio rango de calidad: agua potable, industrial, superficie, etc. Métodos tomados como referenciaindustrial, superficie, etc. Métodos tomados como referenciapor la USP para el análisis para uso farmacéutico.por la USP para el análisis para uso farmacéutico.

Endotoxinas bacterianas:Endotoxinas bacterianas:US Pharmacopeia 27 - 2004US Pharmacopeia 27 - 2004

Análisis microbiológicos:Análisis microbiológicos:Standard Methods for the Examination of Water and Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, American Public Health Association, (APHA), 20 Ed.Wastewater, American Public Health Association, (APHA), 20 Ed.

Toma de muestraToma de muestra

Abrir llavedescartar

(según flujo)

Quemar o sanitizar pico

Descartaraprox. 200 ml

Recoger lamuestra(120 ml)

Refrigerar/transportar

Analizar (máx. 24 hs)

TécnicaAséptica

Recuento de HeterotróficosRecuento de Heterotróficos

Referencia: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, A.P.H.A., 20 Ed., 9215 C.Referencia: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, A.P.H.A., 20 Ed., 9215 C.

0,1 ml0,1 ml 0,1 ml0,1 ml 0,1 ml0,1 ml

MuestraMuestra

Condiciones de Incubación: 72 horas a 35 +/- 1 º C

Examen de colonias con lente magnificador

Condiciones de Incubación: 72 horas a 35 +/- 1 º C

Examen de colonias con lente magnificador

Medio de cultivo: Plate Count AgarMedio de cultivo: Plate Count Agar

Búsqueda de Pseudomonas aeruginosaBúsqueda de Pseudomonas aeruginosa

Referencia: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, A.P.H.A., 20 Ed., 9213 F.Referencia: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, A.P.H.A., 20 Ed., 9213 F.

10 ml10 ml

Caldo asparaginadoble concentraciónCaldo asparaginadoble concentración

48 horas a 35 º48 horas a 35 º

Luz UVLuz UV

Examinar fluorescencia(si hay dudas dejar24 hs a t. Amb.)

Examinar fluorescencia(si hay dudas dejar24 hs a t. Amb.)

ConfirmarP. aeruginosaConfirmarP. aeruginosa

++

MuestraMuestra

Recuento de coliformes totalesRecuento de coliformes totales

Referencia: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, A.P.H.A., 20 Ed. , 9222 B.Referencia: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, A.P.H.A., 20 Ed. , 9222 B.

MuestraMuestra

100 ml 100 ml

Filtrarmembrana 0,45 micras

Filtrarmembrana 0,45 micras

++

ConfirmarC. totales

Incubar 24 hsa 35 +/- 1 ºCIncubar 24 hsa 35 +/- 1 ºC

Transferira m-EndoTransferira m-Endo

P. aeruginosa P. aeruginosa en en caldo asparaginacaldo asparaginaal UV (258 nm)al UV (258 nm)

Coliformes totalesColiformes totales en m - Endoen m - Endo

Coliformes totalesColiformes totales en Lauril Triptosaen Lauril Triptosa

Biofilm luego de un tratamiento desinfectanteBiofilm luego de un tratamiento desinfectante

En presencia de endotoxinas bacterianas, el reactivo preparadoEn presencia de endotoxinas bacterianas, el reactivo preparado

por lisado enzimático de amebocitos lavados del cangrejo por lisado enzimático de amebocitos lavados del cangrejo

Limulus polifemus produce una reacción de coagulación enLimulus polifemus produce una reacción de coagulación en

cascada con la formación de un coágulo de naturaleza proteicacascada con la formación de un coágulo de naturaleza proteica

Principios biológicos:Principios biológicos:

Determinación de endotoxinas bacterianasDeterminación de endotoxinas bacterianas

1. Confirmación de sensibilidad de reactivo LAL ()

Control -agua apírógena + LAL

12

34

½ 2 ¼

= 0.125 UE/ml

Criterio aceptación: obtenida entre ½ y 2 del valordeclarado

- Ensayo por duplicado utilizando una dilución de la- Ensayo por duplicado utilizando una dilución de la

muestra, control positivo de endotoxina, muestra, control positivo de endotoxina,

verificación de ausencia de efecto inhibidor de verificación de ausencia de efecto inhibidor de

la muestra problema y control negativola muestra problema y control negativo

- Informe: menor (<) o mayor o igual (>=)que el límite - Informe: menor (<) o mayor o igual (>=)que el límite

dede

detección definido (2 UE/ml) detección definido (2 UE/ml)

2. Determinación de endotoxinas en muestra problema2. Determinación de endotoxinas en muestra problema

muestramuestra Controles + Control -

ConfiabilidadConfiabilidad

MuestreadoMuestreador/r/

AnalistaAnalista

Condiciones Condiciones ambientalesambientales

MétodoMétodo

MediosMediosreactivos/reactivos/materiales materiales

EquiposEquipos- - autoclavesautoclaves- estufas- estufas- filtros- filtros

Confiabilidad de los resultadosConfiabilidad de los resultados

Sistema de gestión

de calidad

RESULTADOS ANALITICOSRESULTADOS ANALITICOS

1º Julio 2002 - 30 Junio 20051º Julio 2002 - 30 Junio 2005

% Heterotróficos < 200 ufc/ml según punto de muestreoPeríodo 7/02 - 6/05

% Heterotróficos < 200 ufc/ml según punto de muestreoPeríodo 7/02 - 6/05

7379,9

91,996,6

92,2 95,1 96

0

1020

3040

50

6070

8090

100

C

Ab

O

Pt

Ps

Sl

Rc

C Ab O Pt Ps Sl Rc

Nº Muestras = 4107Nº Centros = 31

Pretratamiento: 75,1 % Agua tratada: 93,2%

83

9 8

93,2

5,51,3

010

203040

506070

8090

100

7/97 - 06/00 7/02 - 06/05

% < 200% 200 -1000% > 1000

% Heterotróficos - Circuito agua tratada Comparación de trieños 97-00 / 02-05% Heterotróficos - Circuito agua tratada Comparación de trieños 97-00 / 02-05

Nº muestras = 1384/2923Nº centros = 31 / 31

58

7887

91 91 94

0102030405060708090

100

97-98 98-99 99-00 - 02-03 03-04 04-05

% < 200 ufc/ml

Pico de Sala% Heterotróficos < 200 ufc/ml

Evolución anual

Pico de Sala% Heterotróficos < 200 ufc/ml

Evolución anual

Nº muestras = 1.917Nº centros = 29

Centro NºNº Muestras = 617Nº Centros = 23

Agua tratada Agua tratada % Heterotróficos según centro de % Heterotróficos según centro de

diálisisdiálisis

Enero 2004 - Junio 2005Enero 2004 - Junio 2005

0%

20%

40%

60%

80%

100%

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23

% >1000

% 200-1000

%<200

Centro Nº

Nº Muestras = 885Nº Centros = 21

Agua tratada Agua tratada % Heterotróficos según centro de % Heterotróficos según centro de

diálisisdiálisis

Julio 1997 - Junio 2000Julio 1997 - Junio 2000

0%

20%

40%

60%

80%

100%

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21

% >1000

% 200-1000

%<200

88

6 6

93,2

5,51,3

0

20

40

60

80

100

Cultivo baño Agua Tratada

% < 200% 200 -1000% > 1000

% Heterotróficos - Cultivo de baño% Heterotróficos - Cultivo de baño

Julio 2002 - Junio 2005Julio 2002 - Junio 2005

% Heterotróficos - Cultivo de baño% Heterotróficos - Cultivo de baño

Julio 2002 - Junio 2005Julio 2002 - Junio 2005Nº muestras baño = 171 Nº centros = 9

% P.aeruginosa, fluorescens y putida (+) según punto de muestreo

% P.aeruginosa, fluorescens y putida (+) según punto de muestreo

3,14,3

7,5

2 1,90,5

14,5

0

2

4

6

8

10

12

14

%

Nº muestras = 3.932Nº muestras = 3.932Total (+) = 2,5 % (sin Bñ)Total (+) = 2,5 % (sin Bñ)

Nº centros = 30Nº centros = 30

Ose C Ab O Ps Sl R

7/02-6/057/02-6/05

Baño

Nº centros implicados = Nº centros implicados = 16 centros16 centros

2 1,41,82,7

19

2 1,71,11,3

11

02468

101214161820

%

C Ab O Ps Baño C Ab O Ps

7/97 - 6/007/97 - 6/00

7/02-6/057/02-6/05

Baño

% P. aeruginosa (+) - Evolución % P. aeruginosa (+) - Evolución

2,11,70,60,6

3,1

8,1

17,8

3,62,8

02468

101214161820

% P. aeruginosa , flourescens, putida (+) según punto de muestreo

% P. aeruginosa , flourescens, putida (+) según punto de muestreo

%

Nº muestras 2005 = 1.231Nº muestras 2005 = 1.231Total (+) 2005 = 5,4% Total (+) 2005 = 5,4%

Ose C Ab O PS Ose C Ab O PS

7/02 - 12/047/02 - 12/04 1/05 - 6/051/05 - 6/05

Nº centros implicadosNº centros implicadosaño 2005: 13 centrosaño 2005: 13 centros

% Coliformes (+) según punto de muestreo% Coliformes (+) según punto de muestreo

1,61,5

1,1

0,4

0,8

0,3

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1,6

1,8

2%

Nº muestras = 3.645Total (+) = 0,8 %

Ose C Ab O Ps Sl Rc

7/02-6/057/02-6/05

Nº centros implicados: Nº centros implicados: 12 centros 12 centros

% Coliformes (+) según punto de muestreo% Coliformes (+) según punto de muestreo

0,8

0,60,7

0,6

0

1,61,5

1,1

0,4

0,8

0,3

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1,6%

C Ab O Ps Sl

7/97 - 6/007/97 - 6/00 7/02-6/057/02-6/05

Ose C Ab O Ps Sl

Nº centros implicados: Nº centros implicados: 12 centros 12 centros

% Coliformes (+) según punto de muestreo% Coliformes (+) según punto de muestreo

0

1 0,9

0,40,6

0,2

3,2

2,5

1,5

0,5

1,3

0,5

0

0,5

1

1,5

2

2,5

3

3,5%

Nº muestras 2005 = 1.159Total (+) 2005 = 1,2%

Ose C Ab O Ps Sl

7/02 - 12/047/02 - 12/04 1/05-6/051/05-6/05

Ose C Ab O Ps Sl

Nº centros implicadosNº centros implicadosaño 2005: 9 centrosaño 2005: 9 centros

Endotoxinas bacterianasEndotoxinas bacterianas

Nº Muestras: 13Nº Muestras: 13

Nº Centros: 5Nº Centros: 5

Resultados positivos: 0Resultados positivos: 0

Límites de detección: 5 y 2 UE/mlLímites de detección: 5 y 2 UE/ml

CONCLUSIONESCONCLUSIONES

Mejora sistemática del nivel de heterotróficos en el agua Mejora sistemática del nivel de heterotróficos en el agua tratada: 93,2% muestras aceptablestratada: 93,2% muestras aceptables Mejora sistemática del nivel de heterotróficos en el agua Mejora sistemática del nivel de heterotróficos en el agua tratada: 93,2% muestras aceptablestratada: 93,2% muestras aceptables

Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en diversos centrosdiversos centros

Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en el Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en el agua de entradaagua de entrada

Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en diversos centrosdiversos centros

Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en el Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en el agua de entradaagua de entrada

No se ha extendido el control de endotoxinas bacterianasNo se ha extendido el control de endotoxinas bacterianas

No se ha extendido el control de endotoxinas bacterianasNo se ha extendido el control de endotoxinas bacterianas